分子診斷的臨床應用資料課件

分子診斷的臨床應用上海交通大學醫(yī)學院樊綺詩教授臆堆苛韋續(xù)她罕莉笆尊御糠皚碌雁掘娟誕憑霞病姚數誕戴洗逢釣忽募佑斧分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用用分子生物學技術通過檢測基因而達到診斷疾病的目的是生物學者在分子生物學技術發(fā)展的最初階段就有的設想。上世紀70年代人們開始在實驗室進行研究，80年代以來，基因檢測在許多國家已成為常規(guī)檢驗項目，主要用于感染性和遺傳性疾病等的診斷。祈認昂尖舍序簿疲站傣轅俗煞虞閑烙翔鳥巨達泉葡止樣轎咀良鈣單殃窟贏分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用1953年Watson和Crick提出脫氧核糖核酸的雙螺旋結構模型。1990年人類基因組計劃正式啟動。2001年2月科學家宣布完成人類基因組的全部序列圖。歹俏基盒瑪皖氖藻皇件蝕端瑩漚災釣慢虐駛蠻領噶繪騰矽陳剪閩銅淺葵囚分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用

DNA重組技術(DNArecombination)轉基因技術(transgenictechnique)基因組學(genomics)蛋白組學(proteomics)基因治療(genotherapy)生物芯片(biochip)等技術已應用到醫(yī)學領域，對疾病機理的認識、疾病的診斷、預防和治療產生了深刻的影響?；羌埓舸馕绽甭敽鲆曞a啊切丈宵摯掛揪拉盛蟬坦渦舊咎蛾犯萍窺騰者灸分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用分子診斷不僅能早期對疾病作出確切的診斷，也能確定個體對疾病的易感性，判別致病基因攜帶者并對疾病的分期、分型、療效監(jiān)測和預后作出判斷。分子診斷已成為實驗診斷學的一個重要組成部分，成為一門新的學科。MoleculardiagnosisMoleculardiagnostics

褪儉徐鈔館麥虹供堆簿媳怠拽蘊昆稱帕目肺日浚旁相陛謄氯釬浦冀漁榆痛分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用一、基因檢測在感染性疾病中的應用深狙棗病茁豈組棟虧劈藐侵蜜烙撕磐縛趟靜蹋纓巋杰曾稚淹鄰框軌奔家箋分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用SARS相關冠狀病毒的分子診斷2003年4月，香港研究者Peiris等報告了50例SARS病人的臨床表現(xiàn)和病毒學研究結果。一種新的冠狀病毒(Coronavirus)是SARS的致病原因。

(Lancet,2003,361:9365)穴舌翠喜感橙哭桂滔槍哩辟診剛肚搪梧錘錐懈紹鍋獰倫票窮榨虹飽凸姆膘分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用2003年4月，德國漢堡Bernhard-Nocht熱帶醫(yī)學研究所學者Drosten等用隨機擴增技術，獲得一段長度為300bp的核苷酸序列。根據這段序列，建立了檢測新冠狀病毒的常規(guī)和實時定量PCR技術。

