實(shí)驗(yàn)九菌落總數(shù)的測定

實(shí)驗(yàn)九菌落總數(shù)的測定一、目的要求學(xué)習(xí)掌握菌落總數(shù)測定的基本原理和方法，了解食品上微生物的分布和繁殖動(dòng)態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)說明菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標(biāo)志，也可以應(yīng)用這一方法觀察細(xì)菌在食品中繁殖動(dòng)態(tài)，以便對被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價(jià)時(shí)提供依據(jù)。每種細(xì)菌都有它一定的生理特性，培養(yǎng)時(shí)應(yīng)用不同的營養(yǎng)條件及其他生理?xiàng)l件（如溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH、需氧性質(zhì)等）去滿足其要求才能將各種細(xì)菌都培養(yǎng)出來。但在實(shí)際工作中，一般都只用一種常用的方法去作。細(xì)菌菌落總數(shù)的測定，所得結(jié)果，只包括一君能在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫性需氧菌的菌落總數(shù)。三、實(shí)驗(yàn)材料（1）培養(yǎng)箱36±1℃（2）恒溫水浴46±1℃（3）天平。（4）可調(diào)式電爐。（5）吸管1.0ml、10.0ml,標(biāo)有0.1ml單位刻度。（6）廣口瓶500ml，有蓋。（7）玻璃珠直徑5mm。（8）平皿皿底直徑9.0cm。（9）試管18×200mm。（10）酒精燈。（11）試管架。（12）研缽。（13）滅菌刀和剪刀。（14）滅菌鑷子。（15）酒精棉球。（16）玻璃蠟筆。（17）營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。（18）滅菌生理鹽水、分裝于試管中，每管9.0ml。（19）食品檢樣。四、檢驗(yàn)程序（圖9-1）五、方法步驟（一）檢驗(yàn)稀釋和培養(yǎng)1、以無菌操作，將檢樣25g（或25ml）剪碎放于含有225ml滅菌生理鹽水的廣口瓶內(nèi)（瓶內(nèi)置有適量玻璃珠）或滅菌研缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨用成1：10的均勻稀釋液。2、用1.0ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)液面），振搖試管混合均勻，作成1：100的稀釋液。3、另取1.0ml滅菌吸管，按上述操作作10倍稀釋，如此每遞增稀釋一次，即換1支1.0ml吸管。4、根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)?biāo)本污染程度的估計(jì)，選擇2-3個(gè)適宜稀釋度，分別作10倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋液的吸管移1.0ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。5、稀釋液移入平皿后應(yīng)及時(shí)將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂（可放于46×1℃水浴保溫）注入平皿約15ml，并移動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1.0ml滅菌生理鹽水的平皿內(nèi)作空白對照。6、待稀釋液入平皿后，翻轉(zhuǎn)平板，置36×1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h（肉、水產(chǎn)品、乳和蛋品為48±2h）取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（或ml）樣品所含菌落總數(shù)。（二）計(jì)算方法1、平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30-300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板應(yīng)采用兩上平板的平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落可計(jì)算半個(gè)平板后乘以代表全皿菌落數(shù)。2、稀釋度的選擇（1）應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表9-1例1）。（2）若有兩個(gè)稀釋度，其生長的菌落數(shù)在30-300之間，則視二者之比如何來決定。若其比值小于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2，則報(bào)告其中較小的數(shù)字（表9-1例2及3）。（3）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表9-1例4）。（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30則應(yīng)以稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以黧度倍數(shù)報(bào)告之（表9-1例5）。（5）若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1（1）乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表9-1例6）。（6）若所有黧度的平均菌落數(shù)無法不在30-300之間，其中一部分大于300，而另一部分則小于30，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表9-1例7）。3、菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，小于100時(shí)采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法來計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示（表9-1“報(bào)告方式”欄）。六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1、食品中檢出的菌落數(shù)是否代表該食品上污染的所有細(xì)菌數(shù)？為什么？2、為什么菌落總數(shù)測定用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在使用前要保持在46±1℃的溫度？3、為使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵？并說明理由。

酶專題實(shí)驗(yàn)（一）比較過氧化氫在不同條件下的分解加熱/FeCl3加熱/FeCl3/豬肝研磨液H2O2—————————→H2O+O2↑2.步驟與現(xiàn)象：試管編號(hào)1234H2O2溶液2mL2mL2mL2mL溫度常溫90℃常溫常溫FeCl3液——2mL—肝臟研磨液———2mL氣泡數(shù)量衛(wèi)生香燃燒3.實(shí)驗(yàn)結(jié)論與探討：（1）無機(jī)催化劑________和生物催化劑________能催化反應(yīng)進(jìn)行；（2）比較3、4號(hào)試管現(xiàn)象可知，無機(jī)催化劑的催化效率比酶的催化效率______，酶具有__________性的特點(diǎn)。4.科學(xué)方法——控制變量和對照試驗(yàn)（P78頁）（1）變量——實(shí)驗(yàn)中的變化因素。（2）人為控制的對實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行處理的因素叫作____________。對照組是_______號(hào)試管。1、2號(hào)試管的自變量是____________；1、3號(hào)號(hào)試管的自變量是____________；1、4號(hào)試管的自變量是____________。（3）因自變量改變而變化的變量稱作_____________。該實(shí)驗(yàn)中，因變量是_________________。而氣泡產(chǎn)生的多少、衛(wèi)生香的燃燒劇烈程度則不是，而是因變量的客觀反映。（4）除自變量外，實(shí)驗(yàn)過程中存在一些對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響的可變因素，稱作____________。除作為自變量的因素外，其余因素（無關(guān)變量）都應(yīng)保持__________________。（二）淀粉酶對淀粉和蔗糖的水解作用1.實(shí)驗(yàn)原理：淀粉酶蔗糖、淀粉都屬于非還原糖。淀粉酶淀粉（非還原糖）——————→麥芽糖（還原糖）斐林試劑（50-65斐林試劑（50-65℃）還原糖—————————→磚紅色沉淀↓2.步驟與現(xiàn)象：序號(hào)項(xiàng)目試管1試管21