分子診斷在移植配型中的應(yīng)用詳解演示文稿

分子診斷在移植配型中的應(yīng)用詳解演示文稿本文檔共55頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\21點44分（優(yōu)選）分子診斷在移植配型中的應(yīng)用本文檔共55頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\21點44分有兩位在某醫(yī)院進行了腎臟移植手術(shù)的患者：一位是張某，女，52歲，另一位是李某，男，25歲，手術(shù)前均為經(jīng)透析治療且身體狀況良好的尿毒癥病人，張某的移植腎來自尸腎，李某的移植腎來自其母親，移植術(shù)前兩人都抽血進行了一系列組織配型項目檢驗，其中一項HLA基因分型檢測結(jié)果顯示，張某與供者HLA配型不符，血型一致；李某與其母親HLA配型四點相合，兩點錯配，血型一致。但由于腎源缺乏，且張某家屬移植手術(shù)意愿強烈，張某和李某一樣都進行了移植手術(shù)；本文檔共55頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\21點44分張某術(shù)后2周出現(xiàn)移植區(qū)脹痛、少尿，血液中尿素氮升高、補體水平下降、血小板減少，經(jīng)醫(yī)生給予適當(dāng)?shù)拿庖咭种苿┲委熀缶徑?；李某術(shù)后植入腎功能良好，沒有出現(xiàn)上述類似張某的情況。一年后，張某因多次發(fā)生上述移植排斥反應(yīng)導(dǎo)致腎功能完全喪失而死亡，李某植入腎功能正常，身體狀況良好。本文檔共55頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\21點44分以上介紹了一個在器官移植中供受者HLA的基因配型是否符合對術(shù)后移植排斥反應(yīng)是否發(fā)生及受者存活率影響的典型例子，幫助醫(yī)生在進行器官移植手術(shù)前一定要依據(jù)供受HLA是否匹配謹慎決定移植手術(shù)是否進行。供受雙方HLA配型良好且受者為直系來源，移植手術(shù)成功率高，排斥反應(yīng)輕或不發(fā)生，受者存活率高。本文檔共55頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\21點44分移植(transplantation):指用自體或異體的正常細胞、組織或器官置換病變的或功能缺損的細胞、組織與器官，以維持和重建機體生理功能的治療方法。移植物（graft）供者（donor）受者（recipient）移植排斥反應(yīng)（graftrejection）一、移植相關(guān)概念本文檔共55頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\21點44分被移植的細胞、組織、器官稱為移植物（graft）,移植物的提供者稱為供者（donor）。移植物的接受者稱為受者或宿主（recipientorhost）。所植入的移植物能否被受者接受，與供、受者的遺傳背景密切相關(guān)。如果二者之間的遺傳背景存在差異，植入的移植物一般都會發(fā)生炎癥反應(yīng)甚至壞死，稱為移植排斥反應(yīng)（graftrejection）。本文檔共55頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\21點44分

目的：

救治末期器官衰竭、惡性血液病、腫瘤以及某些遺傳病。要求：

盡可能讓移植物能在受體體內(nèi)生存或暫存常時間。問題：排斥反應(yīng)。移植的目的和要求本文檔共55頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\21點44分早期有關(guān)器官移植的嘗試和研究本文檔共55頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\21點44分自體移植異種移植同種異型移植同種同型移植移植的類型本文檔共55頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\21點44分自體移植：指移植物取自受者自身。同種同型移植：指遺傳基因型完全相同或基本近似個體間的移植。同種異型移植：也稱同種異基因移植（allogeneictransplantation）指同種內(nèi)遺傳基因不同的個體間進行的器官移植，臨床移植多屬此類型。異種移植：指不同種屬個體間的移植。本文檔共55頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\21點44分二、移植排斥反應(yīng)發(fā)生的機制移植排斥反應(yīng)的本質(zhì)屬于特異性免疫應(yīng)答，引起移植排斥反應(yīng)的抗原稱為移植抗原或組織相容性抗原。在實質(zhì)器官移植中，宿主對供者器官產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)稱為宿主抗移植物反應(yīng)（hostversusgraftreaction,HVGR）,而在骨髓、造血干細胞移植中，移植物中的淋巴細胞可識別宿主抗原，進而攻擊宿主靶組織產(chǎn)生排斥反應(yīng)，稱為移植物抗宿主反應(yīng)（graftversushostreaction,GVHR）。本文檔共55頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\21點44分異種之間的移植無一例外地要失?。煌环N系內(nèi)不相關(guān)的個體之間的移植常常要失??；自體移植總是能成功；同種異體的受體對首次移植物排斥時間較長，但再次接受同一供體的移植物，則迅速被排斥；受體與供體間的血緣關(guān)系愈近，移植愈可能成功。