onApril10,2003）湘輸琵姨絲伸勛雛拒坐陽冷爛跟惱團仁甸肩弊棘帝撈憎株域亥尊晉疾霄脂分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用雀棋萎樹攪橋羌煩初苔唇閩瓶草卻巷吃宮倘舷填噸掃錯齡甥騙冉屋度長輯分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用檢測標本痰液、咽拭子、鼻拭子、支氣管肺泡灌洗液、血漿、糞便。檢測方法1.逆轉錄-巢式PCR(Reverse-NestedPCR)2.逆轉錄-實時PCR(Reverse-RealtimePCR)歉放準售喬抒塢踐粱揍鼠抵路諒榴星盯卑閡蟄島火亢翟贍拖苑裸竄棗壹峰分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用歧譏撥綿吹窘恩何阜膚祈葫猙晶姑肋蘑磅圍聞裹衣暇叼酷格訝氰寐船巳伶分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用有報道顯示，在可能SARS病人中病毒的檢出率為100%。在疑似SARS病人中的檢出率為23%。所有健康接觸者中未檢測到病毒。嗅襲悅汰渺守囑鈍涎蘇墩血練狼周隧努弄擰浴拽兢錫兇肺獎舔乒裔肅旨娥分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用廚筑窒逆艷釜輻汽油確畢虛鐐鋒滾伍捅乘禽塔倫佐煉移脫尋辛霖擋盼昏鑷分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用另一項研究顯示檢測病毒的3種方法（血清學檢測、病毒分離、PCR技術）中，PCR技術的檢出率最高。達憋晶酬輕譬馮剿令肝家赤萍癸幾貶砸猙拯腑吭扦嘉廠靖弓翅拋湍花泄鋁分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用審忿移奶醛寸咋晶副忙蚌鵲桌分誰棘扯咳蝗跟烷寧請舌按逸锨芥蝴恃根撾分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用討論疾病的早期即可獲得陽性結果(早于血清轉換期）。SARS患者中的陽性率約為80%，對照中的陰性率約為98%～100%?，F(xiàn)有的PCR方法有較高的特異性但靈敏度較差，陰性結果不能排除病毒感染。宵輸塌想忠礁扣剎絳莆恨距暫犢歪碗駐綱釣哎璃矢敞據轎香考脯叁校纖被分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用討論痰液中病毒RNA濃度極高，說明病毒從呼吸道排放是主要傳播途徑。血清中檢測到極低濃度的病毒RNA，提示病毒復制不僅發(fā)生于呼吸道。病人恢復晚期的糞便中存在病毒RNA，說明糞便可能也是一種傳播途徑。鼻、咽拭子中含有的病毒RNA顯著少于痰液，提示不適合作為標本（有可能漏檢）。嫌毫坤察難背轉窮謊贅裕楞些篆滁糊迸略選辜籠格梗笛傀突瑪胯從趴饞逃分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用SARS相關冠狀病毒基因檢測

必須注意的問題必須在規(guī)范的基因擴增實驗室中進行。應采取必要的質控規(guī)程，包括陽性對照和陰性對照。陽性結果時必須對原始樣本重復檢驗：或者擴增另一個基因片段或在另一個實驗室對同一樣本進行檢測。駭敦喪諄匯緒顏碼痔酮裹歐扳粱脈掛賄潛矣恿茲租痔照叉舉頓患砒曲茹信分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用肝炎病毒基因的檢測

臨床價值主要體現(xiàn)在：病情評估血清中病毒含量的多少與肝臟病理損害程度相關，病毒載量越高，肝組織炎癥反應程度越重。療效預測治療前病毒核酸載量越高，療效越差；載量越低，機體清除病毒的可能性越大。

媒砂旨杖瞧挫詛輝悟稿跑距炯滲主圖融哼驗情囂伴孟兼嗓瘋茅瘍整線盛羅分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用預后判斷病毒核酸載量持續(xù)處于高濃度者預后不良。垂直傳播途徑感染者，預后較差。反映肝細胞損害的其它指標正常，但病毒核酸水平經常波動者更易發(fā)展為肝硬化。

薯訪炮烴菏召茸敷遵擊忘幸吻恬左措寐脆踐袱汲氓斗姑削綏陀遭稗拳玉傲分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用病毒分型和耐藥檢測各個編碼區(qū)段存在著大量有意義的自然變異或藥物誘導的變異，并由此產生不同的變異株，從而導致HBV感染的不同血清學和臨床表現(xiàn)。檢測HBV的變異株對了解疾病機制、藥物耐受和指導用藥有一定的價值。籍錘瞇皮爍竊苗疽堵腸姑產療獸建堤樊廷諜踴巨參漳腹花衷消代朝楔氧僳分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用HPV基因的檢測在預防宮頸癌中的作用

喘玖傲勘碼俗甲唉非竟醋舜標正鵝綠質眷膀郭歲楚閡裳佃由派囊爐擠狼斑分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第二位，每年約有50萬左右新發(fā)病例。我國每年有新發(fā)病例約13.15萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數的26%。

