第3章消毒與滅菌備課講稿課件

第3章消毒與滅菌滅菌(sterilization)：殺滅或去除物體上所有微生物的方法，包括芽胞。消毒(disinfection)：指殺死物體上病原微生物的方法，芽胞或非病原微生物可能仍存活。用于消毒的藥品稱為消毒劑(disinfectant)。防腐(antisepsis)：體外防止或抑制細(xì)菌生長繁殖的方法。細(xì)菌一般不死亡。用于防腐的藥品稱為防腐劑(antiseptics)。第一節(jié)常用術(shù)語和概念7/25/20232抑菌(bacteriostasis):抑制細(xì)菌和真菌的生長繁殖的方法。常用的抑菌劑（bacteriostat）是一些抗生素，能可逆性抑制細(xì)菌的繁殖，但不直接殺死細(xì)菌無菌(asepsis):指沒有活菌的意思。

無菌操作(antiseptictechnique)：指防止細(xì)菌進入人體或其他物品的操作技術(shù)。清潔和凈化：減少微生物數(shù)量或活性的方法。7/25/20233

第二節(jié)消毒滅菌方式

一、物理消毒滅菌法

熱力滅菌法干熱滅菌法濕熱滅菌法光線與射線過濾除菌超聲波消毒法干燥與低溫抑菌法7/25/20234干熱滅菌法：使微生物脫水干燥和大分子變性死亡焚燒燒灼干烤：通常加溫160～180℃保持2h紅外線滅菌7/25/20235濕熱滅菌法在同一溫度下濕熱的殺菌效果比干熱好，因為：溫?zé)釡缇鷷r菌體蛋白質(zhì)易變性；濕熱穿透力大；濕熱蒸汽有潛熱存在。7/25/20236巴氏消毒法（pasteurization）61.1～62.8℃30min71.7℃15～30秒殺死液體中的病原菌或某些特定微生物。消毒牛奶、酒類等食品。7/25/20237煮沸消毒法煮沸100℃經(jīng)5min可殺死一切細(xì)菌的繁殖體，一般消毒以煮沸10min為宜。芽胞需1~2小時才能殺死。用于一般外科器械、膠管和注射器、飲水和食具的消毒。7/25/20238流通蒸汽滅菌法細(xì)菌繁殖體需15-30min才能殺死，但芽胞不會被全部殺死。間歇滅菌法本法是利用反復(fù)多次的流通蒸汽滅菌，以達(dá)到滅菌的目的。只適用于不耐熱（100℃以內(nèi)）的營養(yǎng)物質(zhì)如某些培養(yǎng)基的滅菌。7/25/20239高壓蒸汽法Autoclaving壓力：1.05kg/cm2溫度：121.3℃時間：15～30min效果殺死一切微生物，包括芽胞耐高熱、不怕潮濕的物品7/25/202310光線與射線日光和紫外線殺菌波長：240～280nm，最適：260nm殺菌機制：破壞核酸結(jié)構(gòu)用于物體表面和空氣消毒電離射線和微波γ射線、高能量的電子束（陰極射線）不升高溫度且穿透力強適于忌熱物品的滅菌或消毒7/25/202311濾過除菌（filter）常用不能加熱滅菌的血清或液體不能除去病毒、支原體和Ｌ型細(xì)菌常用的除菌濾器蔡氏（Seitz）濾器玻璃濾器薄膜濾器7/25/202312超聲波消毒法：殺菌不徹底，主要用于破碎細(xì)菌，提取菌體組分。腌制干燥與低溫抑菌法：主要用于保存食品、保存菌種。真空干燥法7/25/202313

二、化學(xué)消毒滅菌法類別作用機制常用種類酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀、過氧乙酸、碘酒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫酸堿類破壞膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化劑蛋白質(zhì)、核酸烷基化環(huán)氧乙烷7/25/202314

消毒劑的作用機理

使細(xì)胞膜通透性受損；使菌體蛋白變性和凝固，失去生物活性，導(dǎo)致細(xì)菌死亡；破壞或改變蛋白質(zhì)與核酸功能基團，使菌體酶蛋白失去酶的活性。7/25/202315二、化學(xué)消毒滅菌法（一）高效消毒劑（high-leveldisinfectants）

