重組dna技術(shù)與基因工程

重組DNA技術(shù)與基因工程5

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重組DNA技術(shù)與基因工程的基本概念重組DNA技術(shù)所需的基本條件重組DNA技術(shù)的操作過程目的基因的克隆與基因文庫的構(gòu)建外源基因在大腸桿菌中的表達外源基因在酵母中的表達A用于核酸操作的工具酶2

重組DNA技術(shù)所需的基本條件限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶DNA聚合酶核酸酶核酸修飾酶限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)及其生物功能識別雙鏈DNA分子中的特定序列，并切割DNA雙鏈主要存在于原核細菌中，幫助細菌限制外來DNA的入侵細菌的限制與修飾作用hsdR：編碼限制性核酸內(nèi)切酶hsdM：編碼限制性甲基化酶hsdS：編碼限制性酶和甲基化酶的協(xié)同表達1968年，Smith等人首先從流感嗜血桿菌d株中分離出

HindII和HindIII

限德制籠性揭核螺酸略內(nèi)懸切壤酶限線制錯性廈核雁酸膨內(nèi)礙切渾酶竭的索類位型主別要開特化性I型I饞I型I切I槍I型限制修飾多功能單功能雙功能蛋暈白奏結(jié)領(lǐng)構(gòu)異唯源衛(wèi)三旱聚供體同貍源盒二錢聚野體異扮源機二挎聚童體輔助因子ATPMg2+SAMATPMg2+SAMMg2+識別序列TGAN8TGCT旋轉(zhuǎn)對稱序列GAGCCAACN6GTGCCAGCAG切壟割包位紀點距描識尤別差序趙列購1k擋b處識右別借序召列滲內(nèi)或或諷附饞近距呆識圾別六序術(shù)列母下組游隨騾機證性蔥切找割特漫異辣性刮切鋼割2偏4蟻-租2寸6b晶p處限考制鴉性哨核究酸增內(nèi)嘴切皆酶限筍制彼性普核佛酸陳內(nèi)說切申酶測的挖命文名屬貌名效種提名象株服名H秒i院n曠d寨I違I綠IH嚷i晃nd泉I年I滿IHa魯e禿m往o橫p柱h重i橡l冊u亞si窩nf準(zhǔn)l餡u朗e改n傅z郵a擱ed嗜怨血食流靜感塘桿館菌d株同查一嗽菌眼株騰中來所毒含指的系多架個勤不敵同生的值限高制喬性姿核類酸上內(nèi)貨切總酶限盆制亦性賢核悼酸程內(nèi)亂切四酶I盯I型烘限押制獸性走核往酸雕內(nèi)扎切生酶超的叨基絨本酬特黨性識喂別矮雙撤鏈D栗N廣A分奮子噴中4言-統(tǒng)8對樹堿垮基撲的匪特抬定部序鼻列大遠部恥分遭酶雹的蜓切弟割伸位寄點饞在禽識桶別悼序詢列健內(nèi)聯(lián)部豎或木兩袋側(cè)識綢別楊切液割欠序牛列窯呈藏典袖型濃的盡旋檔轉(zhuǎn)翁對茂稱喬型回念文腦結(jié)許構(gòu)5’…G貴C譜TG昆A嚴A盟T阻T笑CG井A默G森…汪3口’3’…C臉G慰AC恒T雄T涌A時A皆GC鬧T情C樹…控5我’E盞c挺o嚴R也I的包識安別碧序飼列E億c壩o倒R駝I的稠切雷割郊位秘點E年c添o卵R豪I等司產(chǎn)簡生植的歐5’粘悅性季末校端5’…G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G…3’3’…C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C…5’E詠c送o堪R蠻I白3伍7℃5’

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P-A-A-T-T-C-G-A-G…3’3’

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OH-G-C-T-C…5’退添火倡4妥-足7℃5’…G-C-T-GA-A-T-T-C-G-A-G換…緩3遺’3’…C-G-A-C-T-T-A-AG-C-T-C依…彩5睜’O禍HPO升HPP愉s嘴t大I等黎產(chǎn)星生襲的囑3’粘雞性的末菌端5’…G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G促…浙3檢’3’…C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C蹈…必5通’P繳s諸t普I演3崖7℃5’…G-C-T-C-T-G-C-A-O賤HP-淡G健-經(jīng)G胖-尚A館-磁G…湖3前’3’…C-G-A-G-PO富H-A-C-G-T-C-C-T-C腸…團5響’退春火貸4笨-協(xié)7℃5’…G-C-T-C-T-G-C-AG-G-A-G醋…己3不’3’…C-G-A-GA-C-G-T-C-C-T-C群…歇5帶’O徒HPO袖HPP君v支u雞I插I等括產(chǎn)槐生登的施平拍頭眾末殃端5’…G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G自…飛3斤’3’…C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C富…勺5弱’P鐵v驕u墾I讀I歌3根7℃5’…G-C-T-C-A-G-OH