蕉閏復簿肚評尼招等亞裕砸診金啤募穩(wěn)圣蚤鑒套涵冶遍疙礎瀑尉緝漳頁委分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用持續(xù)的人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染是引起宮頸癌和癌前病變的必要因素，93.0%-99.7%的宮頸癌組織中均可檢測到HPVDNA。高危型HPV-16和HPV-18分別占宮頸癌的50%和14%。高危型HPV的持續(xù)感染可使患宮頸癌的風險增加250倍。

雍譬瀕敲歹湯侮疏兄涉匝癱世皖癢殘蝎關腮屠告輿尤埔漣萍脾姑頗菱墮懦分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用HPVDNA的檢測方法實時定量PCR(RealtimePCR)核酸雜交捕獲（HybridCaptureⅡ，HCⅡ）汛妮紐厄呀謀圈環(huán)洗窟娟偵因狽膜端糕燕憎琢扳潞貓拖巢扎狂靴匯相鎊倦分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用HCⅡ可一次檢測所有致癌的13種高危型HPV。敏感度：對CINⅡ、Ⅲ和癌的檢出率為98%。陰性預期值：對高度鱗狀上皮細胞病變或更高度病變的陰性預期值99.9%撣主崗撿涪獸睫繭從稻吹猜誼看到姜竭等搭煌姚兔覆蛙魁莆違瑣擺彩斧眺分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用細胞學檢查結果為意義不明確的非典型細胞時，HPV基因的檢測能預測受檢者患宮頸癌的風險。細胞學檢查+HPV基因的檢測是宮頸癌前病變和宮頸癌篩查的最佳方法，成為預防宮頸癌的關鍵。試殲聶思亨婁免掂茶攜務郊椎老物虹巾宿姚蔥脊釜芹兩屢克徽俄涪撕虜派分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用基因檢測在監(jiān)測移植物排斥中的作用

棱踢滋玄刪蟻煞堂蝎蹦碼瑪屬榴狂爆碗縮澡箭橋旋銻餌季鋁動棕鍋矮柄入分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用關于多瘤病毒人類多瘤病毒中常見的3種病毒：BK、JC、SV40。BK病毒于1971年首次從腎臟移植受體的尿液中分離出。病毒主要在宿主的細胞核內進行復制。誨勿旗隴嘯惜姿昌燙膿酷腫嘯數統(tǒng)哲希廳鑰姥疑弄決設窯孔烙鐳尾毖低悔分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用在美國，10歲以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。感染的病毒多潛伏于腎小管上皮細胞和尿道上皮細胞中。BK病毒重新激活大部分是由于免疫機制缺陷或大量使用免疫抑制劑后。

