腫瘤的基因診斷課件

腫瘤的基因診斷溫州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院溫州醫(yī)學(xué)院附一醫(yī)檢驗(yàn)科陶志華腫瘤的基因診斷溫州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院1

腫瘤是細(xì)胞的異常增生有結(jié)構(gòu)、功能和代謝的異常具有超過(guò)正常細(xì)胞增生能力腫瘤概念腫瘤是細(xì)胞的異常增生腫瘤概念2

在細(xì)胞內(nèi)核酸代謝的異常:腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的核酸代謝有顯著的不同；不同類(lèi)型腫瘤細(xì)胞的核酸代謝也有較大的差異；相同惡性程度腫瘤細(xì)胞的核酸代謝也有所不同。

腫瘤是一種分子病在細(xì)胞內(nèi)核酸代謝的異常:腫瘤是一種分子病3

癌基因的激活抑癌基因的失活（或缺失）腫瘤發(fā)生機(jī)理癌基因的激活腫瘤發(fā)生機(jī)理4原癌基因癌基因病毒癌基因腫瘤抑制基因腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因腫瘤耐藥基因等腫瘤相關(guān)基因原癌基因腫瘤相關(guān)基因5細(xì)胞基因組中具有能夠使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因癌基因在正常細(xì)胞的基因組中存在不表達(dá)狀態(tài)表達(dá)水平不足以引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化癌基因：細(xì)胞基因組中具有能夠使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因癌基因：6定位功能癌基因，產(chǎn)物分泌蛋白生長(zhǎng)因子sisPDGFβ鏈跨膜蛋白受體型酪氨酸激酶erbB,EGF受體erbB2,EGF樣受體(neu)fms,CSF-1受體膜結(jié)合蛋白G-蛋白非受體型酪氨酸激酶rasp21rassrcpp60src胞漿可溶性蛋白非受體型酪氨酸激酶絲氨酸/蘇氨酸激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)連接蛋白ab1rafcrk,SH2/SH3調(diào)節(jié)蛋白vav,SH2調(diào)節(jié)蛋白胞核蛋白轉(zhuǎn)錄因子mycmybfosjunerbA,T3受體表1細(xì)胞癌基因按其產(chǎn)物定位和功能分類(lèi)定位功能癌基因，產(chǎn)物分泌蛋白生長(zhǎng)因子sisPDGFβ鏈跨膜7能夠抑制細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化或抑制細(xì)胞異常增殖的基因

目前研究較多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。

抑癌基因能夠抑制細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化或抑制細(xì)胞異常抑癌基因8基因染色體定位相關(guān)腫瘤基因產(chǎn)物及功能RB13q14RB、成骨肉瘤、胃癌、SCLC、乳癌、結(jié)腸癌p105，控制生長(zhǎng)WT11p13WT、橫紋肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、肝母細(xì)胞瘤WT-ZFP，負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子NF-117p12神經(jīng)纖維瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、雪旺氏細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維肉瘤GAP，拮抗p21rasBDCC18q21.3結(jié)腸瘤P192,細(xì)胞粘附分子p5317p13星狀細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、乳癌、成骨肉瘤、SCLC、胃癌、磷狀細(xì)胞肺癌P53控制腫瘤生長(zhǎng)erbA17q21ANLLT3受體，含鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子表2已確定的幾種抑癌基因

基因染色體定位相關(guān)腫瘤基因產(chǎn)物及功能RB13q14RB、成骨9野生型P53生物學(xué)活性當(dāng)DNA損傷的時(shí)候,P53基因就明顯表達(dá)使細(xì)胞在G1期生長(zhǎng)阻滯，促使細(xì)胞凋亡。抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)保持DNA完整性野生型P53生物學(xué)活性當(dāng)DNA損傷的時(shí)候,P53基因就明顯表10包括腫瘤轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因或腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因包括腫瘤轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因或腫瘤轉(zhuǎn)移抑制腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因11其表達(dá)使腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥的基因。

腫瘤耐藥基因其表達(dá)使腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥的基因。腫瘤耐藥基因12

血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）表皮生長(zhǎng)因子（EGF）VGF基因等腫瘤生長(zhǎng)因子

