微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查-課件

微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查【基本要求】1.進(jìn)微生物實(shí)驗(yàn)室必須穿好白大衣，離室需脫下反折。2.實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)物品一律禁止帶入實(shí)驗(yàn)室。嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)食、飲水和喧嘩打鬧。3.手拿培養(yǎng)物后或出實(shí)驗(yàn)室前要洗手；避免有菌材料濺出；破損器材及時(shí)處理并報(bào)告。4.實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中產(chǎn)生的廢料要扔在指定容器內(nèi)；實(shí)驗(yàn)完畢清理臺(tái)面，值日生認(rèn)真打掃衛(wèi)生，關(guān)閉水電，門窗，洗手后離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。2微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查1.實(shí)驗(yàn)室生物安全；“有菌意識(shí)，無(wú)菌操作觀念”的樹(shù)立。2.細(xì)菌的人工培養(yǎng)以及細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查（革蘭染色）。3.細(xì)菌在自然界的分布，消毒滅菌及理化因素對(duì)細(xì)菌的影響。

內(nèi)容微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的人工培養(yǎng)微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查二、細(xì)菌的人工培養(yǎng)

培養(yǎng)細(xì)菌的目的，是從不純的被檢材料中找出特定的細(xì)菌或全部細(xì)菌，這一過(guò)程稱為分離培養(yǎng)。如果只是培養(yǎng)性質(zhì)明確的一種細(xì)菌，則稱為純培養(yǎng)。為了從被檢材料中分離出所要檢查的細(xì)菌，可以利用多種性質(zhì)不同的選擇性培養(yǎng)基，檢查各種不同的目的細(xì)菌。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的培養(yǎng)基：（一）培養(yǎng)基的定義：培養(yǎng)基是人工方法配制的含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需物質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。其必須本身無(wú)菌，一般PH調(diào)至7.2~7.6。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水碳源氮源無(wú)機(jī)鹽生長(zhǎng)因子微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查（二）制備原則:1.調(diào)配營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨（氮源），牛肉膏，氯化鈉，蒸餾水。2.調(diào)配PH：加入緩沖劑，保持PH穩(wěn)定。3.消毒滅菌。滿足a充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)b合適的PH值c無(wú)菌就可制成基礎(chǔ)培養(yǎng)基微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查液體培養(yǎng)基+1.5~2.5%瓊脂固體培養(yǎng)基+0.3~0.5%瓊脂半固體培養(yǎng)基（三）分類：1、按物理性狀分類：大量繁殖細(xì)菌觀察細(xì)菌動(dòng)力短期保存菌種細(xì)菌的分離和純化微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查

液體培養(yǎng)基固體斜面培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體平板培養(yǎng)基微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2、按用途分：(1).基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有大多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的基本營(yíng)養(yǎng)成分。最常用的為肉湯培養(yǎng)基(2).增菌培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加生長(zhǎng)因子（eg:血清等）或微量元素等其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或特殊抑制劑。

如血平板：5-10%脫纖維羊/兔血，（60°C左右加入血）。巧克力平板:80°C左右加入血。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查(3).選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種/些化學(xué)物質(zhì)，能抑制某類細(xì)菌生長(zhǎng)而使另一類細(xì)菌生長(zhǎng)，從而將后者選擇出來(lái)。

常用于腸道致病菌的分離與選擇培養(yǎng)。(4).厭氧培養(yǎng)基：用于厭氧菌的分離、培養(yǎng)和鑒定。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查血平板巧克力平板MacConkey平板X.L.D平板Sabourand平板Mycosel平板幾種常用培養(yǎng)基微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查(5).鑒別培養(yǎng)基：根據(jù)各種細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及代謝產(chǎn)物不同，在培養(yǎng)基中加入底物和指示劑來(lái)鑒別細(xì)菌。1）藍(lán)色半固體培養(yǎng)基2）無(wú)色半固體培養(yǎng)基3）基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基（溴麝香草酚藍(lán)）（醋酸鉛）微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查鑒別培養(yǎng)基細(xì)菌動(dòng)力鑒別細(xì)菌生化反應(yīng)鑒別微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查三、各種培養(yǎng)基的接種在醫(yī)療實(shí)踐中或微生物試驗(yàn)中防止周圍環(huán)境中的微生物污染操作對(duì)象，同時(shí)防止操作對(duì)象的微生物污染周圍環(huán)境。1.四種接種方式：接種針用于穿刺接種細(xì)菌（半固體培養(yǎng)基），接種環(huán)用于固體、液體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種。（相對(duì)無(wú)菌）