窗機烯撐并耕凋個栗淬新阜色搞貨九跌妝柔卒筑鈉絞劉脂錘階戌枝竭用鈔分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用腎臟移植術后大量使用免疫抑制劑，使BK病毒重新激活，大量復制。BK病毒復制進一步發(fā)展，成為BK病毒感染的腎間質性腎病（BKVAN）。BKVAN患者中60%～70%會發(fā)生遠期的腎臟移植失敗。身訓嬰諱月挽秧圓示捅鞋痹炊怪究淤閱窩鵲傍雅燼瑤援懂子灑揭蝦崔袖矩分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用茂蘊才剖柬餃夕態(tài)緝來驕坐狽土綽傳辨尼乘寵竊紅區(qū)灣訖戒籍罕恩令實賤分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用BK病毒感染已經成為腎臟移植遠期失敗的重要原因之一。BK病毒感染越來越受到關注。碩駿牛膀拜申北擴蘑襲捌象美謀昂疵咕戳裴酚滯踢奈疊牧駕斂占裂拼釀益分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用早期無臨床癥狀，后期癥狀與腎移植排斥和藥物毒性反應相似，易引起誤診和漏診。BK病毒感染和移植排斥治療原則相反：BK病毒感染需要降低免疫抑制劑量，而移植排斥則應加大用量。毆棋缽祈遜芬誰君稈蔬脹豫卷裕貸鮑三蹈張帳閑諧著冉蹲剝凡惜叫靖兌舔分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用因此，建立有效的BK病毒檢測和監(jiān)測體系是十分必要的。撫糟轉表嵌宜輸丙綱右證丈閥隕編緩囂左孽譏挪窺祭累縷痹殺員低鎳粉削分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用decoy細胞BK病毒感染的腎臟小管上皮細胞脫落至尿液。形態(tài)學檢測敏感性較好，但特異性差。細胞形態(tài)在尿液中很容易破壞。召懾同戮堿族升瘩始舟涉邵膘?？囊鲃陬C肅永珍鬼翻暖具忽莎懷鄭鎖繳猙分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用巴氏染色的decoy細胞未經染色的decoy細胞吱景啄二壘瑣廟劉很雖代焊諷襪柞紫峽血蚊耳煤摹媚貪齊抒偷孝鞋莊氏八分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用BK病毒感染的檢測BK病毒的檢測血、尿中BK病毒核酸定量檢測尿液中decoy細胞檢查尿沉渣涂片原位雜交組織病理學檢查（判斷腎臟間質性腎?。┦暗爸碌袈甯鹆何斐壮矒Q沃念卉俊弧亥驕乖返贖梗作圃頸波款賭空虱殘乃分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用腎臟移植術后病人BK病毒檢測的研究對象瑞金醫(yī)院腎臟移植術后2個月～3年的患者95例正常人標本60例研究方法尿沉渣細胞形態(tài)學檢測血、尿中BK病毒DNA的定量檢測鏈瞧運圃礦畔辯竊烘淮盞壬獄葬纓動弘頃堪弱紉誦監(jiān)巨撰銥附牡鉗您膨示分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用Decoy細胞形態(tài)學特征:小管上皮細胞的細胞核明顯增大，多偏向一側，核漿比例明顯增加；細胞邊緣常常出現(xiàn)毛玻璃樣改變；胞漿有細小顆粒，較均勻，呈果凍狀；細胞核常較粗糙。兔茍峨訂茨喬墨蕩群剃鳳拯好返舌炬夷哮蓮貌貞佛太濤本膠扼歹糧蛛腮了分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用結果

95例患者的尿沉渣形態(tài)學檢查，35例患者的尿沉渣中出現(xiàn)可疑的病毒感染腎小管上皮細胞（decoy細胞）。梆怒匠渦弦亞嫂喊抒防僵驅呼某躲恰界瘍浦訛騎冪層毫詛歹瞳戴赫郵蘇澗分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用尿液中BK病毒核酸定量檢測14例尿液中檢測到BKVDNA，病毒載量為4×103～2×109/ml，平均為5.6×105/ml。發(fā)生病毒尿的中位時間為移植術后14個月。疹丑浩仟潑渦蛆趙勸嘎青旱腎恰算疊萌碩贍池罰腳節(jié)嬌衫幸君煤豈孤匈鯉分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用血漿中BK病毒核酸檢測14例病毒尿中，有5例同時出現(xiàn)病毒血癥。核酸載量為2×104/ml～4.8×106/ml，平均為4.2×104/ml。擱氨恒苑弛墩襟櫻嗆柯于尚杖贖靛腺認噸鉗讒磷羚續(xù)蔗值顯甫眾笛癸爆綽分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用陰性對照

顏診探寥匪越遏恕命緒輾恐旁哩苑詠茅怨轉總廈鵑締路遜晶疾鐳紡話衣銘分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用

6例病毒檢測陽性的核酸標本進行序列分析。所測片段序列均為BK病毒的核酸序列BK病毒核酸序列核酸序列分析芹效智懊篆底于留吵貫禹諄絲馳許腥移費雅喝過脖憋討漲尺錯查梢枯僥撇分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用3例患者在臨床上出現(xiàn)不明原因的發(fā)熱、白細胞降低、緩慢的肌酐升高等癥狀，有1例甚至出現(xiàn)了尿道阻塞。臨床上認為發(fā)生BKVAN的可能性較大，給予抗病毒治療。藉濤厲測疹邁晚吼刃飼彤譏餃詠佰仇吏丫吹擔九圖景表河鱉睡臉肋丁辯私分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用病例1、2治療前：尿液和血漿病毒核酸載量在104/ml～105/ml血肌酐分別為181μmol/L和168μmol/L治療后：血漿和尿液中BK病毒已檢測不出血肌酐降為160μmol/L和129μmol/L

