文獻(xiàn)匯報(bào)課件

PDL1在I型糖尿病患者的胰島上表達(dá)并被α和γ干擾素通過(guò)IRF1途徑誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)PDL1isexpressedintheisletsofpeoplewithtype1diabetesandisup-regulatedbyinterferons-αand-γviaIRF1induction匯報(bào)人：李民IF=6.1831aPDL1在I型糖尿病患者的胰島上表達(dá)并被α和γ干擾素通過(guò)IR本文的研究要素：疾?。篒型糖尿病表型：胰島細(xì)胞上表達(dá)PDL-1變量：I型和II型干擾素通路：JAK/STAT-IRF1通路2a本文的研究要素：2a匯報(bào)內(nèi)容一、研究背景二、研究目的和內(nèi)容三、材料和方法四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果五、實(shí)驗(yàn)結(jié)論六、學(xué)習(xí)體會(huì)3a匯報(bào)內(nèi)容3a一、研究背景1、1型糖尿病（type1diabetes）糖尿病是以慢性高血糖為特征，以糖脂代謝紊亂為主要表現(xiàn)的一組代謝性疾病。各種不同原因均可造成胰島β細(xì)胞分泌胰島素絕對(duì)或相對(duì)不足，周圍組織細(xì)胞對(duì)胰島素的生物效應(yīng)出現(xiàn)抵抗或耐受，從而導(dǎo)致血糖升高。臨床上主要分為1型糖尿病和2型糖尿病兩大類，T1DM是由于自身免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤地攻擊和損傷胰島β細(xì)胞，致使胰島素合成和分泌減少或缺乏引起的自身免疫性疾病，多發(fā)生于兒童和青少年。T1DM的基本特征為，患者起病急劇，體內(nèi)胰島素絕對(duì)不足，易發(fā)生酮癥酸中毒。特點(diǎn)：細(xì)胞免疫和體液免疫因子參與疾病的病理過(guò)程4a一、研究背景1、1型糖尿?。╰ype1diabetes）2、免疫檢查點(diǎn)抑制劑（immunecheckpointinhibitors）腫瘤免疫治療是通過(guò)重新啟動(dòng)并維持腫瘤-免疫循環(huán)，恢復(fù)機(jī)體正常的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而控制與清除腫瘤的一種治療方法。包括單克隆抗體類免疫檢查點(diǎn)抑制劑、治療性抗體、癌癥疫苗、細(xì)胞治療和小分子抑制劑等。近期伴隨諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的頒發(fā)，PD-1、CTLA-4等作為免疫系統(tǒng)“剎車”的免疫檢查點(diǎn)分子一時(shí)間家喻戶曉，治療癌癥未來(lái)可期！而上述倆分子，真是讓人又愛(ài)又恨。所愛(ài)者無(wú)外乎它倆能守免疫之平衡，可阻止淋巴細(xì)胞意外暴走，以免傷己傷身；而所恨者無(wú)疑就在于它倆心志不堅(jiān)，稍不留神就給了腫瘤可乘之機(jī)，在被特異性配體（如腫瘤的PD-1L）成功洗腦后，就誤上了賊船。針對(duì)免疫檢查點(diǎn)治療，重啟并維持腫瘤-免疫循環(huán)意義非凡。目前，針對(duì)免疫檢查點(diǎn)研制的抑制劑已經(jīng)在臨床應(yīng)用，并取得了一定的療效。5a2、免疫檢查點(diǎn)抑制劑（immunecheckpointiCTLA4、PD-L1作用機(jī)制示意圖PD-1:程序性死亡受體-1；PDL-1:程序性死亡受體-1配體。CTLA-4：細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4，又名CD152。6aCTLA4、PD-L1作用機(jī)制示意圖PD-1:程序性死亡受體腫瘤細(xì)胞結(jié)合PD1導(dǎo)致免疫逃逸抗PD1抗體結(jié)合PD1后T細(xì)胞發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞作用（注：圖片轉(zhuǎn)自解螺旋）7a腫瘤細(xì)胞結(jié)合PD1導(dǎo)致免疫逃逸抗PD1抗體結(jié)合PD1后T細(xì)胞3、JAK/STAT-IRF1通路酪氨酸激酶(januskinase,JAK)/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(signaltransducerandactivatoroftranscription,STAT)(JAK/STAT)信號(hào)通道涉及細(xì)胞分化、增殖、凋亡及免疫調(diào)節(jié)等病理生理過(guò)程,與癌癥、支氣管哮喘、心血管疾病、糖尿病等多種疾病密切相關(guān),是傳導(dǎo)細(xì)胞因子刺激信號(hào)的基本途徑之一。JAK包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2；STAT包括7個(gè)成員:STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b、STAT6。

