土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計數(shù)課件上學(xué)期高中生物選擇性必修1

【基礎(chǔ)判斷】1、稀釋涂布平板法對微生物計數(shù)時，欲將1ml樣品稀釋10倍，應(yīng)加入10ml無菌水（

）2、制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時，應(yīng)將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯中再加水去紙（

）3、在大腸桿菌的培養(yǎng)與分離實(shí)驗(yàn)中所需的棉花應(yīng)使用脫脂棉，因?yàn)槊撝薏灰孜?，可以防止雜菌污染（

）4、實(shí)驗(yàn)用過的帶菌培養(yǎng)基經(jīng)過加熱后才能倒掉（）5、平板劃線法和稀釋涂布平板法使用的接種工具在接種前都要在酒精燈火焰上灼燒，且處理方法完全相同（）×√√××【基礎(chǔ)判斷】6、大腸桿菌的純化培養(yǎng)過程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個階段（）7、接種前要了解固體培養(yǎng)基是否被污染可接種蒸餾水來培育檢測（）8、牛奶、熟啤、葡萄酒等飲品都可用巴氏消毒法消毒（）9、待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，在酒精燈火焰附近倒平板（）10、觀察菌落時，應(yīng)將培養(yǎng)皿蓋拿掉以利于看清菌落的形態(tài)特征（）√×檢測培養(yǎng)基被污染的方法是：將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。√××雯姐高中生物選修一第二章第二節(jié)2.2土壤中分解尿素微生物的分離與計數(shù)資料：嗜熱菌俗稱高溫菌，廣泛分布在溫泉、堆肥、地?zé)釁^(qū)土壤、火山地區(qū)以及海底火山地等?！舅伎?】若要獲得嗜熱菌，應(yīng)該優(yōu)選去什么地方尋找？為什么？例：可去熱泉中尋找，因?yàn)闊崛獰崛獪囟?0～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物，只有嗜熱菌脫穎而出?！舅伎?】基于上述思路，如何從土壤中分離與計數(shù)分解尿素的微生物？創(chuàng)設(shè)只有尿素分解菌能生存的環(huán)境p21活動（一）：設(shè)計培養(yǎng)基配方碳源：氮源：水：無機(jī)鹽：凝固劑：討論以上成分加或者不加？若要加則選擇什么物質(zhì)？活動（一）：設(shè)計培養(yǎng)基配方碳源：氮源：水：無機(jī)鹽：凝固劑：討論以上成分加或者不加？若要加則選擇什么物質(zhì)？葡萄糖尿素瓊脂①造成有利于該菌生長的環(huán)境；②抑制大多數(shù)微生物生長。以便分離與計數(shù)選擇作用【拓展】選擇培養(yǎng)基1、原理：2、用途：培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，同時促進(jìn)所需微生物的生長。【思考3】請闡述實(shí)驗(yàn)室分離分解尿素分解菌的原理？配置以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，不能分解尿素的微生物的生存受到抑制，只有分解尿素的微生物能夠生存，因?yàn)檫@類生物可以產(chǎn)生脲酶。培養(yǎng)、分離得到特定的微生物。【拓展】選擇培養(yǎng)基3、例：

加入

的培養(yǎng)基——分離酵母菌和霉菌等真菌

加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基——分離金黃色葡萄球菌

不加

——分離固氮菌

不加

的培養(yǎng)基——分離自養(yǎng)型微生物

以

為唯一氮源的培養(yǎng)基——分離分解尿素的細(xì)菌青霉素氮源的無氮培養(yǎng)基碳源的無碳尿素是否需要設(shè)置對照？為什么？【回顧】對照實(shí)驗(yàn)p231、含義：是指除了被測試的條件外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。2、目的：排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度/排除無關(guān)變量的干擾，提高結(jié)果的可信度。如何確認(rèn)培養(yǎng)基的滅菌是合格的？操作過程是沒有雜菌污染的？選擇未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。如何確認(rèn)該培養(yǎng)基起到了選擇作用？活動（二）：確認(rèn)培養(yǎng)基的選擇作用1、思路：制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照2、操作：將稀釋相同倍數(shù)菌液分別涂布在牛肉膏蛋白胨和選擇培養(yǎng)基上3、現(xiàn)象：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目4、結(jié)論：該培養(yǎng)基起到了選擇作用【比較歸納】對照實(shí)驗(yàn)的作用目的對照組現(xiàn)象結(jié)論判斷培養(yǎng)基有無雜菌污染培養(yǎng)基長出菌落培養(yǎng)基未長出菌落判斷培養(yǎng)基是否起到了選擇作用培養(yǎng)基菌落比選擇培養(yǎng)基數(shù)目多起到了選擇作用培養(yǎng)基菌落與選擇培養(yǎng)基數(shù)目基本一致無選擇作用未接種的培養(yǎng)基接種了等量同種菌液的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)基被雜菌污染培養(yǎng)基未被雜菌污染如何進(jìn)一步確認(rèn)該培養(yǎng)基的選擇作用？培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，酚紅指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。p26【拓展】鑒別培養(yǎng)基1、原理：根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，使直接肉眼即可辨別。2、用途：鑒別不同微生物。3、例：在伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)紫黑色p26【拓展】濾膜法：是檢測水樣中大腸細(xì)菌群的方法。將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌被截留在濾膜上，將濾膜貼于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后計數(shù)和鑒定濾膜上生長的大腸菌群菌落，依據(jù)過濾水樣計算每升或每100毫升水樣中的大腸菌群數(shù)。操作簡單、快速，主要適用于雜質(zhì)較少的水樣。

p26注意：①濾膜的孔徑應(yīng)小于大腸桿菌，過濾水樣應(yīng)足量；②為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性與準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)的同時應(yīng)同時進(jìn)行未接種培養(yǎng)基的培養(yǎng)（對照）例1、下表為某培養(yǎng)基的配方，有關(guān)敘述不正確的是（

