實(shí)驗(yàn)三-不規(guī)則抗體課件

實(shí)驗(yàn)三不規(guī)則抗體的篩選與鑒定實(shí)驗(yàn)三不規(guī)則抗體的篩選與鑒定1什么是不規(guī)則抗體?指ＡＢＯ血型以外的抗體，即抗Ａ和抗Ｂ以外的抗體.也包括ABO亞型抗體，如抗A1、A2、A3等什么是不規(guī)則抗體?指ＡＢＯ血型以外的抗體，即抗Ａ和抗Ｂ以外的2不規(guī)則抗體有何臨床意義?引起各類免疫性輸血反應(yīng)縮短輸入RBC的存活時(shí)間新生兒溶血病不規(guī)則抗體有何臨床意義?3不規(guī)則抗體篩選方法有那些?鹽水介質(zhì)法間接抗球蛋白試驗(yàn)低離子強(qiáng)度介質(zhì)聚凝胺法酶技術(shù)凝膠微柱法再結(jié)吸收、放散等血清學(xué)手段，對(duì)抗體的特異性作分析不規(guī)則抗體篩選方法有那些?鹽水介質(zhì)法4一、不規(guī)則抗體篩選實(shí)驗(yàn)

--鹽水法.凝聚胺法【實(shí)驗(yàn)原理】應(yīng)用特定的篩選細(xì)胞（1，2，3號(hào)），與被檢者血清在兩種介質(zhì)（鹽水，低離子介質(zhì)凝聚胺）中反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷機(jī)體所產(chǎn)生的同種抗體類別。一、不規(guī)則抗體篩選實(shí)驗(yàn)

--鹽水法.凝聚胺法5【標(biāo)本、試劑與器材】1.標(biāo)本被檢者不抗凝全血；2.試劑符合國家標(biāo)準(zhǔn)的1、2、3號(hào)篩選譜細(xì)胞、0.9%氯化鈉、凝聚胺試劑盒3.器材試管、滴管、記號(hào)筆、離心機(jī)等.【標(biāo)本、試劑與器材】6【操作步驟】

表一123待撿血清1滴1滴1滴2～5%1號(hào)篩選譜細(xì)胞1滴2～5%2號(hào)篩選譜細(xì)胞1滴2～5%3號(hào)篩選譜細(xì)胞1滴1.鹽水法按表一加樣后,1000×g離心15s，輕輕搖動(dòng)試管，肉眼觀察有無凝集結(jié)果，記錄結(jié)果.

2.凝聚胺按表一加樣后,依次加入低離子介質(zhì)溶液、凝聚胺溶液,1000×g離心15s，棄上清夜,搖動(dòng)試管,看是否形成凝集(如沒有凝集形成需重做),加懸浮液,觀察凝集是否散開,記錄結(jié)果【操作步驟】7【結(jié)果判斷】1、2、3號(hào)篩選譜細(xì)胞管出現(xiàn)±～4+凝集者為抗體篩選陽性結(jié)果?！窘Y(jié)果判斷】8【方法評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)】1.被檢者自身血清加自身紅細(xì)胞管應(yīng)無凝集；若出現(xiàn)凝集則提示存在自身免疫性抗體；2.在鹽水、低離子凝聚胺介質(zhì)中，1、2、3號(hào)篩選譜細(xì)胞只要有一個(gè)或一個(gè)以上管出現(xiàn)±～4+凝集，表示被檢者血清中存在不規(guī)則抗體，需進(jìn)一步鑒定抗體特異性；3.無凝集，表示被檢者血清中不存在不規(guī)則抗體。4.低離子凝聚胺出現(xiàn)凝集，而鹽水介質(zhì)無凝集，則提示不規(guī)則抗體為IgG性質(zhì)?！痉椒ㄔu(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)】1.被檢者自身血清加自身紅細(xì)胞管應(yīng)無9二、不規(guī)則抗體鑒定試驗(yàn)

--凝膠微柱法【實(shí)驗(yàn)原理】對(duì)不規(guī)則同種抗體篩選試驗(yàn)陽性的被檢者應(yīng)檢查其抗體特異性。根據(jù)譜細(xì)胞（1-10號(hào)共10個(gè)鑒定細(xì)胞）與被檢者血清在三種介質(zhì)（鹽水、酶、抗人球蛋白）中反應(yīng)結(jié)果加以判定。二、不規(guī)則抗體鑒定試驗(yàn)

--凝膠微柱法10【標(biāo)本、試劑與器材】1.標(biāo)本被檢者不抗凝全血；2.試劑符合國家標(biāo)準(zhǔn)的1-10號(hào)鑒定譜細(xì)胞、凝膠微柱卡；3.器材臺(tái)式離心機(jī)、37℃水浴箱、血液細(xì)胞洗滌離心機(jī)?！緲?biāo)本、試劑與器材】11譜細(xì)胞（PanelCell）由8～12個(gè)人份的已知血型表現(xiàn)型的O型RBC配套組成具有各種不同的抗原成分，分布各具特點(diǎn)，與抗體反應(yīng)出現(xiàn)不同的格局能檢出常見抗體和稀有抗體每種抗原在譜細(xì)胞上保持一定的陰陽比率為了證實(shí)單價(jià)抗體，使用的相應(yīng)抗原RBC應(yīng)為1個(gè)以上譜細(xì)胞（PanelCell）由8～12個(gè)人份的已知血型表現(xiàn)12【操作步驟】1.向凝膠卡內(nèi)依次加0.8-1%1～10號(hào)鑒定譜細(xì)胞50ul,2.每孔加被檢者血清25ul,3.37℃溫15min,4.專用離心機(jī)離心10min,觀察結(jié)果．【操作步驟】1.向凝膠卡內(nèi)依次加0.8-1%1～10號(hào)鑒13【結(jié)果判斷】【結(jié)果判斷】14【方法評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)】1.被檢者自身血清加自身紅細(xì)胞管應(yīng)無凝集；若出現(xiàn)凝集則提示存在自身免疫性抗體；2.±～4+凝集為陽性結(jié)果，表示待檢血清中有不規(guī)則抗體，結(jié)合譜紅細(xì)胞反應(yīng)格局，確定抗體特