動物細(xì)胞融合課件

選修3現(xiàn)代生物科技專題2.2細(xì)胞工程2.2.2動物細(xì)胞融合與單克隆抗體1ppt課件.

“番茄—馬鈴薯”（理想圖）

通過長期的實(shí)驗(yàn)，科學(xué)家們采用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了“番茄—馬鈴薯”植株。2ppt課件.雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化過程植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁去壁人工誘導(dǎo)方法？植物細(xì)胞B植物體細(xì)胞雜交技術(shù)纖維素酶、果膠酶等物理法：離心、振動、電激等化學(xué)法：聚乙二醇等試劑篩選3ppt課件.如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？動物細(xì)胞也能融合嗎？異想天開4ppt課件.動物細(xì)胞的全能性會隨著動物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到抑制，分化潛能逐漸變?nèi)?ppt課件.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體技術(shù)動物細(xì)胞核移植技術(shù)動物細(xì)胞工程常用技術(shù)6ppt課件.思考題1.植物體細(xì)胞雜交時首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？

酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無需，因?yàn)閯游锛?xì)胞無細(xì)胞壁3.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、振動、電激等物理方法；聚乙二醇等化學(xué)方法4.動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？不能，只能形成雜種細(xì)胞可用胰蛋白酶將細(xì)胞分散7ppt課件.一、動物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：

動物細(xì)胞融合（cellfusion）也稱為細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。

融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。結(jié)果：“2個或多個動物細(xì)胞”→“1個雜交單核細(xì)胞””8ppt課件.2、誘導(dǎo)方法物理法：離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。舉例：仙臺病毒紫外線喪失感染性保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）9ppt課件.用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核

滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成單核雜交細(xì)胞原理：細(xì)胞膜具有一定的流動性有絲分裂10ppt課件.4、過程：動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合雜交細(xì)胞AB

有絲分裂（膜融合、質(zhì)融合、核融合）注意：動物細(xì)胞的融合也需要把多個兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞。3、原理：細(xì)胞膜的流動性11ppt課件.6、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體。5、意義：

突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。12ppt課件.植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理誘導(dǎo)方法結(jié)果用途意義細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振動、電刺激）化學(xué)（PEG）物理、化學(xué)方法滅活的病毒培育新品種制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾素等形成雜種植株形成雜種細(xì)胞，生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品突破有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能13ppt課件.1、在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是A．誘導(dǎo)融合的方法完全相同B．所用的技術(shù)手段完全相同C．所采用的原理完全相同D．都能形成雜種細(xì)胞D14ppt課件.2、下列關(guān)于動物細(xì)胞融合，敘述正確的是A．動物細(xì)胞融合后形成的具有原來兩個或多個動物細(xì)胞遺傳信息的雙核或多核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞B．原理是細(xì)胞的全能性C．打破生殖障礙，使遠(yuǎn)緣雜交成為現(xiàn)實(shí)D．常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、離心等3、動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是A.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞DB15ppt課件.1.什么是抗體？2.主要分布在哪里？3.由什么細(xì)胞產(chǎn)生提問？

抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。二、制備單克隆抗體技術(shù)主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。16ppt課件.

抗體

抗原B淋巴細(xì)胞刺激增殖分化效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）分泌每一個漿細(xì)胞只能分泌一種抗體4.傳統(tǒng)抗體的生產(chǎn)方法及缺陷？反復(fù)注射抗原克隆單一的效應(yīng)B細(xì)胞不能無限增殖產(chǎn)量低、純度低抗體特異性差17ppt課件.1、設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞——只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞——能無限增殖米爾斯坦和科勒雜交細(xì)胞2、制備過程：繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)：（一）單克隆抗體的制備既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體18ppt課件.注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體19ppt課件.

抗原（羊的紅細(xì)胞）注射到小鼠體內(nèi)獲取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合滅活的病毒、PEG多種雜交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞抗體陽性檢測足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔培養(yǎng)液小鼠腹水單克隆抗體篩選克隆化培養(yǎng)（一）單克隆抗體的制備篩選(動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù))(動物細(xì)胞融合技術(shù))20ppt課件.