（一）移植排斥反應(yīng)的規(guī)律本文檔共55頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\21點44分有關(guān)排斥反應(yīng)的研究本文檔共55頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\21點44分

首次植皮第5天首次植皮第12天再次植皮第5天本文檔共55頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\21點44分宿主抗移植物反應(yīng)(host-versus-graftReaction,HVGR)，見于一般器官移植，包括超急性、急性、慢性排斥反應(yīng)移植物抗宿主反應(yīng)(hraft-versus-hostReaction,GVHR)，主要發(fā)生在骨髓移植和其他免疫細胞移植（二）同種異型移植排斥的分類及效應(yīng)機制本文檔共55頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\21點44分超急性排斥反應(yīng)（hyperacuterejection）指移植器官與受者的血管接通后立即或1～2天內(nèi)發(fā)生的排斥反應(yīng)發(fā)生時間

移植器官與受者血管接通后數(shù)分鐘至1～2天內(nèi)發(fā)生1.超急性排斥反應(yīng)本文檔共55頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\21點44分病理變化

血管內(nèi)凝血缺血、變性和壞死發(fā)生機制

以體液免疫為主，受者體內(nèi)預(yù)存供者的抗體抗ABO血型抗原的抗體抗HLA抗原的抗體抗VEC(血管內(nèi)皮細胞)抗原的抗體本文檔共55頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\21點44分急性排斥反應(yīng)（acuterejection）指在移植后數(shù)天至兩周左右出現(xiàn)的免疫排斥反應(yīng)，一旦發(fā)生進展迅速

發(fā)生時間

移植后數(shù)天至2周左右出現(xiàn)，80%～90%發(fā)生于移植后一個月內(nèi)2.急性排斥反應(yīng)本文檔共55頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\21點44分病理變化

①急性體液性排斥反應(yīng)血管內(nèi)皮細胞損傷為主要表現(xiàn)的急性血管炎②急性細胞性排斥反應(yīng)實質(zhì)細胞的壞死并伴有大量淋巴細胞、MΦ浸潤本文檔共55頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\21點44分發(fā)生機制：以細胞免疫為主①移植物血管損傷針對血管內(nèi)皮細胞表面同種異型抗原的IgG抗體補體依賴的細胞毒作用②實質(zhì)細胞損害CD4+Th1介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)CD8+Tc直接殺傷表達同種異型抗原的移植物細胞本文檔共55頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\21點44分慢性排斥反應(yīng)（chronicrejection）指發(fā)生于移植后數(shù)周、數(shù)月、甚至數(shù)年的免疫排斥反應(yīng)

發(fā)生時間

移植后數(shù)周、數(shù)月、甚至數(shù)年發(fā)生病理變化

間質(zhì)纖維化，移植物內(nèi)血管平滑肌細胞增生，血管硬化3.慢性排斥反應(yīng)本文檔共55頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\21點44分發(fā)生機制：體液免疫和細胞免疫共同作用（具體尚不完全清楚）①急性排斥反應(yīng)細胞壞死的延續(xù)和結(jié)果②炎癥性CD4+T細胞/MΦ相關(guān)的慢性炎癥③非免疫學(xué)因素誘發(fā)組織器官的退行性變本文檔共55頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\21點44分移植排斥反應(yīng)的分類和特點類型反應(yīng)時間反應(yīng)機制超急性術(shù)后數(shù)分鐘至幾小時受者體內(nèi)事先存在的天然抗體加急性1~5天T淋巴細胞急性7~14天T淋巴細胞慢性數(shù)月至數(shù)年抗體、補體、內(nèi)皮細胞增生本文檔共55頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\21點44分移植物抗宿主反應(yīng)（Graft-versus-hostreaction，GVHR）是由移植物中的抗原特異性淋巴細胞識別宿主組織抗原而發(fā)生的一種排斥反應(yīng)發(fā)生條件①宿主與移植物之間組織相容性不合②移植物中含有足夠數(shù)量的免疫細胞③宿主處于免疫無能或免疫功能嚴重缺陷狀態(tài)移植物抗宿主病4.移植物抗宿主反應(yīng)本文檔共55頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\21點44分移植物抗宿主病本文檔共55頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\21點44分移植物抗宿主病本文檔共55頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\21點44分GVHR發(fā)生情況一旦發(fā)生一般難以逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致移植失敗，嚴重損傷患者，甚至死亡