1.含氯消毒劑；2.過氧化物消毒劑；3.醛類消毒劑；4.環(huán)氧乙烷（二）中效消毒劑（intermediate-leveldisinfectants）

1.含碘消毒劑；2.醇類消毒劑（三）低效消毒劑（low-leveldisinfectants）

1.季銨鹽類；2.氯已定；3.高錳酸鉀7/25/202316固體二氧化氯消毒劑7/25/202317第三節(jié)消毒滅菌的運用（一）高危器械物品用時需進入無菌組織的物品。所有這些物品都應(yīng)該滅菌。（二）中危器械物品用時不進入無菌組織但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。（三）低危器械物品只接觸未損傷皮膚但不進入無菌組織和不接觸黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可。（四）快速周轉(zhuǎn)的醫(yī)療器械

一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌7/25/202318（二）室內(nèi)空氣消毒滅菌

1.物理消毒法

①紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；②濾過除菌：空氣通過孔徑小于0.2μm的高效過濾裝置以除去細(xì)菌和帶菌塵埃。

2．化學(xué)消毒法包括化學(xué)消毒劑噴霧和熏蒸：①過氧乙酸噴霧、熏蒸；②過氧化氫噴霧；③二氧化氯溶液噴灑；④中草藥點燃煙熏。（三）手和皮膚的消毒

用肥皂和流動水經(jīng)常并正確洗手病原微生物污染時應(yīng)用消毒劑消毒。7/25/202319（四）黏膜的消毒

（五）病人排泄物與分泌物的消毒滅菌

（六）病人污染物品的消毒

（七）飲水的消毒

（八）環(huán)境的消毒

7/25/202320酚類作用機制常用消毒劑用途蛋白質(zhì)變性損傷細(xì)胞膜滅活酶類3%—5%石炭酸2%來蘇0.01%—0.05%洗必泰地面、器具表面消毒;皮膚消毒術(shù)前洗手7/25/202321醇類作用機制常用消毒劑用途蛋白質(zhì)變性凝固干擾細(xì)胞代謝70%—75%乙醇50%—70%異丙醇皮膚消毒體溫計消毒7/25/202322重金屬鹽類作用機制常用消毒劑用途氧化作用蛋白質(zhì)變性凝固滅活酶類0.05%—0.1%升汞2%紅汞0.1%硫柳汞1%硝酸銀1%—5%蛋白銀非金屬器皿的消毒皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒皮膚消毒、手術(shù)部位消毒新生兒滴眼，預(yù)防淋球菌感染7/25/202323作用機制常用消毒劑用途氧化作用蛋白質(zhì)沉淀0.1%高錳酸鉀3%過氧化氫0.2%過氧乙酸2%碘伏0.5ppm氯10%—20%漂白粉皮膚、尿道消毒、水果消毒創(chuàng)口、皮膚、粘膜消毒器材消毒皮膚消毒飲用水消毒地面、廁所、排泄物消毒氧化劑7/25/202324表面活性劑作用機制常用消毒劑用途損傷細(xì)胞膜滅活酶類蛋白質(zhì)沉淀0.1%新潔爾滅0.1%杜滅芬外科手術(shù)洗手，皮膚粘膜消毒，浸泡手術(shù)器械皮膚創(chuàng)傷沖洗，金屬器械、棉織品、塑料、橡皮類消毒7/25/202325烷化劑作用機制常用消毒劑用途菌體蛋白、核酸烷基化10%甲醛0.05%環(huán)氧乙烷2%戊二醛浸泡消毒，空氣消毒手術(shù)器械、敷料消毒精密儀器、內(nèi)窺鏡消毒7/25/202326染料作用機制常用消毒劑用途對核酸有親和力，影響繁殖以及干擾氧化過程2%龍膽紫淺表創(chuàng)傷消毒7/25/202327酸堿類作用機制常用消毒劑用途破化細(xì)胞膜、細(xì)胞壁和凝固蛋白醋酸熏蒸1:4生石灰空氣消毒地面、排泄物消毒7/25/202328第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素消毒劑性質(zhì)、濃度和作用時間75%ethanol溫度和酸堿度：溫度升高效率增強Anthraxspore—2%戊二醛20oC:104/ml/15min56oC:104/ml/1min細(xì)菌種類和數(shù)量結(jié)核桿菌、芽胞被消毒物的性質(zhì)7/25/202329消毒劑選擇原則效果好毒力低便宜7/25/202330小結(jié)概念：消毒滅菌無菌抑菌防腐物理滅菌的方法與應(yīng)用濕熱法的種類和應(yīng)用消毒劑的作用原理和應(yīng)用7/25/202331消毒與滅菌滅菌消毒防腐抑菌無菌熱力滅菌法高壓蒸汽滅菌法化學(xué)消毒劑的種類和作用機制7/25/202332問題什么是消毒、滅菌、無菌、抑菌、防腐？物理滅菌有哪些方法？濕熱滅菌有哪些方法？分別應(yīng)用何處？高壓蒸汽滅菌法原理、應(yīng)用？消毒劑作用原理是什么？使用消毒劑有何注意事項？7/25/202333