2.任何一個(gè)實(shí)驗(yàn)，操作前均應(yīng)在器皿上做標(biāo)記：時(shí)間，菌種，組別。培養(yǎng)皿一般標(biāo)記在皿底。一）無(wú)菌操作微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查接種環(huán)的灼燒滅菌先將環(huán)端燒熱，將接種環(huán)提起垂直放在火焰上，燒紅，環(huán)斜放，沿環(huán)向上，至金屬桿，再移向環(huán)端。來(lái)回通過(guò)火焰3次，冷卻。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3．接種。注意：整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程都要非常小心，不要碰翻酒精燈，以免燒傷。（1）用左手大姆指、食指、中指和無(wú)名指拿住菌種試管，右手?jǐn)Q松棉塞、不取下。接種管宜放在菌種管上面（2）右手拿接種環(huán)，在火焰上燒灼滅菌，特別是箍處。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查（3）火焰邊取下兩個(gè)棉塞，不能放下；燒灼管口一周。（4）將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，冷卻后，輕輕挑取少量菌體，立即將接種環(huán)抽出。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查（6）抽出接種環(huán)后，燒管口，塞棉塞，接種環(huán)滅菌。（5）火焰旁將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸到斜面培養(yǎng)基的底部，由里向外畫(huà)蛇形細(xì)線，線要畫(huà)得細(xì)些。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查（二）接種方法1.平板劃線接種法：目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌。方法：1）連續(xù)劃線法：適用于樣本含細(xì)菌量少，如血液標(biāo)本2）分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本，如糞便標(biāo)本微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查固體平板培養(yǎng)基微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2.固體斜面培養(yǎng)基接種法：作用：觀察細(xì)菌的培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、保存菌種。接種方法：連續(xù)劃線法。生長(zhǎng)現(xiàn)象：呈菌苔樣生長(zhǎng)。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3.半固體培養(yǎng)基接種法：11作用：檢測(cè)細(xì)菌動(dòng)力、生化反應(yīng)接種方法：接種針穿刺法---用接種針中央直刺，一條線路，底部留空生長(zhǎng)現(xiàn)象：沿穿刺線生長(zhǎng)----無(wú)動(dòng)力沿穿刺線擴(kuò)散生長(zhǎng)（呈云霧狀或羽毛狀）---有動(dòng)力微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查4.液體培養(yǎng)基接種法作用：增菌及檢測(cè)生化反應(yīng)。接種方法：研磨接種。生長(zhǎng)現(xiàn)象：渾濁、沉淀、菌膜樣生長(zhǎng)。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌培養(yǎng)法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：★培養(yǎng)溫度：37℃（采用恒溫培養(yǎng)箱）★培養(yǎng)時(shí)間：18～24h微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌的人工培養(yǎng)一、細(xì)菌在自然界的分布1.空氣中細(xì)菌的檢查：每班兩個(gè)血平板，標(biāo)記方法：在室內(nèi)選擇一處放一個(gè)平皿，揭開(kāi)皿蓋，暴露放置10min，即蓋上皿蓋，放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。

微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2.人體表面細(xì)菌的檢查---手指（每組1個(gè)平皿）方法：取一普通平皿培養(yǎng)基，一部分標(biāo)記“前”，另一部分標(biāo)記“后”，然后將手指在標(biāo)記“前”的部分沾一下，洗手后在標(biāo)記“后”的部分沾一下。放入37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3.人體內(nèi)部細(xì)菌的檢查--咽喉部方法：用“咳碟法”進(jìn)行檢查，取一個(gè)血瓊脂平皿培養(yǎng)基，打開(kāi)平皿蓋，置于口腔前約10cm，對(duì)著平皿咳嗽幾次，標(biāo)記時(shí)間，姓名，然后放入37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察菌落特征。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查二、外界因素對(duì)細(xì)菌的影響：1.物理因素對(duì)細(xì)菌的影響：

紫外線：全班兩份普通平板：一組大腸桿菌，一組葡萄球菌，比較紫外線對(duì)G+，G-的抑制作用。方法：取普通瓊脂平皿，用用密集劃線法接種細(xì)菌，然后將平皿蓋遮蓋一半，用紫外線照射30min，然后放入37℃溫箱中孵育24h后觀察。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2.化學(xué)消毒劑：每組普通平板1個(gè)，密集劃線法。

用鑷子取無(wú)菌圓形濾紙片，蘸消毒藥液（75％酒精、84消毒液或碘酒），當(dāng)濾紙片被提出消毒液面后，應(yīng)與化學(xué)消毒劑瓶口接觸停留去除多余藥液，然后將其貼在已接種有細(xì)菌的平板表面，貼上后用鑷子輕輕壓一下濾紙片。紙片要平整，各片之間距離要大致相等。每浸一種藥液，鑷子要滅菌使用。