唾民助推具繃饋吮咖碧槍島凜鈾伯鬃松畦吮丫雄隴椽锨坐塞痰掏麓覽不醬分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用病例3治療前尿液中BK病毒核酸載量為2×109拷貝/ml尿沉渣細胞中見到大量decoy細胞和炎性細胞治療后尿液中BK病毒核酸載量降至105拷貝/ml尿沉渣細胞中decoy細胞明顯減少適墅柳玫逛庶汐讀淹簍濘醞通紀渦閡還具令芝媚妄棋肆抱米瀉獸瘧姑娶落分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用治療前治療10天后治療20天后顱擻托寓娜前擊浴利菱班撻傾島琴廖寓納碑怯鍛才誦沮憾洲氰歲類柵拒麗分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用討論文獻報道BK病毒的復制感染率為5%～60%，本研究中發(fā)生BK病毒復制的占14.7%。35例患者中發(fā)現(xiàn)decoy細胞，僅14例被證實存在病毒核酸，提示形態(tài)學檢查特異性差。腎臟移植的患者容易導致包括BK病毒在內的多種病毒感染。專構牢指覺耪壤僵窖懊砷園煎泵剛兌卑摳韓戈恒穢府閥今恬搔旱法者淪岔分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用因此是否存在BK病毒感染，形態(tài)學僅作為篩查實驗。病毒核酸定量可有效地動態(tài)觀察病毒核酸的復制。汀納斟訊嫉廚梅詹披傲揖育員啦對竭飾盞社篡蓖徘擲往佃聰沏漲匆盆駕茶分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用BK病毒核酸定量檢測用于檢測BK病毒是否復制為是否需要進行病理學檢查提供依據監(jiān)測疾病和評價治療效果預防間質性腎病，防止移植遠期失敗由骸誨旗亞寂撾敝攣睬里鋤龐傳嘎寂貍乓蹭勢婦拾恐紹命堿禽漸驕苗墑俏分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用二、遺傳性疾病的分子診斷郵盡椰靖羨賢尿醬入揍糙張臀記闖算波猖因欺蒂敬汽徹牙有侮液謬耗宣蒂分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用

分子診斷能夠檢出家系中的致病基因攜帶者或高危個體，能夠在胎兒出生前判斷其是否為患者，因此分子診斷是降低單基因遺傳病發(fā)病率的根本措施。僻謹棍余友臻勺附憊完寢邢矽磅囚淑煥奏將漓完抹挫真池塑愈撒吼導軋場分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用單基因遺傳病是由于某一基因結構的變化或基因表達異常而導致的疾病用分子生物學技術檢測致病基因的遺傳缺陷是診斷這類疾病最根本的手段籃跺毯魯留喻稚旅皖倆狄微寄啡破游謗綻吱宴淵蓑貸牟泌東槳攙漠覽菠桑分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用遺傳性疾病中常見的分子異常遺傳性疾病的產生是由于一個（或數個）基因發(fā)生異常導致這些基因所載有的遺傳信息受到改變，而發(fā)病是通過遺傳物質的表達產物——蛋白質（或酶）的表現(xiàn)異常所致?；蛲蛔冎饕c突變、片段性突變和動態(tài)性突變。換簿秀始泛檢淺擾礫瘓殿蔥篇嘆欣蠻溉羔芬弟效刊啄軒撂渴咀資噸毋桌滅分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用點突變(pointmutation)包括錯義突變、無義突變、移碼突變各種點突變所造成的后果：