P-C-T-G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G-T-C-P

OH-G-A-C-C-T-C…5’限旅制留性群核編酸屋內(nèi)備切組酶I致I型捆限腐制熟性笨核蜜酸花內(nèi)遺切岡酶墳酶棕解妹反怖應(yīng)幅的填操馳作大隆部盾分I飾I型沫核搜酸唇內(nèi)黎切蕉酶搜需矩要乓相揭似灘的待反尼應(yīng)床條拔件賭：T翁r吵i近s季-蹈H義C曬l5嫁0渴m系M民p曠H銷7閱.捎5M買g旋C鹿l21邪0井m統(tǒng)MN猾a治C融l0南-更1迷5旱0僚m驚MD說T詢T1捧m思M0茂-傲5纖0彩m振M低甜鹽任酶1稠0右0宮m酒M中御鹽緞酶1小5難0忙m訊M高保鹽性酶V唐o膀l吼u喪m痛e2沒0忍-仰1毅0蝕0mlT悉T3誦7℃1貴-蠶1黨.饑5h鴉r1U核籍酸崗內(nèi)守切輪酶墳的獅酶機活必性獎：榜在消最徒佳洗反償應(yīng)矛條關(guān)件妖下脆反假應(yīng)透1舌小芝時辜，澡完怎全水朗解賞1mg標(biāo)趣準(zhǔn)D澤N菠A所配需勢的遞酶肝量限滅制免性恩核早酸蹲內(nèi)伯切秤酶I侍I型結(jié)限糕制顯性建核俯酸伍內(nèi)意切筋酶重酶欺解椅反四應(yīng)徑的電操信作I狐I型版核眉酸輸內(nèi)房誠切擺酶御的嗚多地酶歷聯(lián)菌合洋酶梯解劫：對揀鹽粱濃峽度蔬要仗求羅相希同滑的辯酶周，忙原竄則覆上戀可訂以葉同瘦時睛酶具切辨，偵但遷應(yīng)彩注辣意蒸：5’…G枕C逗T拾A文C加A河TG鐵G捧A心T筍C訪C何C倆G罵G悉GT丈T技C級G韻C汗A邀T伶…咳3筆’3’…C驢G待A輕T咐G傲T近AC狀C首T槍A典G粥G寶G味C振C誦CA擴A宏G還C站G捆T苗A度…巖5賓’B姨a透m用H姓I框S型m上a蜓I5’…G品C濱T瘦A蜘C漲A贊TG沸G壩A承T叼C減C蠟C倒G役G不GT蒜T考C配G巧C太A坦T請…螞3樓’3’…C逐G趟A羅T餅G槐T頂AC現(xiàn)C駐T閉A耐G遠G狐G甩C繭C燒CA事A脫G貫C住G越T啞A墓…敗5俊’5’…G撥C邀T確A煎C烤A賀TG隸G斥A停T快C凳C音C徐G綱G埋GT敲T炮C貨G武C獄A笨T揉…惹3啟’3’…C邊G烈A晶T地G濫T革AC軟C常T京A最G挖G穗G勿C第C蹄CA卵A答G丹C眾G劃T鬼A基…葛5起’限采制診性獅核婆酸命內(nèi)壇切恭酶I云I型屠限以制齊性念核課酸睛內(nèi)翁切寄酶納酶載解翼反化應(yīng)著的散操館作I播I型呢核乏酸牢內(nèi)恭切河酶對的錢多萄酶竭聯(lián)母合瓜酶芝解返：對江鹽蠢濃謠度顛要始求收不洽同劃的唱酶惡，菠可渣采裂取壯下傲列茄方店法既：使愛用水較聲貴稿的生酶電的牢鹽譯濃很度嗎，懷加寶大灘便荒宜帆酶懼的芬用洞量針，供同術(shù)時栽酶夾解低普鹽偶酶都先毛切允，慈然澤后法補磚加清鹽專，鉗高套鹽母酶崖再均切一捧種類酶它先透切告，腿然尚后饒更駱換星緩縱沖揭液須，寺另列一秧種澇酶般再消切0友.單1倍墾體識積稠的語5M享N模a纏A秤c晴p埋H宮5縱.物42唱.箭5倍石體駕積億的旅冰隸冷配乙河醇冰不浴忠5媽分燒鐘屈、革高艘速絹冷曾凍慈離乎心鴿1半0惹分跪鐘牌、賢干蜓燥限禮制非性疲核爬酸云內(nèi)述切昆酶影散響偉限宏制秋性暑核套酸桌內(nèi)怖切堡酶憐活昆性腥的憤因采素D謝N繞A樣虧品題的饑純吳度騰：蛋槍白福質(zhì)拉、蹦苯暈酚狀、慮氯姿仿病、威乙慘醇目、E璃D懼T畢A嫁、濫S夢D師S最、勒N旬a(chǎn)浮C爐l等加脖大累酶秩的朵用辯量濕，電1mg券D吧N音A用石1總0U酶加餅大懂反法應(yīng)攔總堤體獵積延宋長艷反籠應(yīng)盯時趴間限禍制雁性諒核綢酸被內(nèi)級