37℃孵育24h，明天觀察抑菌環(huán)情況。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3、抗生素密集劃線法操作同化學(xué)消毒劑青霉素鏈霉素慶大霉素青霉素慶大霉素鏈霉素微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查三、細(xì)菌的生化實(shí)驗(yàn)：1.葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)：藍(lán)色半固體培養(yǎng)基對(duì)面兩小組，一組大腸桿菌，一組葡萄球菌2.吲哚試驗(yàn)：液體培養(yǎng)基，三菌均可。3.硫化氫試驗(yàn)：半固體無(wú)色培養(yǎng)基。兩小組大腸桿菌，兩小組葡萄球菌，四小組變形桿菌。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查四、增殖細(xì)菌：斜面培養(yǎng)基，三菌均可。各組分開(kāi)，G+，G-。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查問(wèn)題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.接種操作為什么一定要在火焰旁邊進(jìn)行？答：空氣中存在有大量的微生物，而接種燈的火焰旁能形成一個(gè)無(wú)菌區(qū)域，在這里操作，可以避免雜菌污染。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查Thankyouforyourattention！微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查今天大家首先觀察一下昨天接種的細(xì)菌的生長(zhǎng)情況微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查1、液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象混濁：大多數(shù)細(xì)菌沉淀：多見(jiàn)于鏈狀排列的細(xì)菌菌膜：多見(jiàn)于專性需氧菌菌膜菌沉淀均勻渾濁對(duì)照微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2、半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長(zhǎng)，穿刺線邊緣模糊。無(wú)鞭毛細(xì)菌：只沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線邊緣清晰。A、有動(dòng)力B、無(wú)動(dòng)力C、空白對(duì)照微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3、細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌落：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，形成單一肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)。

特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性。菌落與菌苔菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查一、細(xì)菌在自然界的分布：1.空氣中細(xì)菌的分布空氣中攜帶有微生物的氣溶膠粒子在地心引力的作用下，自然垂直沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。意義：1）通過(guò)細(xì)菌的菌落數(shù)來(lái)評(píng)估空氣中細(xì)

菌的含量2）通過(guò)菌落的形態(tài)來(lái)鑒別細(xì)菌的種類3）通過(guò)本實(shí)驗(yàn)樹(shù)立有菌和無(wú)菌觀念微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2.手指細(xì)菌的分布微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3.咽喉部細(xì)菌的分布（先觀察有無(wú)菌落）上呼吸道是開(kāi)放性的通道，一般寄居著一定數(shù)量和一定種類的微生物，它們?cè)谒拗骱屯猸h(huán)境的影響下保持著微生態(tài)的平衡。

呼吸道咽部常駐菌群種類較多，正常人咽部需氧菌中，甲型鏈球菌檢出率最高，其次是奈瑟球菌屬和表皮葡萄球菌。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查二、理化因素對(duì)細(xì)菌的影響

1.物理因素對(duì)細(xì)菌的影響---紫外線

原理：紫外線主要作用于DNA，使一條DNA鏈上相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶以共價(jià)鍵結(jié)合成二聚體，從而干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄導(dǎo)致細(xì)菌變異或死亡。

特點(diǎn)：殺菌能力強(qiáng)，而穿透能力弱。普通玻璃、紙張、水蒸氣、塵埃等均能阻擋。

應(yīng)用范圍：紫外線滅菌法常用于消毒物體表面，手術(shù)室、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室、傳染病房的空氣消毒及不耐熱物品消毒。

有無(wú)選擇性？微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查（1）機(jī)制①促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性或凝固。②干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝。③損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，影響細(xì)菌的化學(xué)組成，物理結(jié)構(gòu)和生理活動(dòng)，從而發(fā)揮防腐、消毒滅菌作用。有些化學(xué)藥品濃度高時(shí)能殺滅病原微生物，稱為化學(xué)消毒劑；濃度低時(shí)能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，稱為防腐劑。2.化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響---化學(xué)消毒劑微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查（2）化學(xué)消毒劑分類（1）高效消毒劑殺滅細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所有微生物，適用于不耐熱力滅菌但要進(jìn)入人體內(nèi)部的物品，如內(nèi)窺鏡等。次氯酸鈉、過(guò)氧化氫、甲醛、環(huán)氧乙烷等。（2）中效消毒劑不能殺滅芽胞，但能殺滅繁殖體、真菌和大多病毒，如喉鏡，麻醉器材。碘酊、乙醇等。（3）低效消毒劑能殺滅大多細(xì)菌繁殖體，但不能殺滅芽胞，結(jié)核桿菌及某些抵抗力強(qiáng)的真菌和病毒。新潔爾滅、洗必泰、高錳酸鉀等。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查75％酒精