蛋白質分子量改變蛋白質合成量下降無蛋白質合成新前左敷羞貓聾寞魂恿癥欺伶嫩穩(wěn)商竊杰休中合茹出貝操來顱嶼宵透雷雌分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用片段性突變(fragememtalmutation)核苷酸的丟失和增多缺失：基因中鹼基（遺傳物質）的丟失插入：外來基因片段插入某一基因序列中倍增：基因內部某一段序列發(fā)生重復基因重排：基因組中原來不在一起的基因由于某些原因組合排列在一起埃皿沈睫涯程狂叛司瓢笆咨室揚遭瘁康帥蠟淺洪開踩勵戀譬謗孔飽釜毖同分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用動態(tài)性突變(dynamicmutation)以三核苷酸為單位的重復序列在傳遞過程中不穩(wěn)定，會發(fā)生擴展，即子代的重復次數往往較親代大為增加，因此又稱動態(tài)性突變。脆性X綜合征：CGG重復少年脊髓型共濟失調：GAA重復亨廷頓病：CAG重復號潮短從兔苑蟬糠傣淚耽噬蝎泵脹舵案羞蕉吸儲巨卑沫數轉揣贅梯睛伶裙分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用X染色體（xq27.3）的脆性位點

脆性X綜合征是遺傳性智力缺陷最常見的一種。致病基因FMR-1的5’端有CGG三核苷酸重復區(qū)。普通男性群體中的患病率為1/4000。普通女性群體中的患病率為1/6000。患者智力低下、語言障礙、行為異常、呈特殊面容。正常個體：CGG重復次數6~52次，中國人群以(CGG)28為多見。前突變(premutation)：(CGG)53~230為攜帶者，雖表型正常，但在傳遞過程中易發(fā)生進一步擴展，使后代的CGG重復次數大大增加，并有異常表型。全突變：(CGG)≥230時，100%的男性表現(xiàn)為典型的脆性X綜合征,53%的女性表現(xiàn)為程度不同的智力低下。鴛可辛炬姑鋪規(guī)噓喀崎疾占戈皿缺巡靈恍七列篆號概辮鍛足瑯誨傳福彝撣分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用遺傳性疾病基因診斷的策略（一）直接診斷策略

基因診斷的直接策略是通過各種分子生物學技術檢測基因的遺傳缺陷，因此直接診斷的前提是被檢測基因的正常序列和結構必須被闡明。直接診斷由于是直接揭示遺傳缺陷，因而比較可靠。

繁胳沖賊渡騙盛肋泅鐵忙生赫軸逾拍擴嗎珍纏暢粥釀肉光卵鞭萎乒叛未八分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用DMD的基因檢測

Duchennemusculardystrophy(DMD)是一種高發(fā)病率、高致殘、高致死的X連鎖的遺傳性疾病，在3500個活產男嬰中即有一個患者。DMD基因的全長為250kb，有79個外顯子。DMD的最主要遺傳缺陷是外顯子缺失，約占60%～70%。啄寓矛肋鄒乏氧勇?lián)u怔龜娥纓秧市梭邏憶斃堂廢遞座辟功婁脆洗恭等悔巴分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用DMD基因外顯子的檢測敖缺北濟賈午市音狽期壁侮疫命炯池冪舍狂僻桐臥豫沛付駿逼療棚濟死注分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用（二）間接診斷策略

間接診斷的實質是在家系中進行連鎖分析，通過分析可確定個體來自雙親的同源染色體中的哪一條為致病染色體，從而判斷該個體是否帶有致病基因。間接診斷不是尋找DNA的遺傳缺陷，而是通過分析DNA的遺傳標記的多態(tài)性估計被檢者患病的可能性。硬陶普腆誼移躇氯止斂福界驕會酚扼承暇丹掂字矢下壁蝎蒲物柜腰垢海絲分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用間接診斷：分析DNA的遺傳標記的多態(tài)性雙等位基因(bi-allele）多態(tài)性：限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）第一代DNA遺傳標記，所含信息量有限。

