CryⅠAC基因的克隆及轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的研究的任務書

CryⅠAC基因的克隆及轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的研究的任務書任務書1.背景轉(zhuǎn)基因技術(shù)是指把其它生物體中的基因?qū)氲侥繕松矬w中，使目標生物體得到新的基因，以達到改良或增強目標生物體性狀的目的。轉(zhuǎn)基因技術(shù)被廣泛應用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)學、工業(yè)等領(lǐng)域。CryⅠAC基因是獲得廣泛應用的一種轉(zhuǎn)基因技術(shù)，它來源于一種名為Bacillusthuringiensis的細菌，能夠產(chǎn)生一種名為CryⅠAC的蛋白，對靶害蟲具有高度殺傷作用。因此，利用CryⅠAC基因在作物中實現(xiàn)殺蟲防治已經(jīng)成為極為重要的手段。結(jié)球甘藍是我國重要的蔬菜作物之一，其在生長過程中常受害于多種昆蟲害蟲，如白菜蛾、菜青蟲、甜菜夜蛾等，這些蟲害嚴重影響其產(chǎn)量和質(zhì)量。結(jié)球甘藍的殺蟲防治一直是蔬菜生產(chǎn)中的難點問題，因此利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在結(jié)球甘藍中引進CryⅠAC基因，對其進行殺蟲防治是一種可行的辦法。2.研究目標本研究的目標是克隆CryⅠAC基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的質(zhì)粒，并進行轉(zhuǎn)化，驗證CryⅠAC基因在結(jié)球甘藍中的殺蟲效果，為結(jié)球甘藍的殺蟲防治提供一種新的途徑。3.研究內(nèi)容1)克隆CryⅠAC基因：采用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，從Bacillusthuringiensis中克隆CryⅠAC基因，通過限制性內(nèi)切酶切割和PCR擴增，得到高純度的CryⅠAC基因片段。2)構(gòu)建CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的質(zhì)粒：將CryⅠAC基因子克隆到質(zhì)粒表達載體中，構(gòu)建CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的質(zhì)粒，含有葉綠素合成酶基因、CryⅠAC基因和kanamycin抗性基因。3)結(jié)球甘藍的轉(zhuǎn)化：將CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的質(zhì)粒經(jīng)過農(nóng)桿菌介導的方法，轉(zhuǎn)化到結(jié)球甘藍種子中，經(jīng)過篩選和鑒定，得到轉(zhuǎn)化植株。4)驗證CryⅠAC基因在結(jié)球甘藍中的殺蟲效果：對CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍和野生型結(jié)球甘藍進行害蟲試驗，驗證CryⅠAC基因在結(jié)球甘藍中的殺蟲效果。4.研究意義（1）對CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的基礎(chǔ)研究:為深入研究CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍的分子機制提供重要的實驗基礎(chǔ)。（2）理論意義:通過實踐驗證，為植物基因工程、生物技術(shù)的發(fā)展積累經(jīng)驗和理論依據(jù)。（3）應用價值:CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍將有助于推進結(jié)球甘藍科技升級，推廣轉(zhuǎn)基因抗蟲技術(shù)在安全高效農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應用，為人類提高蔬菜品質(zhì)，改善人類的生活質(zhì)量做出積極貢獻。5.研究方案研究步驟：第一步：利用PCR技術(shù)擴增CryⅠAC基因片段。第二步：將CryⅠAC基因子克隆到適當?shù)馁|(zhì)粒表達載體中。第三步：利用農(nóng)桿菌介導的方法，將CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化到結(jié)球甘藍種子中。第四步：對CryⅠAC基因轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍和野生型結(jié)球甘藍進行害蟲試驗，驗證CryⅠAC基因在結(jié)球甘藍中的殺蟲效果。研究時間：一年6.總體要求（1）按照任務書的研究目標和內(nèi)容，開展工作，達到預期的研究結(jié)果和要求。（2）嚴格按照研究方案規(guī)定的技術(shù)路線來開展工作，保證研究質(zhì)量和可靠性。（3）保證研究過程中的安全，不得使用任何有害化學物質(zhì)。（4）嚴格遵守科研誠信規(guī)范，保證研究的真實性和可靠性，不得有造假行為。（5）及時匯報研究進展和研究結(jié)果，如有難點、問題和困難，及時向上級報告并尋求解決方案。7.資金預算根據(jù)研究所需的試劑、設(shè)備、耗材和人員經(jīng)費等，預算總經(jīng)費為20萬元。其中，試劑耗材費用為5萬元，設(shè)備購置費用為5萬元，租賃實驗場地費用為2萬元，人員經(jīng)費為8萬元。8.結(jié)論通過本研究，可以驗證CryⅠA