碘酒

84消毒液

G+菌：+/-+++++G-菌：

-++++微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查青霉素-盤(pán)尼西林弗萊明1928弗萊明、錢恩、弗羅里于1945年共同獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)。青霉素是由青霉、曲霉等屬真菌產(chǎn)生的一種抗生素。青霉素是人類發(fā)現(xiàn)的第一種能夠治療人類疾病的抗生素。但青霉素能引起某些受藥者過(guò)敏反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可引起休克、甚至死亡，故應(yīng)用前必須做皮膚試驗(yàn)。2.化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響---抗生素微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查陽(yáng)性三）生化試驗(yàn)：分解色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚

吲哚試劑（對(duì)二甲基氨基苯甲醛）大腸桿菌＋變形桿菌－1、吲哚試驗(yàn)微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2.葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)：藍(lán)色半固體培養(yǎng)基對(duì)面兩小組，一組大腸桿菌，一組葡萄球菌結(jié)果：大腸桿菌組:變黃，云霧狀生長(zhǎng)葡萄球菌組:紫色變淺？。黃色(PH<6.0);指示劑:1％溴麝香草酚藍(lán)

藍(lán)色(PH>7.6)

微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查糖發(fā)酵試驗(yàn)微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3、硫化氫試驗(yàn)（+）含硫氨基酸硫化氫黑色硫化物+鐵離子或鉛離子微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查二、今天的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：觀察細(xì)菌形態(tài)，進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)定。細(xì)菌用上次實(shí)驗(yàn)接種在平板或斜面培養(yǎng)基的結(jié)果。普通光學(xué)顯微鏡的分辨率為0.25μm,油鏡可放大1000倍。一般細(xì)菌都大于0.25μm，球菌達(dá)到0.8~1.2μm，故可用普通光學(xué)顯微鏡觀察。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查2、

油鏡使用方法光源：由弱到強(qiáng)光，檢查時(shí)用最強(qiáng)光集光器：下弱上強(qiáng)，故調(diào)到最上方選擇油鏡頭：1000倍，垂直固定。標(biāo)本片滴香柏油（用完放好），固定，粗螺旋調(diào)鏡臺(tái)，至稍微接觸玻片后，換細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微調(diào)。標(biāo)本：觀察細(xì)菌大小，形態(tài)，G+/G-，排列。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查物鏡工作距離(mm)低倍目鏡10×5.40高倍目鏡40×0.39油鏡頭100×0.11微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查3、細(xì)菌染色標(biāo)本制備的基本步驟：1）涂片：原則---均勻適量。液體培養(yǎng)基直接涂，固體半固體先滴半滴生理鹽水，然后蘸適量研磨，加入呈渾濁即可。2）自然干燥（酒精燈旁可加快干燥過(guò)程）3）火焰固定：過(guò)酒精燈火焰3-4次殺死細(xì)菌，染料能著色；細(xì)胞壁通透性增加，便于著色；菌附著于玻片，不被洗掉。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查革蘭染色

革蘭染色法由丹麥病理學(xué)家ChristainGram于1884年創(chuàng)立，是細(xì)菌學(xué)中很重要的鑒別染色法，通過(guò)此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革蘭陽(yáng)性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-）兩大類。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查革蘭染色原理原理：革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的肽聚糖層較厚，經(jīng)乙醇處理后使之發(fā)生脫水作用而使孔徑縮小，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物保留在細(xì)胞內(nèi)而不被脫色；革蘭陰性細(xì)菌的肽聚糖層很薄，脂肪含量高，經(jīng)乙醇處理后部份細(xì)胞壁可能被溶解并改變其組織狀態(tài)，細(xì)胞壁孔徑大，不能阻止溶劑透入，因而將結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物洗去而被脫色。微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人工培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢查4)染色：革蘭染色法（Gram染色）染液組成：結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95％乙醇、稀釋復(fù)紅染色方法：結(jié)晶紫初染盧戈氏碘液媒染95％乙醇脫色稀釋復(fù)紅復(fù)染1滴1分鐘30S1分鐘影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟是脫色水沖洗細(xì)水，玻片斜放，甩水珠水沖洗水沖洗30S水沖洗濾紙吸干滴油鏡檢微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的人