主要見于：骨髓移植（主要）、胸腺移植、脾移植、新生兒接受大量輸血

本文檔共55頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\21點44分

MHC(HLA)配型與移植排斥反應(yīng)02040608010012006122436術(shù)后時間存活率供者與受者相差一個HLA基因供者與受者相差兩個HLA基因返回章目錄本文檔共55頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\21點44分移植配型的基本原理

移植配型(又稱為HLA配型/組織配型):指在器官移植中檢驗供受者之間移植抗原（HLA）是否相配的一系列措施。目前主要檢測的是ABO抗原系統(tǒng)和HLA抗原系統(tǒng)。凡是由供、受者之間的等位基因差異而形成的多態(tài)性產(chǎn)物，均有可能作為組織相容性抗原，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答以清除“外來”的移植器官，引起移植排斥反應(yīng)。因此，移植術(shù)前必須進行一系列檢測，以盡可能選擇與受者組織相容性一致的供者。本文檔共55頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\21點44分能引起移植排斥反應(yīng)的抗原主要有人類主要組織相容性抗原（majorhistocompatibilitycomplex,MHC）、次要組織相容性抗原、血型抗原和組織特異性抗原。目前主要檢測的是ABO抗原系統(tǒng)和HLA抗原系統(tǒng)。

人類白細胞分化抗原（humanleukocyteantigen,HLA）是最重要的人類主要組織相容性抗原，本質(zhì)上，供、受者間HLA型別差異是發(fā)生急性移植排斥反應(yīng)的主要原因。因此，在供體選擇上科學(xué)運用移植配型技術(shù)提高供、受者間HLA位點匹配率是提高受者長期存活率的重要因素。本文檔共55頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\21點44分第二節(jié)

分子生物學(xué)檢驗在移植配型中的應(yīng)用—HLA的分子生物學(xué)分型

一、HLA遺傳學(xué)基礎(chǔ)Humanleucocyteantigen人類白血病抗原本文檔共55頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\21點44分一、HLA與器官移植

基本概念

①組織相容性（histocompatibility）器官或組織移植時供者與受者相互接受的程度，不相容就會出現(xiàn)排斥反應(yīng)（rejection），誘導(dǎo)排斥反應(yīng)的抗原稱為組織相容性抗原，也稱為移植抗原。本文檔共55頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\21點44分②主要組織相容性抗原（MHA）主要組織相容性抗原Majorhistocompatibilityantigen次要組織相容性抗原人類白細胞抗原HLA

Humanleukocyteantigen其中與移植排斥有關(guān)的主要為HLA-Ⅰ類和Ⅱ類抗原。

本文檔共55頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\21點44分③主要組織相容性復(fù)合體（MHC）編碼MHA(在人為HLA)的基因是一組呈高度多態(tài)性的基因群，集中分布于染色體上的特定區(qū)域，稱為主要組織相容性復(fù)合體（majorhistocompatibilitycomplex，MHC），MHC編碼的產(chǎn)物稱為MHC分子。本文檔共55頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\21點44分抗原

免疫系統(tǒng)抗原肽－MHCⅡ/Ⅰ分子復(fù)合物免疫應(yīng)答CD4+/CD8+T細胞（細胞免疫、體液免疫）

抗原性異物排除◆MHC分子為T細胞分化發(fā)育所必需

◆MHC分子為免疫應(yīng)答的啟動和調(diào)節(jié)所必需本文檔共55頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\21點44分(一)MHC/HLA的基因組成

人類的MHC又稱為HLA基因復(fù)合體，位于第6對染色體的短臂2區(qū)1帶3小帶（6p21.3）上，約4000kb。根據(jù)編碼分子的功能和分布的不同，可將整個復(fù)合體的基因分成三類：Ⅰ類、Ⅱ類和Ⅲ類基因。本文檔共55頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\21點44分HLA基因的分類

