食品中有害污染物的檢驗(yàn)

第一節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的檢驗(yàn)

一、結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)

結(jié)構(gòu)：磷酸酯POOROXR(S)當(dāng)前第1頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)有機(jī)磷農(nóng)藥多為磷酸酯類或硫代磷酸酯類，其結(jié)構(gòu)式中R1、R2多為甲氧基（CH3O-）或乙氧基（C2H5O-）；Z為氧（O）或硫（S）原子：X為烷氧基、芳氧基或其他取代基團(tuán)?？梢院铣啥喾N有機(jī)磷化合物。過去我國生產(chǎn)的有機(jī)磷農(nóng)藥絕大多數(shù)為殺蟲劑，如常用的對硫磷、內(nèi)吸磷、馬拉硫磷、樂果、敵百蟲及敵敵畏等，近幾年來已先后合成殺菌劑、殺鼠劑等有機(jī)磷農(nóng)藥。

當(dāng)前第2頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)敵敵畏，dichlorvos，O,O-二甲基-O-（2，2-二氯乙烯基）磷酸酯。甲拌磷，phorate，O,O-二乙基-S-乙硫基甲基二硫代磷酸酯

當(dāng)前第3頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)甲基對硫磷（O,O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯）對硫磷（O,O-二乙基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯）

當(dāng)前第4頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)有機(jī)磷農(nóng)藥大多呈油狀或結(jié)晶狀，工業(yè)品呈淡黃色至棕色，除敵百蟲和敵敵畏之外，大多是有蒜臭味。不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑如苯、丙酮、乙醚、三氯甲烷及油類，對光、熱、氧均較穩(wěn)定，遇堿易分解破壞，敵百蟲例外。所以有機(jī)磷農(nóng)藥的提取與凈化應(yīng)在中性或酸性條件下進(jìn)行。敵百蟲為白色結(jié)晶，能溶于水，遇堿可轉(zhuǎn)變?yōu)槎拘暂^大的敵敵畏。

當(dāng)前第5頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)當(dāng)前第6頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

GB/T14553-2003

糧食、水果和蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥測定的氣相色譜法當(dāng)前第7頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)一、氣相色譜法

原理：樣品經(jīng)處理（提取、凈化和濃縮）后，有機(jī)磷農(nóng)藥組分經(jīng)氣相色譜柱分離進(jìn)入火焰光度檢測器，在富氫焰上燃燒，以HPO碎片的形式，放射出波長526nm的特性光譜。檢測該波長光線的強(qiáng)度，用色譜峰保留時間定性，峰高或峰面積定量。當(dāng)前第8頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

將蔬菜切碎混勻，稱取10.00g于250ml具塞錐形瓶中加入無水硫酸鈉脫水

加入活性炭脫色（加入中性氧化鋁脫油）

加入二氯甲烷提取，濾紙過濾揮發(fā)提取劑二氯甲烷定容至2.0ml。當(dāng)前第9頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

樣品處理：①水果、蔬菜和谷物樣品中加入丙酮水，以搗碎法用組織搗碎機(jī)勻漿提??；

組織搗碎機(jī)當(dāng)前第10頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

②勻漿液經(jīng)抽濾，真空抽濾裝置當(dāng)前第11頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

③濾液中加入足夠的氯化鈉固體使溶液處于氯化鈉飽和狀態(tài)，猛烈振搖，靜置，丙酮與水相分層，收集丙酮層（上層）；

④水相用二氯甲烷提??；

當(dāng)前第12頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

⑤將丙酮和二氯甲烷提取液合并，無水硫酸鈉脫水。

漩渦振蕩器當(dāng)前第13頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

⑥旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮，濃縮液用二氯甲烷轉(zhuǎn)移并定容。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀當(dāng)前第14頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)氮吹儀當(dāng)前第15頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)當(dāng)前第16頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)小結(jié)——樣品前處理

二氯甲烷提取

中性氧化鋁脫油

活性炭脫色

無水硫酸鈉脫水當(dāng)前第17頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)色譜測定：氣相色譜法

火焰光度檢測器（FPD）526nm

玻璃柱

固定相

擔(dān)體：ChromororbWAWDMCS

固定液：QF-1,SE-30,OV-17,

OV-101,PEGA,NPGA當(dāng)前第18頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)當(dāng)前第19頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