血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）腫瘤生長(zhǎng)因子13

腫瘤的基因診斷腫瘤的基因診斷目前主要集中在以下幾個(gè)方面：腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物腫瘤抗藥基因突變的癌基因腫瘤相關(guān)的病毒基因腫瘤的基因診斷腫瘤的基因診斷目前主要集中在以下幾個(gè)方面：14標(biāo)志分類(lèi)機(jī)制分子標(biāo)志應(yīng)用于癌癥診斷分子遺傳性染色體易位

t(9；22)，t（14；18），t(11；12)等白血病、淋巴瘤等點(diǎn)突變p53,ERras等胃癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肺癌等缺失BRCA1，BRCA2，DCC等乳腺癌、結(jié)腸癌改變拼接CD44，muc-1,VLA-4等結(jié)腸癌、腎癌、乳腺癌、腦瘤等擴(kuò)增erb-B2,EGFR,N-myc,ras乳腺癌、腦瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤比例改變明膠酶A/TIMP2乳腺癌轉(zhuǎn)移等病毒性病毒轉(zhuǎn)化HPV,HCV,HBV，EBV宮頸癌、肝癌、鼻咽癌等組織性組織分化PSA,PSMA前列腺癌muc-18,酪氨酸酸酶，Mage-3黑素瘤AFP,白蛋白肝癌甲狀腺球蛋白甲狀腺癌NPGP9.5，酪氨酸羥化酶表面活性物質(zhì)等神經(jīng)母細(xì)胞瘤腫瘤性腫瘤細(xì)胞特征CEA肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌β-HCG黑素瘤等CK-19肺鱗癌端粒酶結(jié)腸癌、乳腺癌、頭頸部癌等微衛(wèi)星體等結(jié)腸癌、乳腺癌、頭頸部癌等表3

腫瘤基因診斷的分子標(biāo)志及其應(yīng)用標(biāo)志分類(lèi)機(jī)制分子標(biāo)志應(yīng)用于癌癥診斷分子遺傳性染色體易位t(15

可分為四大類(lèi)組織特異性基因標(biāo)志腫瘤特異性基因標(biāo)志血管生成因子其它與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子及基質(zhì)蛋白酶及其抑制劑腫瘤轉(zhuǎn)移基因標(biāo)志物可分為四大類(lèi)腫瘤轉(zhuǎn)移基因標(biāo)志物16組織特異性基因標(biāo)志物指腫瘤組織和/或起源正常組織所特有，在淋巴組織和血細(xì)胞中不存在的。如角質(zhì)蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）mRNA等。

.組織特異性基因標(biāo)志物指腫瘤組織和/或起源正常組織所特有，在淋17腫瘤特異性基因標(biāo)志物存在于腫瘤及其起源的正常細(xì)胞中，不存在于其他細(xì)胞。如CEAmRNA、AFPmRNA、PSAmRNA等。

腫瘤特異性基因標(biāo)志物存在于腫瘤及其起源的正常細(xì)胞中，不存在于18血管生成因子如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）等。

血管生成因子如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）等。19腫瘤抗藥基因?qū)τ谀[瘤化療效果及預(yù)后進(jìn)行推測(cè)；還可以將腫瘤抗藥基因?qū)斯撬杓?xì)胞，特別是骨髓干細(xì)胞中，提高機(jī)體對(duì)于抗腫瘤化療藥物的耐受程度，如此可以加大抗腫瘤化療藥物的使用劑量，提高抗腫瘤化療的治療效果。腫瘤抗藥基因?qū)τ谀[瘤化療效果及預(yù)后進(jìn)行推測(cè)；20腫瘤抗藥基因多藥抗性基因一l（MDR1），其編碼的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。.其它一些與細(xì)胞內(nèi)藥物代謝有關(guān)的基因也可以看作是腫瘤抗藥基因，如谷胱苷肽S一轉(zhuǎn)移酶（GST），可使機(jī)體解毒功能增強(qiáng)；癌基因bcl-2的表達(dá)可抑制腫瘤化療藥物所誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞程序化死亡等。

.

腫瘤抗藥基因多藥抗性基因一l（MDR1），其編碼的蛋白如P-21突變的癌基因癌基因的突變是癌基因激活的重要方式和途徑。除了見(jiàn)到較大范圍片段的缺失或插人以及染色體轉(zhuǎn)位之外，大多數(shù)情況下，都是少數(shù)核苷酸或單個(gè)堿基的突變。.癌基因點(diǎn)突變的檢測(cè)單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）檢測(cè)技術(shù)等.突變的癌基因癌基因的突變是癌基因激活的重要方式和途徑。除了見(jiàn)22腫瘤相關(guān)的病毒基因EB病毒（EBV）人乳頭瘤病毒（HPV）乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染對(duì)于這些腫瘤組織細(xì)胞中相關(guān)病毒基因及其編碼產(chǎn)物的檢測(cè)，可以作為這些類(lèi)型的腫瘤診斷的標(biāo)志。致瘤病毒引起的惡性轉(zhuǎn)化作用引起了人們極大的關(guān)注腫瘤相關(guān)的病毒基因EB病毒（EBV）對(duì)于這些腫瘤組織細(xì)胞中相23腫瘤基因診斷的常用方法PCR、RT-PCRSouthernblot雜交技術(shù)、Northernblot雜交技術(shù)基因芯片基因測(cè)序。腫瘤基因診斷的常用方法PCR、RT-PCR24腫瘤基因的分子診斷意義