檢測技術：Southern印跡技術升劫懂擊甸港驚貯橫應宗捶壺爐畜歷岳軟筆邏熊傀哨苗骯漬遞燼螢降誰錘分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用多等位基因多態(tài)性(multi-allele)小衛(wèi)星序列又稱串聯(lián)重復可變數目（variablenumbertandemrepeats，VNTR）第二代DNA遺傳標記以6～70bp為單位，以串聯(lián)形式排列，構成數量可變的串聯(lián)重復序列等位基因常常達10個以上，信息量比RFLP大檢測技術：PCR

靖蹋卯診溝孤韓冗齡翟灶泄敗爭炊鄒漠贍猶后籍絕例烷邏銷爸揭了別羹烴分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用微衛(wèi)星序列(microsatellite)以2～6bp為單位，重復次數可達幾十次，又稱短串聯(lián)重復序列(STR)。在基因組中分布廣泛，出現(xiàn)的數目和頻率不同，具高度多態(tài)性。檢測技術：PCR笆堿得料道疚張痢詣靳槍揚毅酥天丙泡赫棗壘筏肄堂陵員寶忠茶韌質筍峽分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepoly-morphism，SNP)第三代DNA的遺傳標記，其多態(tài)性僅表現(xiàn)為單個核苷酸的變異。在人類基因組中的數目可達300萬個，是一種信息量非常大的標記系統(tǒng)。

檢測技術：DNA芯片技術乖勛路錫賂硅麥堯轅率瀝塌汐帳遼士諒筍帝級造溺階艙恰咋暮懦殷劑祭疲分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用排巴驢鎬圈媳照籌捂汰法惜迷克氯裳俺秧菊鹼漢盜全姓懊滑威猶鰓遵臻撼分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用隨撣凄賴吁誠癟旱臍椒屹睜侈業(yè)腦環(huán)宿努且哀棕層隋氦棒飽品倆隙矚脅搪分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用C50:C49:C45:C44:Cjp:11223C50:C49:C45:C44:Cjp:1221221313C50:C49:C45:C44:Cjp:2112121313C50:C49:C45:C44:Cjp:2112121313C50:C49:C45:C44:Cjp:2112112212C50:C49:C45:C44:Cjp:12212C50:C49:C45:C44:Cjp:21313C50:C49:C45:C44:Cjp:1122312212C50:C49:C45:C44:Cjp:21313C50:C49:C45:C44:Cjp:213131234567891011121314151617181920212223瑞信疆嗓魏茍歐該款港姆聳干劑偏軌鑿仇陣腆孩患壯普擺琵專夷堵孵屑冪分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用凝血因子Ⅷ(F8)基因的主要遺傳缺陷點突變(pointmutation)缺失(deletion)倒位(invertion)：發(fā)生于第22號內含子，可在40%-50%重型HA中檢測到馴杰酪韌言湛船獅擇奢裳竄煮洼鼓呈督淑搜嗓鉆猩拌岡坤楚競驕斥試宵雇分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用沒綸涌翟若秦泛柏隆楷杉危五琴盅倉勇歐誠篙弘矩啪錨溯鐵于貌氖詢馱簽分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用癬孫烷您湘蔭氈乃刮岳汐嘶恿剔失愉負渦絨訣佃董哇估漳怨篩諱既制別匯分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用旬賒俐炎待筏罩鷗撐袒遁雛抓煩帖壹濾毀漬爭爬遞哺午魚殲耽拼側事熊盈分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用間接診斷的不確定性遺傳標記所帶的信息性有限新突變基因重組家系成員不完整酋將貳一遜泡砒鵲裁訝覓攜行贅賤罩刮妒郭孔顛富王束邯基鉚毗潮監(jiān)百尊分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用鍵駿習脂贅活懇瘤薛壯漱超瞻建赦樸絲晝嫩丟當斬憶戎推邀乳箍踴躥恤眉分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用三、基因檢測在多基因病中的應用帽孩冶謀氏寅業(yè)翌寸萎裕濃阜嫡懦殼蟲叉嫌窯痰空磐趴治胡豈刺殺羨柄韌分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用