火焰光度檢測器（FPD）通常用來檢測含有硫磷元素的有機(jī)物。用火焰光度檢測器測定有機(jī)磷農(nóng)藥有高選擇性和高靈敏性的特點(diǎn)。當(dāng)前第20頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)第二節(jié)黃曲霉毒素B1黃曲霉毒素（AFT）是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉(aspergillusflavus)寄生曲霉(a.parasiticus)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機(jī)率最高。當(dāng)前第21頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)黃曲霉毒素在紫外線照射下能產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為B族和G族兩大類及其衍生物。B1是最危險的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常能檢測到。AFT目前已發(fā)現(xiàn)20余種。AFT主要污染糧油食品、動植物食品等；如花生、玉米，大米、小麥、豆類、堅(jiān)果類、肉類、乳及乳制品、水產(chǎn)品等均有黃曲霉毒素污染。其中以花生和玉米污染最嚴(yán)重。家庭自制發(fā)酵食品也能檢出黃曲霉毒素，尤其是高溫高濕地區(qū)的糧油及制品種檢出率更高。當(dāng)前第22頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)黃曲霉毒素相對分子量為312-346.難溶于水,易溶于油,甲醇,丙酮和氯仿等有機(jī)溶劑,但不溶于石油醚,己烷和乙醚中.一般在中性溶液中較穩(wěn)定,但在強(qiáng)酸性溶液中稍有分解,在pH9-10的強(qiáng)堿溶液中或在氧化劑存在下分解迅速.其純品為無色結(jié)晶,耐高溫,黃曲霉毒素B1的分解溫度為268℃紫外線對低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性.當(dāng)前第23頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)黃曲霉毒素主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生化學(xué)結(jié)構(gòu)上，黃曲霉毒素屬于二呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?，即含有一個二呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀〣1和G1的二呋喃環(huán)末端有雙鍵。二呋喃環(huán)末端有雙鍵者毒性較強(qiáng)并有致癌性當(dāng)前第24頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)當(dāng)前第25頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)主要為肝臟急性中毒的動物主要表現(xiàn)為肝臟損傷、肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞消失延遲、膽管增生、肝細(xì)胞脂質(zhì)消失延遲和肝出血慢性中毒主要表現(xiàn)為生長發(fā)育遲緩、肝臟出現(xiàn)亞急性或慢性損傷。可引起原發(fā)性肝細(xì)癌也可作用于其他器官，如腎臟、胃、直腸、乳腺、卵巢等當(dāng)前第26頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)黃曲霉毒素檢驗(yàn)——高效液相色譜法1、原理樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)C18柱分離，用帶熒光檢測器的高效液相色譜儀檢測，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。當(dāng)前第27頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)2、樣品處理（1）樣品提取稱取適量樣品，加少量水浸潤，混勻后加入三氯甲烷，振搖提取，再加入無水硫酸鈉，經(jīng)快速定性濾紙濾于具塞量筒中。當(dāng)前第28頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)2、樣品處理（2）樣品凈化和衍生化反應(yīng)將少量提取液通過裝有硅鎂吸附劑的層析管，用三氯甲烷-正己烷、三氯甲烷-甲醇淋洗除去雜質(zhì)，最后用丙酮-水洗脫AFT，收集于燒杯內(nèi)，當(dāng)前第29頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)當(dāng)前第30頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

在水浴上將溶劑揮干，用少量三氯甲烷溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移到具塞小試管中。取部分溶液加入正己烷、三氟乙酸，將試管塞緊，混勻，靜置30min，使AFTB1衍生為AFTB2a，用氮?dú)獯蹈?，加入少量流動相溶解供高效液相色譜測定。當(dāng)前第31頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)3、測定將按上述方法處理的衍生和未衍生樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀分析。熒光檢測器，Ex=360nm,Em=425nmC18色譜柱（250×4mm）甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀（1+1）

1.3ml/min當(dāng)前第32頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)樣品用三氟乙酸衍生的目的是確證樣品中是否含有AFTB1。當(dāng)前第33頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)確證樣品中是否含有黃曲霉毒素？未衍生化的衍生化的標(biāo)準(zhǔn)溶液（AFTB1）標(biāo)準(zhǔn)溶液（AFTB2a）樣品溶液(出峰情況判斷，有？無?)樣品溶液衍生化后在此出峰，可判斷樣品中檢出AFTB1當(dāng)前第34頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)一、四環(huán)素類抗生素的殘留檢驗(yàn)由放線菌產(chǎn)生的一類廣譜抗生素，是家畜、家禽常用的防病治病藥物。包括金霉素(CTC)

、土霉素(OTC)

、四環(huán)素（TC）及半合成衍生物。其結(jié)構(gòu)均為十二氫化并四苯基本骨架。

第三節(jié)抗生素殘留量當(dāng)前第35頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)57R5R7HCl金霉素OHH土霉素HH四環(huán)素當(dāng)前第36頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

抗生素結(jié)構(gòu)中都含有酸性的酚羥基和烯醇羥基及堿性的二甲氨基，該類藥物均為酸堿兩性化合物。57當(dāng)前第37頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

易溶于稀酸和稀堿。在我國四環(huán)素、土霉素和金霉素是允許使用，但有最高殘留限量規(guī)定。當(dāng)前第38頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)當(dāng)前第39頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)家禽當(dāng)前第40頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)當(dāng)前第41頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)高效液相色譜法的檢出限：四環(huán)素：0.15mg/kg

土霉素：0.20mg/kg

金霉素：0.65mg/kg當(dāng)前第42頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)HPLC法測定四環(huán)素類獸藥殘留

取一定量切碎的肉樣食品，用適量5%高氯酸振蕩提??；當(dāng)前第43頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

將提取液離心后，取上清液經(jīng)0.45um濾膜過濾；當(dāng)前第44頁\共有48頁\編于星期二\15點(diǎn)

反相色譜分離，紫外檢測器檢測，保留時間定性，工作曲線法定量。檢測波長：355nm；色譜柱:ODS柱；流動相：乙腈+0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液（35+65）（pH2.5