）【多選】成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4伊紅-美藍(lán)瓊脂蒸餾水含量10g10g2g0.46g適量1000mlA．能在此培養(yǎng)基上生長的只有大腸桿菌B．培養(yǎng)基中葡萄糖作為碳源，牛肉膏可以作為碳源和氮源C．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用D．從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基ACD例2.(2018·全國Ⅰ，37)將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng)基。回答下列問題：(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制_____的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基。細(xì)菌選擇(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有_____________(答出兩點(diǎn)即可)。氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參與合成的生物大分子有_____________(答出兩點(diǎn)即可)。碳源、無機(jī)鹽蛋白質(zhì)、核酸細(xì)胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白質(zhì)、核酸等，故所加入的氮源可參與以上物質(zhì)的合成。(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是_____，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是_____________________________________________________________。淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈碘液淀粉遇碘變藍(lán)，向加有淀粉的培養(yǎng)基中加入碘液后培養(yǎng)基呈現(xiàn)藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍的淀粉被水解，形成透明圈，可根據(jù)透明圈的大小判斷產(chǎn)生淀粉酶的多少。(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：甲同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；乙同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是___________________________________________________________________。乙同學(xué)統(tǒng)計菌落數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在30～300個的平板，甲同學(xué)統(tǒng)計的3個平板中的菌落數(shù)在正常范圍內(nèi)且差距不大，比較準(zhǔn)確；乙同學(xué)統(tǒng)計的3個平板中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差。的結(jié)果中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差活動（三）：實(shí)驗(yàn)土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品稀釋培養(yǎng)觀察涂布平板①取樣條件：肥沃、富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，

酸堿度接近中性且潮濕的土壤。②取樣部位：距地表約3～8cm的土壤層。土壤表層微生物數(shù)量多，不易分離出分解尿素的微生物。③操作：從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。計數(shù)鑒定活動（三）：實(shí)驗(yàn)土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品稀釋培養(yǎng)觀察涂布平板計數(shù)鑒定制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，若在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，則說明該培養(yǎng)基起到了選擇作用?；顒樱ㄈ簩?shí)驗(yàn)土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品稀釋培養(yǎng)觀察涂布平板計數(shù)鑒定①稀釋目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板②稀釋倍數(shù)不同的原因：不同微生物在土壤中含量不同活動（三）：實(shí)驗(yàn)土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品稀釋培養(yǎng)觀察涂布平板計數(shù)鑒定菌落特征作為菌種鑒定的依據(jù)【操作提示】一、無菌操作1、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。2、應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。二、做好標(biāo)記注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等（寫在皿底）。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價p25【基礎(chǔ)強(qiáng)化】1、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)（1）分離原理：土壤中的細(xì)菌能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣?/p>

，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到

作用。（2）統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用

法。（3）實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→

→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的

。2、分解尿素的細(xì)菌能產(chǎn)生脲酶，將尿素分解產(chǎn)生氮?dú)猓ǎ?、在尿素培養(yǎng)基上長出的菌落一定是尿素分解菌（）脲酶催化稀釋涂布平板法樣品稀釋計數(shù)×還可能是固氮菌×4、尿素為分解尿素的細(xì)菌提供碳源（）5、培養(yǎng)基中加入尿素為唯一氮源的原因是只有尿素分解菌能分解尿素為生命活動供能（）6、尿素分解菌的代謝類型是自養(yǎng)需氧型，所以實(shí)驗(yàn)中需要振蕩培養(yǎng)，為其提供更多的氧氣（）7、涂布平板操作時，用涂布器直接沾取菌夜均勻涂布在培養(yǎng)基表面（）8、計數(shù)時，在同一稀釋度下，任取3個平板對其中的菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計，取其均值即可（）×××①不同平板間差異不大②菌落數(shù)量在30~300之間尿素只是氮源不是能源尿素分解菌的代謝類型是異養(yǎng)需氧型××9、某實(shí)驗(yàn)小組要完成課題“從土壤中外離出能分解尿素的細(xì)菌”，問答下列問題：（1）在該實(shí)驗(yàn)中，配制培養(yǎng)基需要以______為唯一氮源。該培養(yǎng)基中_______（填“需要”或“不需要”）添加葡萄糖，原因是：若要驗(yàn)證該培養(yǎng)基具有選擇作用，需要設(shè)置_______________________________________________________作為對照，當(dāng)___________________________時，即可說明該培養(yǎng)基具有選擇作用。尿素需要尿素分解菌為異養(yǎng)生物，需要葡萄糖為其提供碳源在相同稀釋度下接種等量的相同樣品的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落明顯多于該培養(yǎng)基上的菌落在接種前需要對樣品進(jìn)行稀釋處理，以保證獲得菌落數(shù)在__________范圍、適于計數(shù)