1.腫瘤的早期診斷和篩選2.腫瘤療效監(jiān)測(cè)3.腫瘤的預(yù)后判斷4.腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測(cè)

腫瘤基因的分子診斷意義1.腫瘤的早期診斷和篩選25腫瘤基因檢測(cè)在腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測(cè)中

應(yīng)用舉例腫瘤基因檢測(cè)在腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測(cè)中

應(yīng)用舉例26腫瘤的基因診斷課件27前列腺癌特異性基因DD3PCA3

DD3PCA3是一種非編碼RNA的基因，定位于9q21～22染色體。它為前列腺癌特異性基因之一，DD3PCA3mRNA僅在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)，而在其它正常組織和癌組織以及細(xì)胞系中均不表達(dá)。

前列腺癌特異性基因DD3PCA3DD3PCA3是一種非編碼28DD3mRNA14外顯子擴(kuò)增結(jié)果M：50bpDNALadder；1：LNCaP陽(yáng)性對(duì)照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結(jié)腸癌；10：結(jié)腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉(zhuǎn)移性腺癌；18：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤(pán)；23：試劑空白。DD3mRNA14外顯子擴(kuò)增結(jié)果M：50bpDNA29DD3mRNA13外顯子擴(kuò)增結(jié)果M：50bpDNALadder；1：LNCaP陽(yáng)性對(duì)照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結(jié)腸癌；10：結(jié)腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉(zhuǎn)移性腺癌；18：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤(pán)；23：試劑空白。DD3mRNA13外顯子擴(kuò)增結(jié)果M：50bpDNA30DD3mRNA34外顯子擴(kuò)增結(jié)果M：50bpDNALadder；1：LNCaP陽(yáng)性對(duì)照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結(jié)腸癌；10：結(jié)腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉(zhuǎn)移性腺癌；18：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤(pán)；23：試劑空白。DD3mRNA34外顯子擴(kuò)增結(jié)果M：50bpDNA31前列腺組織和其他腫瘤組織及癌旁組織DD3mRNA檢測(cè)結(jié)果前列腺組織和其他腫瘤組織及癌旁組織DD3mRNA檢測(cè)結(jié)果32

M：50bpDNA標(biāo)準(zhǔn)；1：LNCaP陽(yáng)性對(duì)照；2：BPH；3：健康男性志愿者；4～10為PCa；11為試劑空白。

外周血DD3mRNA的RT-PCR擴(kuò)增電泳圖

M：50bpDNA標(biāo)準(zhǔn)；1：LNCaP陽(yáng)性對(duì)照；2：BP33RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

44例PCa組中13例可見(jiàn)DD3mRNA陽(yáng)性結(jié)果(其中B期、C期及D期分別有為0例、2例，11例)。30例BPH患者和18名健康男性志愿者標(biāo)本中均未檢出DD3mRNA。

RT-PCR檢測(cè)結(jié)果44例PCa組中13例可見(jiàn)DD3mR34外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR擴(kuò)增電泳圖

M：50bpDNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：LNCaP陽(yáng)性對(duì)照；2：陰性對(duì)照(女性)；3：BPH患者；4：健康男性志愿者；5～8：未治療的PCa；9：試劑空白外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR擴(kuò)增電泳圖M：5035巢式RT-PCR檢測(cè)結(jié)果44例PCa組中21例可見(jiàn)DD3mRNA陽(yáng)性結(jié)果(其中B期、C期、D期分別有1例、5例、15例)30例BPH患者和18名健康男性志愿者均未見(jiàn)陽(yáng)性結(jié)果

巢式RT-PCR檢測(cè)結(jié)果44例PCa組中21例可見(jiàn)DD3m36兩種方法對(duì)PCa患者外周血DD3mRNA檢出率比較RT-PCR巢式RT-PCR+-+130-823注：χ2=20.2，P<0.001；Kappa＝0.629，P<0.001