干擾素調(diào)節(jié)因子（IRF1），作為重要的核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，最初被發(fā)現(xiàn)可以調(diào)節(jié)型干擾素的產(chǎn)生。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，參與了多種細(xì)胞過(guò)程的調(diào)控，包括細(xì)胞增殖、抗腫瘤和抗病毒反應(yīng)以及免疫炎癥反應(yīng)順序?yàn)椋篔AKSTATIRF18a3、JAK/STAT-IRF1通路8a4、相關(guān)的前期研究結(jié)果①腫瘤細(xì)胞上的PDL-1主要是被IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、TGF-β和TNF-α等幾種促炎干擾素刺激表達(dá)；②JAK/STAT-IRF-1途徑是干擾素介導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞表達(dá)PDL-1的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子；③在遺傳高風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成I型糖尿病的兒童血液中，I型干擾素先于自身免疫啟動(dòng)前發(fā)展；④I型干擾素中的IFN-α表達(dá)于I型糖尿病患者的胰島上。⑤動(dòng)物模型證實(shí)抑制PD-1或PDL1可加速1型糖尿病發(fā)生，且模型動(dòng)物胰島B細(xì)胞上過(guò)表達(dá)PDL-1分子9a4、相關(guān)的前期研究結(jié)果9a盡管免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療重燃了腫瘤免疫療法的希望，但與其他癌癥治療方法相似，該療法也是有其副作用的，如遲發(fā)反應(yīng)以及療效受限等，有時(shí)甚至可能危及生命，因?yàn)檫^(guò)度活躍的免疫反應(yīng)也會(huì)引發(fā)或加速嚴(yán)重的自身免疫反應(yīng)的。據(jù)報(bào)道接受免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療的病人中有15%的人罹患內(nèi)分泌自身免疫病，包括1型糖尿??；。然而PDL-1是否在1型糖尿病病人的胰島細(xì)胞上表達(dá)是不清楚的，如果表達(dá)其表達(dá)調(diào)控機(jī)制又是什么？10a盡管免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療重燃了腫瘤免疫療法的希望，但與其他癌二、研究目的和內(nèi)容研究目的：1、探索1型糖尿病患者胰島B細(xì)胞上是否表達(dá)PDL-1分子？2、探索哪些干擾素可以誘導(dǎo)胰島表達(dá)PDL-1，及證明干擾素是否主要通過(guò)JAK/STAT-IRF1途徑誘導(dǎo)PDL-1表達(dá)？3、補(bǔ)充說(shuō)明1型糖尿病的發(fā)病機(jī)制以及為更好應(yīng)用免疫檢查點(diǎn)抑制劑提供新的靶標(biāo)和思路。11a二、研究目的和內(nèi)容研究目的：11a研究?jī)?nèi)容T1DM患者和對(duì)照組胰島切片免疫組化技術(shù)胰島細(xì)胞PDL-1表達(dá)與否EndoC-βH1細(xì)胞系、人胰島細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞系探索哪些干擾素可以誘導(dǎo)PDL-1表達(dá)干擾素處理證實(shí)JAK/STAT-IRF1誘導(dǎo)

途徑藥物處理或沉默表達(dá)表型檢測(cè)體外實(shí)驗(yàn)（invitro）12a研究?jī)?nèi)容T1DM患者和對(duì)照組胰島切片免疫組化技術(shù)胰島細(xì)胞PD1、材料來(lái)源：12例1型糖尿病患者和6例非糖尿病患者胰臟切片來(lái)自?？巳靥悄虿n案生物庫(kù)或DiViD活檢組織。2、方法：①免疫組織化學(xué)檢測(cè)標(biāo)本PDL-1、胰島素和胰高血糖素的表達(dá)；②RT-PCR、流式細(xì)胞儀和免疫印跡雜交用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞因子誘導(dǎo)人類胰島B細(xì)胞系、EndoC-βH1細(xì)胞系和人胰島細(xì)胞的PDL-1、胰島素的表達(dá)；③預(yù)先證明的特異siRNA用來(lái)沉默STAT1、STAT2、IRF1和JAK1信號(hào)通路；④使用JAK抑制劑Ruxolitinib來(lái)證實(shí)關(guān)鍵的步驟；⑤