制備單克隆抗體過程中兩次篩選第一次篩選是將未融合的B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞以及BB融合、瘤瘤融合的細(xì)胞通過選擇培養(yǎng)基淘汰，篩選出雜交瘤細(xì)胞。第二次篩選是將產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞通過細(xì)胞培養(yǎng)用相應(yīng)抗原檢測的辦法篩選出來。因?yàn)閺捏w內(nèi)取免疫過的B淋巴細(xì)胞時可以取出很多種，因此形成的雜交瘤細(xì)胞也有很多種，所以需篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。21ppt課件.骨髓瘤細(xì)胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞（選擇培養(yǎng)基）（抗體檢測）細(xì)胞融合雜交細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，產(chǎn)量大22ppt課件.

①作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合②用于運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療（二）單克隆抗體的應(yīng)用既不損傷細(xì)胞，又減少了用藥劑量，療效高、毒副作用小的新型藥物優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速23ppt課件.動物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體技術(shù)過程：不同的動物細(xì)胞雜交細(xì)胞原理：

.應(yīng)用：主要用于制備

。

制備：獲取

細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合、篩選

細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)提取單克隆抗體應(yīng)用：作為

，用于治療疾病或運(yùn)載藥物。

誘導(dǎo)劑細(xì)胞膜的流動性單克隆抗體B淋巴雜交瘤生物導(dǎo)彈課堂小結(jié)：24ppt課件.1、單克隆抗體是指（）

A.單個骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體

B.單個B淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體C.單個雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度單一的抗體D.單個抗體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體C2、“生物導(dǎo)彈”是指（）

A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞

D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物

D練一練25ppt課件.3.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞③小鼠骨髓瘤細(xì)胞④骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞

A.②④B．①③⑤

C.①②③④

D．②③C26ppt課件.4.生產(chǎn)單克隆抗體時，在培養(yǎng)基中加入某種試劑能篩選出雜交瘤細(xì)胞，該試劑的作用是

A．能選擇性抑制骨髓瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制

B．能阻止淋巴細(xì)胞的原癌基因被激活

C．能抑制淋巴細(xì)胞的DNA復(fù)制

D．能阻止雜交瘤細(xì)胞核糖體上所有蛋白質(zhì)的合成A27ppt課件.5．在現(xiàn)代生物科技的應(yīng)用中，需要進(jìn)行檢測與篩選的是（雙選）(

)A．對植物的離體組織進(jìn)行培養(yǎng)，大規(guī)模培育優(yōu)良品種B．將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，制備單克隆抗體C．利用人的皮膚細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，解決自體移植皮膚不足的問題D．將抗蟲基因?qū)胫参锛?xì)胞，培育具有抗蟲特性的新植株植物組織培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)基因工程BD28ppt課件.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的細(xì)胞可以保持正常的二倍體核型。制備單克隆抗體B淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代10B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC因?yàn)闆]有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生此種抗體的效應(yīng)B細(xì)胞29ppt課件.作業(yè)：完成《創(chuàng)新設(shè)計》P30~3430ppt課件.A、B細(xì)胞為動物細(xì)胞,請據(jù)圖回答問題:A細(xì)胞B細(xì)胞C細(xì)胞D細(xì)胞(1)若A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞，B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞,那么D細(xì)胞稱為

細(xì)胞,由D細(xì)胞連續(xù)分裂產(chǎn)生大量細(xì)胞的過程，稱為

。雜交瘤克隆練一練31ppt課件.(2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是

,合成該物質(zhì)的場所是

,它是由

控制合成的,合成過程包括

和

兩個重要步驟.球蛋白核糖體基因轉(zhuǎn)錄翻譯(3)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有

作用,與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于

強(qiáng)

高.免疫特異性靈敏度32ppt課件.(4)若A為人細(xì)胞,B為鼠細(xì)胞,用同位素標(biāo)記A細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì),B不標(biāo)記,在C細(xì)胞時,檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個細(xì)胞一半有放射性另一半沒有.在D細(xì)胞時,檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個細(xì)胞都有放射性,請解釋原因

.構(gòu)成細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)分子大都可以流動33ppt課件.