第五節(jié)生物安全及無菌操作基本技術(shù)7/25/202334生物安全biosafety生物安全biosafety

避免危險生物因子造成實驗室人員暴露，向?qū)嶒炇彝鈹U散并導(dǎo)致危害的綜合措施。7/25/202335生物實驗室實驗室分區(qū)laboratoryarea按照生物因污染概率的大小，實驗室可以進行合理分區(qū)。危害程度分級：根據(jù)生物因子對個體和群體的危害程度將其分為4級7/25/202336生物危害程度Ⅰ級（低個體危害，低群體危害）不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。Ⅱ級（中等個體危害，有限群體危害）能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原體。實驗室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險有限。Ⅱ級7/25/202337生物危害程度Ⅲ級(高個體危害，低群體危害)能引起人或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能用抗生素抗寄生蟲藥治療的病原體。Ⅳ級（高個體危害，高群體危害）能引起人或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接、間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物之間傳播的病原體。Ⅳ級Ⅲ級7/25/202338實驗室生物安全實驗室及其人員生物安全管理，按國務(wù)院令(第424號)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》于2004年11月起施行。病原微生物，是指能夠使人或者動物致病的微生物。實驗活動，是指實驗室從事與病原微生物菌（毒）種、樣本有關(guān)的研究、教學(xué)、檢測、診斷等活動。

7/25/202339生物安全水平分級生物安全防護水平（biosafetylevel，BSL）分為4級，以表示實驗室的相應(yīng)生物安全防護水平。BSL－1：防護水平最低,普通建筑物即可，每個實驗室應(yīng)設(shè)洗手池。BSL-2：實驗室的門有可視窗。在實驗室工作區(qū)域外還應(yīng)當(dāng)有供長期使用的存儲空間。在實驗室內(nèi)使用專門的工作服；應(yīng)戴乳膠手套。配備高壓蒸汽滅菌器，在實驗室內(nèi)配備生物安全柜。BSL-27/25/202340BSL－1實驗室防護水平最低,普通建筑物即可。7/25/202341生物安全水平分級BSL—3實驗室：自成隔離區(qū)（有出入控制）或為獨立建筑物。BSL—4防護水平最高。實驗室應(yīng)建造在獨立的建筑物內(nèi)或建筑物中獨立的完全隔離區(qū)域內(nèi)，該建筑物應(yīng)遠(yuǎn)離城區(qū)。7/25/202342生物安全柜生物安全柜（Biologicalsafetycabinets，BSCs）是為操作具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗室環(huán)境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計的。使用生物安全柜可以減少由于氣溶膠暴露所造成的實驗室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。同時也能保護環(huán)境。7/25/202343

一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。

從事高致病性病原微生物相關(guān)實驗活動應(yīng)當(dāng)有２名以上的工作人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實驗活動。應(yīng)有健全安全保衛(wèi)制度。

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實驗室工作人員應(yīng)掌握實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知識和實際操作技能。應(yīng)有符合要求的防護用品，應(yīng)建立健康檔案；進行預(yù)防接種。實驗室應(yīng)有科學(xué)、嚴(yán)格的管理制度，定期對實驗室設(shè)施設(shè)備、材料等進行檢查、維護和更新，應(yīng)對廢水、廢氣以及其他廢物進行合理處置，防止環(huán)境污染。7/25/202345生物安全7/25/202346三、實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任

實驗室感染控制工作包括定期檢查實驗室的生物安全防護、病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實驗室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實施情況。

實驗室發(fā)生高致病性病原微生物泄