使用6.0版本的GraphPadPrism程序進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。三、材料和方法13a1、材料來(lái)源：三、材料和方法13a1、PDL-1在1型糖尿病患者含有胰島素的胰島細(xì)胞表達(dá)升高，在非糖尿病胰島及胰島素缺失胰島無(wú)表達(dá)或低表達(dá)。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果14a1、PDL-1在1型糖尿病患者含有胰島素的胰島細(xì)胞表達(dá)升高，2、干擾素是人類胰島B細(xì)胞表達(dá)PDL1的主要調(diào)節(jié)因子，其中α和γ干擾素起作用、干擾素-1β無(wú)作用。展示經(jīng)干擾素處理EndoC-βH1細(xì)胞系的RT-PCR、WB和流式細(xì)胞檢測(cè)部分結(jié)果15a2、干擾素是人類胰島B細(xì)胞表達(dá)PDL1的主要調(diào)節(jié)因子，其中α3、抑制JAK1的活性降低α干擾素誘導(dǎo)PDL1表達(dá)的效能。4、α干擾素誘導(dǎo)PDL1表達(dá)只需要STAT1、STAT2兩者之一具有活性即可。5、IRF1作為STAT1、STAT2的下游轉(zhuǎn)錄激活因子，在α干擾素誘導(dǎo)PDL1表達(dá)中具有重要作用。16a3、抑制JAK1的活性降低α干擾素誘導(dǎo)PDL1表達(dá)的效能。1一、證實(shí)了1型糖尿病患者胰島B細(xì)胞上表達(dá)PDL-1分子；胰島B細(xì)胞上的PDL1分子有助于減輕免疫攻擊，表達(dá)PDL1的胰島細(xì)胞可能生存更長(zhǎng)久；二、證明了α和γ干擾素可以并主要通過(guò)JAK/STAT-IRF1途徑誘導(dǎo)PDL-1表達(dá)；三、發(fā)現(xiàn)單獨(dú)沉默STAT1或STAT2不能阻斷干擾素誘導(dǎo)PDL1表達(dá)，只有同時(shí)沉默二者才能起到阻斷作用，這與它們?cè)诎┘?xì)胞中的作用不同，可能成為治療癌癥同時(shí)不引起自身免疫病的靶點(diǎn)；四、免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療可能阻斷PDL1對(duì)胰島的保護(hù)作用，加速胰島細(xì)胞的丟失和1型糖尿病的形成；五、α干擾素既可以誘發(fā)胰島炎癥損傷β細(xì)胞，也可以誘導(dǎo)表達(dá)PDL-1減輕炎癥,其發(fā)生的時(shí)序不同，進(jìn)一步明確時(shí)間節(jié)點(diǎn)有助于臨床相應(yīng)藥物的應(yīng)用。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)論17a一、證實(shí)了1型糖尿病患者胰島B細(xì)胞上表達(dá)PDL-1分子；胰六、學(xué)習(xí)體會(huì)1、本文只有組織表達(dá)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果，沒(méi)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，顯得論證層次不足，實(shí)際上是已有相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)表；2、本文實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不夠嚴(yán)謹(jǐn)，如用siRNA沉默JAK/STAT-IRF1通路分子的實(shí)驗(yàn)中只用了EndoC-βH1細(xì)胞系一種細(xì)胞系和α干擾素一種干擾素；做了敲低而沒(méi)有做過(guò)表達(dá)；也沒(méi)有使用其他細(xì)胞系作為對(duì)照；3、

本文提出的STAT分子在腫瘤和自身免疫作用的不同，以及α干擾素存在時(shí)序性的雙重作用是可以進(jìn)一步研究的；3、本文的研究思路給了我們一個(gè)提示：其他以細(xì)胞免疫為主的自身免疫病或感染性疾病是不是也有PDL-1表達(dá)參與疾病的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸。18a六、學(xué)習(xí)體會(huì)1、本文只有組織表達(dá)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果，沒(méi)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)免疫檢查點(diǎn)