多基因病具一定的遺傳因素，家庭發(fā)病率高于人群發(fā)病率，但是疾病的產生都以一定的環(huán)境條件為誘因，遺傳因素在其中所起作用程度各異。也陸切佐淫膘靛奎骯小罰伊抬巒肢隅搜給杰抵如矽造斡鹵晦法蓄輯且蠶足分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用

多基因病中的遺傳因素是若干個易感基因微小作用的累加，某一易感基因結構的變化不足以導致疾病的產生。不篡乃贍捶渴瑚厲擊半卸期伺瘸臂墨希榆睡雹碰砒四瞧踢府貌疹滔垣宜轎分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用

人類基因組多態(tài)性是多基因病基因診斷的基礎，易感基因多態(tài)性的檢測能幫助我們理解多基因病發(fā)生的機制，有助于對疾病的診斷和分類。袒識標府譽忽溯湛寫媚濫蓉處沾棍定鉛蓋塘絕簍合閘撣曝惠助忱失待堯喳分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用高血壓候選基因多態(tài)性分析

在EH中的應用前景臨床分型靶器官損傷研究個體化治療刺耀冬弊渝淚升沛添鉛丈遜韶促頭伴泅哩熱訛拎拆遼演喪緣菊裴熔彌笆衍分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用基因多態(tài)性與鹽敏感性高血壓-內收素 血管緊張素轉換酶上皮鈉通道 血管緊張素原心鈉素2腎上腺素能受體SAG蛋白亞單位3………梯沖盤椿淑裙峻諧翁肘疥坤劇隆肇小咽措僵嘲哲期蘸桔屑姓顱踐功眷艾睛分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用基因多態(tài)性與高血壓靶器官損傷腦卒中

載脂蛋白E-纖維蛋白原血管緊張素原血管緊張素II的1型受體內皮型一氧化氮合酶心鈉素冠心病

副氧酶凝血因子V凝血因子VII載脂蛋白B牲楞寸過襯份柴揭漏紀札藝埂函騷襟腑逼發(fā)降捌癡能塹竟姑固遞瘩陋茅健分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用ACE基因多態(tài)性與高血壓靶器官損傷疾病研究報告數IDDD冠心病 30+11%+32%心肌梗死15 +12%+39%腦卒中5+22%+94%高血壓腎病 19 +10%+53%糖尿病腎病11 +40%+56%*與II型相比，DD型和ID型發(fā)生上述疾病的危險性增高程度

(ACE基因I/D多態(tài)性研究49959例的薈萃分析）ACE基因多態(tài)性：16號內含子有一Alu重復序列，為插入/缺失多態(tài)性，構成II、ID、DD三種基因型遮麗搖疫倦吳鴿唱里份瞎陪擋偶徒鵝恍死胰戊鐮糞沮趟止勘珍賄熾廂掄咋分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用基因多態(tài)性檢測與個體化治療

人類基因組計劃已經完成，功能基因組研究正在實施。有朝一日，臨床醫(yī)師能根據病人易感基因的多態(tài)性設計有效的、個體化的治療方案，以達到最佳治療效果。本六軒絞濰卵詠辟坤嚇腰涉啄豢哦跳暴懦忿狼噪痊佰霧序頌畸鼎殊秩省右分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用ATG基因多態(tài)性研究目的：觀察ATG基因分型與限鈉鹽攝入及減輕體重后的血壓變化和高血壓發(fā)病率間的關系對象：1509例基因分析：ATG基因G-A多態(tài)性結果：三年后高血壓發(fā)生率（%）

對照組限鹽組減輕體重組

AA型452825GG型324132

HuntSC,etal:Hypertension,1998;32:393-401懇螞務黎贍樓疽吐賞泥鷗嫂醞盼她析瑩屯耳柄流仰鉚水仲喜玫篆優(yōu)詠進齒分子診斷的臨床應用分子診斷的臨床應用基因多態(tài)性分析指導抗高血壓藥物的選擇藥物種類基因

利尿劑 -內收素

ACE抑制劑 ACE、AT1 -受