切蜓酶影仁響韻限問制排性成核損酸希內(nèi)步切乳酶炎活牌性念的渠因瞇素D帝N讀A樣看品弓的陸甲士基監(jiān)化慘程沫度西：大存腸卡桿板菌伯中撫的d盯a柴m甲殘基薄化鼻酶預(yù)在5’G猾A銅T峽C分3’序坊列碌中汁的姥腺嘌浮呤N6位引辰入撓甲條基蘇，擾受論其怨影針響賠的銹酶午有B輪c篩l蠻I、M嘉b謹o罩I等都，駐但B籃a跳m胖H樓I朱、B啄g族l禾I夜I大、哲S纖a境u芒3勁A錄I不衰受任影賞響大乳腸絨桿猛菌傾中錘的d投c農(nóng)m甲賠基壟化投酶我在5’C部C則A踐G救G據(jù)3’或5’C漢C澇T顛G吼G門3’序輪列中高的胞創(chuàng)嘧薦啶C5位上俘引脹入芬甲軌基維，受冊其低影嚇響碎的博酶予有E姻c鵲o焰R翅I底I等哺腫乳芒動晉物伸中鑰的也甲賠基筒化豈酶呼在5’C艱G療3’序陷列屯中澡的C5位上丹引世入舌甲糖基限蔑制仁性四核再酸災(zāi)內(nèi)舟切鏈酶影許響爺限劣制靈性繪核煌酸銳內(nèi)節(jié)切垂酶島活冤性誘的趁因典素核碎酸男內(nèi)部切昌酶自的腰緩閥沖旁液滔性擺質(zhì)巡壽：高晚濃孫度病的喬酶厘、功高殺濃宅度岔的怎甘潔油陶、萬低宰離池子完強濟度掉、乒極霸端p慕H值等魂，會勤使構(gòu)一畏些麗核疏酸族內(nèi)太切湖酶滴的夠識書別開和杠切省割那序司列紡發(fā)漲生崖低嫩特趙異陳性興，求即所縣謂烏的S膜t服a鹽r旗a調(diào)c兵t燈i抵v先i效t摘y現(xiàn)嚼象E賢c證o聽R詞I在患正盤常貼條磚件抱下譯識芳別闊并削切財割忙5’G摸A規(guī)A闊T氧T單C臂3’序道列獄，捷但饞在搭甘油帽濃些度軌超擔(dān)過虧5柴%翅（v卻/皂v找）時失，斃也肉可斑切閉割5’P套u多P戒u倡A高T化P循y殼P芹y勇3’或仇者5’A蛛A瞇T筆T冶3’D丟N萌A連閃接百酶D套N違A連仙接狀酶哭的院基蜘本丑性顫質(zhì)修僵復(fù)私雙務(wù)鏈D反N控A上硬缺北口引處魄的疼磷攻酸洗二代酯怎鍵D疼N貨A連婦接創(chuàng)酶5’…G-C-T-C-T-G-C-AG-G-A-G愉…浮3駁’3’…C-G-A-GA-C-G-T-C-C-T-C踐…滑5張’O奴HPO誦HP5’…G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G珍…截3種’3’…C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C短…館5拉’n示i割c服kn是i駛c臣kD搏N涌A連敗接逮酶D魔N趟A連距接完酶包的柏基嚼本內(nèi)性修質(zhì)修鋤復(fù)英與R畜N酸A鏈撤結(jié)衡合溜的D宅N繞A鏈在上弱缺衣口疫處刻的炎磷糖酸潮二尖酯堤鍵T亡4寧-編D序N拋A連湊接妻酶5’…G-C-U-C-U-G-C-C-G-G-A-G…涂3艇’3’…C-G-A-GA-C-G-G-C-C-T-C何…餅5寬’O智HPn腫i味c基k5’…G-C-U-C-U-G-C-C-G-G-A-G…琴3綱’3’…C-G-A-G-A-C-G-G-C-C-T-C滲…利5獄’D榆N江A連足接點酶D慚N想A連尖接賴酶修的病基此本換性國質(zhì)連御接屋多珍個貴平駱頭沿雙豪鏈D炭N確A分恭子乓：5’…G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G…3與’3’…C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C…5法’5’…G-C-T-C-A-G-OH

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