分類

基因座位

Ⅰ類基因

HLA-A-B-C

HLA-E-F-G-H-XⅡ類基因

HLA-DP-DQ-DR

HLA-DN-DO-DMⅢ類基因

位于Ⅰ和Ⅱ類基因之間主

要編碼某些補體和炎癥因

子（如：C4A，

C4B，C2，Bf等補體組分）本文檔共55頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\21點44分HLA抗原分布HLA-I類抗原分布于有核細胞表面；HLA-II類抗原主要表達在活化的Mφ、B細胞、樹突狀細胞等抗原提呈細胞，血管內(nèi)皮細胞及活化的T細胞表面。HLA-III主要是一些補體成分：如C2、C4、Bf等。本文檔共55頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\21點44分本文檔共55頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\21點44分本文檔共55頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\21點44分HLA抗原命名（第12屆國際會議）HLA-AHLA-BHLA-CHLA-DRHLA-DQHLA-DPA1B5B78Cw1DR1DQ1DPw1A2B7B47Cw2DR103DQ2DPw2A203B703B48Cw3DR2DQ3DPw3A210B8B49(21)Cw4DR3DQ4DPw4A3B12B50(21)Cw5DR4DQ5(1)DPw5A9B13B51(5)Cw6DR5DQ6(1)DPw6A10B14B5102Cw7DR6DQ7(3)A11B15B5103Cw8DR7DQ8(3)A19B16B52(5)Cw9(w3)DR8DQ9(3)A23(9)B17B53Cw10(w3)DR9A24(9)B18B54(22)DR10A2403B21B55(22)DR11(5)A25(10)B22B56(22)DR12(5)A26(10)B27B57(17)DR13(6)A28B2708B58(17)DR14(6)A29(19)B35B59DR1403A30(19)B37B60(40)DR1404A31(19)B38(16)B61(40)DR15(2)A32(19)B39(16)B62(15)DR16(2)A33(19)B3901B63(15)DR17(3)A34(10)B3902B64(14)DR18(3)A36B40B65(14)DR51A43B4005B67DR52A66(10)B41B70DR53A68(28)B42B71(70)A69(28)B44(12)B72(70)A74(19)B45(12)B73A80B46B75(15)B76(15)B81B77(15)Bw4Bw6

注：括號中為寬型抗原本文檔共55頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\21點44分HLA基因命名方法為：HLA+連字符（—）+基因所屬座位名+星號（*）+數(shù)字編號。如，HLA-A*0201代表HLA-A座位0201基因，HLA-DRB1*0101代表HLA-DRB1座位0101基因。HLA命名方法本文檔共55頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\21點44分HLA血清學(xué)命名方法為：HLA+連字符（—）+基因所屬座位名+數(shù)字編號。如HLA-A3，HLA-DR4。血清學(xué)命名中的數(shù)字編號與基因命名法數(shù)字編號的前兩位相對應(yīng)，例如，HLA-A3的數(shù)字編號相對應(yīng)的基因命名中的數(shù)字03，凡是HLA-A座位基因的前兩位數(shù)字是03者，其表達的產(chǎn)物都是HLA-A3抗原，都能夠與HLA-A3抗體結(jié)合。因此，血清學(xué)分型是同一分子的，它們的編碼基因不一定相同。例如至少有17個基因（HLA-A*0201～0217）的編碼產(chǎn)物為HLA-A2抗原。本文檔共55頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\21點44分HLA命名本文檔共55頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\21點44分歷年發(fā)現(xiàn)HLA抗原和基因的情況本文檔共55頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\21點44分（二）HLA的遺傳特點1．單倍型遺傳

haplotype由于一條染色體上HLA各位點的距離非常近，很少發(fā)生同源染色體之間的交換，因此親代的HLA以單倍型為單位將遺傳信息傳給子代。

ABabGHghABGHABghababGHgh（1）（2）（3）（4）全國高等醫(yī)藥院校教材-分子診斷學(xué)本文檔共55頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\21點44分本文檔共55頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\21點44分2．共顯性遺傳

共顯性（co-dominance）是指某位點的等位基因均能同等表達，二者的編碼產(chǎn)物都可在細胞表面檢測到。多數(shù)個體的HLA位點都是雜合子，但當(dāng)父親和母親在某位點上具有相同的等位基因時，其子代的這個位點就成為純合子。本文檔共55頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\21點44分

HLA復(fù)合體中每一個等位基因均為共顯性，從而大大增加了人群中的HLA表型的多樣性，達到108數(shù)量級。因此除了同卵雙生者外，無關(guān)個體間HLA型別完全相同的可能性極小。A2A10B40B16A1A2B8B35HLAmolecule：A1，A2，B8，B35

甲甲乙乙HLAmolecule：A2，A10，B40，B16

HLA共顯性表達本文檔共55頁；當(dāng)前第50頁