兩種方法對(duì)PCa患者外周血DD3mRNA檢出率比較巢式RT37外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的靈敏度

M:50bpDNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；1～6:依次為105、104、103、102、101、1個(gè)LNCaP細(xì)胞/ml全血；7:陰性對(duì)照；8:試劑空白

外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的靈敏度M:5038組別

DD3mRNA檢出率(%，例數(shù))

PCa（未治療）

100%（11/11）

BPH

0%（0/30）

健康男性志愿者（對(duì)照）

0%（0/18）

注：經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2＝59.0P<0.01不同前列腺疾病患者其外周血DD3mRNA檢出率比較

巢式RT-PCR組別DD3mRNA檢出率(%，例數(shù))PCa（未治療）39PCa不同臨床分期未治療組和治療組DD3mRNA陽(yáng)性率比較(%,例數(shù))

臨床分期DD3mRNA未治療組內(nèi)分泌治療組B期100.0(1/1)0.0（0/2）C期100.0(3/3)25.0（2/8）*D期100.0(7/7)34.8(8/23)**合計(jì)100.0(11/11)30.3(10/33)**注：內(nèi)分泌治療組與未治療組比較，*P<0.05，**P<0.01巢式RT-PCRPCa不同臨床分期未治療組和治療組DD3mRNA陽(yáng)性率比較40謝謝!謝謝!41樹(shù)立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識(shí)。8月-238月-23Sunday,August6,2023人生得意須盡歡，莫使金樽空對(duì)月。01:28:2801:28:2801:288/6/20231:28:28AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。8月-2301:28:2801:28Aug-2306-Aug-23加強(qiáng)交通建設(shè)管理，確保工程建設(shè)質(zhì)量。01:28:2801:28:2801:28Sunday,August6,2023安全在于心細(xì)，事故出在麻痹。8月-238月-2301:28:2801:28:28August6,2023踏實(shí)肯干，努力奮斗。2023年8月6日1:28上午8月-238月-23追求至善憑技術(shù)開(kāi)拓市場(chǎng)，憑管理增創(chuàng)效益，憑服務(wù)樹(shù)立形象。06八月20231:28:28上午01:28:288月-23嚴(yán)格把控質(zhì)量關(guān)，讓生產(chǎn)更加有保障。八月231:28上午8月-2301:28August6,2023作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)記得牢，駕輕就熟除煩惱。2023/8/61:28:2801:28:2806August2023好的事情馬上就會(huì)到來(lái)，一切都是最好的安排。1:28:28上午1:28上午01:28:288月-23專(zhuān)注今天，好好努力，剩下的交給時(shí)間。8月-238月-2301:2801:28:2801:28:28Aug-23牢記安全之責(zé)，善謀安全之策，力務(wù)安全之實(shí)。2023/8/61:28:28Sunday,August6,2023相信相信得力量。8月-232023/8/61:28:288月-23謝謝大家！樹(shù)立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識(shí)。8月-238月-23We42樹(shù)立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識(shí)。8月-238月-23Sunday,August6,2023人生得意須盡歡，莫使金樽空對(duì)月。01:28:2801:28:2801:288/6/20231:28:28AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。8月-2301:28:2801:28Aug-2306-Aug-23加強(qiáng)交通建設(shè)管理，確保工程建設(shè)質(zhì)量。01:28:2801:28:2801:28Sunday,August6,2023安全在于心細(xì)，事故出在麻痹。8月-238月-2301:28:2801:28:28August6,2023踏實(shí)肯干，努力奮斗。2023年8月6日1:28上午8月-238月-23追求至善憑技術(shù)開(kāi)拓市場(chǎng)，憑管理增創(chuàng)效益，憑服務(wù)樹(shù)立形象。06八月20231:28:28上午01:28:288月-23嚴(yán)格把控質(zhì)量關(guān)，讓生產(chǎn)更加有保障。八月231:28上午8月-2301:28August6,2023作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)記得牢，駕輕就熟除煩惱。2023/8/61:28:2801:28:2806August2023好的事情馬上就會(huì)到來(lái)，一切都是最好的安排。1:28:28上午1:28上午01:28:288月-23專(zhuān)注今天，好好努力，剩下的交給時(shí)間。8月-238月-2301:2801:28:2801:28:28Aug-23牢記安全之責(zé)，善謀安全之策，力務(wù)安全之實(shí)。2023/8/61:28:28Sunday,August6,2023相信相信得力量。8月-232023/8/61:28:28