微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用課件

微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用1微生物的類(lèi)群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類(lèi)等微生物一般個(gè)體微小，包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻等原核細(xì)胞微生物的類(lèi)群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌單2一、微生物的培養(yǎng)基

1、培養(yǎng)基定義：培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是為人工培養(yǎng)微生物而制備的，提供適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。

思考：微生物細(xì)胞的元素組成是什么？一、微生物的培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基定義：思考：微生物細(xì)胞的元素組32、培養(yǎng)基的類(lèi)型（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。瓊脂的性質(zhì)：熔點(diǎn)：96度凝固點(diǎn)：40度注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。2、培養(yǎng)基的類(lèi)型（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基4單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁殖,可以形成肉眼可見(jiàn)子細(xì)胞的群體——菌落固體培養(yǎng)基用途：用于微生物純化、計(jì)數(shù)、鑒定單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁殖,可以形成5菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異。菌落特征是微生物鑒定的重要依據(jù)菌苔：菌落連成片

菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異。6液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)7半固體培養(yǎng)基：觀(guān)察運(yùn)動(dòng)無(wú)動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)半固體培養(yǎng)基：觀(guān)察運(yùn)動(dòng)無(wú)動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)8（2）按成分分：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基

半合成培養(yǎng)基。（2）按成分分：天然培養(yǎng)基、9（3）按功能分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基：含有微生物生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)。選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基加入某種物質(zhì)或缺少某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而抑制不需要的微生物生長(zhǎng)促進(jìn)需要的微生物生長(zhǎng)。舉例說(shuō)明：加鏈霉素培養(yǎng)基或者加青霉素培養(yǎng)基抑制細(xì)菌和放線(xiàn)菌的生長(zhǎng)，篩選真菌。無(wú)氮培養(yǎng)基抑制非固氮菌生長(zhǎng)，篩選固氮菌鑒別培養(yǎng)基：區(qū)別微生物伊紅——美藍(lán)培養(yǎng)基產(chǎn)氣桿菌菌落大、灰棕色大腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤（3）按功能分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有微生物生長(zhǎng)所需的10選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較從眾多微生物中分離所需的微生物鑒別不同種類(lèi)的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌伊紅—美籃培養(yǎng)基使大腸桿菌的菌落呈深紫色，可以鑒別大腸桿菌選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較從眾多微生物中分離所需的微生物鑒11幾種選擇培養(yǎng)基：加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物幾種選擇培養(yǎng)基：加入青霉素的培養(yǎng)基:12二、微生物生長(zhǎng)需要條件

1、夏天為什么食物容易腐??？如何處理可以防止腐?。?/p>

2、為什么真空包裝的食品不容易腐??？3、醋酸是否具有殺菌作用？

以上反應(yīng)了微生物生長(zhǎng)受到哪些條件影響？細(xì)菌30～37霉菌25～28放線(xiàn)菌25～281～2d3~4d5~7d大腸桿菌乳酸菌破傷風(fēng)桿菌

大多數(shù)細(xì)菌為好氧型霉菌5.0～6.0細(xì)菌6.5～7.5放線(xiàn)菌7.5～8.5二、微生物生長(zhǎng)需要條件細(xì)菌30～37霉菌25～2813三、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1、水2、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）3、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）4、無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)鹽）5、生長(zhǎng)因子（微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物。如維生素、含氮堿基）三、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1、水14碳源可作為碳源的物質(zhì)有:含碳無(wú)機(jī)物:含碳有機(jī)物：蛋白質(zhì)脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同異養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為碳酸鹽碳酸氫鹽二氧化碳糖類(lèi)（主要）含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）含碳無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)碳）碳源可作為碳源的物質(zhì)有:蛋白質(zhì)脂肪酸不同微生物所利用的15氮源可作為氮源的物質(zhì)有:含氮無(wú)機(jī)物：含氮有機(jī)物：蛋白胨牛肉膏尿素氮?dú)獍睔庀跛猁}銨鹽注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麥芽汁等天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)中既含有碳源又同時(shí)含有氮源、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)要素氮源可作為氮源的物質(zhì)有:蛋白胨牛肉膏尿素氮?dú)獍睔庀跛猁}銨鹽注161、下列細(xì)菌中，能利用含碳無(wú)機(jī)物作碳源的是A光合細(xì)菌B根瘤菌C硝化細(xì)菌D乳酸菌2、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮源是A糖、有機(jī)酸等B二氧化碳、碳酸鹽C蛋白質(zhì)D無(wú)機(jī)氮化物A.CA.C1、下列細(xì)菌中，能利用含碳無(wú)機(jī)物作碳源的是A.CA.C17

下表關(guān)于四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝的類(lèi)型，描述正確的是下表關(guān)于四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝的類(lèi)型，描述正181000mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方（2）特殊營(yíng)養(yǎng)：—生長(zhǎng)因子細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而往往自身不能合成的化合物，如維生素、某些氨基酸、堿基等（3）pH、氧氣等要求1000mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方（2）特殊營(yíng)養(yǎng)：—生長(zhǎng)19四：營(yíng)養(yǎng)基配制的原則1：目的要明確配制培養(yǎng)基要根據(jù)培養(yǎng)的微生物、培養(yǎng)的目的、培養(yǎng)基的用途來(lái)確定培養(yǎng)基的化學(xué)成分、物理狀態(tài)。2：營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)3：PH要適宜四：營(yíng)養(yǎng)基配制的原則1：目的要明確20

五、培養(yǎng)基的配制過(guò)程（一）、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制1.計(jì)算:100ml蒸餾水中各物質(zhì)的量。2.稱(chēng)量：注意牛肉膏的粘稠度大。3.溶化：牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同放入不斷攪拌4.調(diào)節(jié)PH:7.0—7.2思考：判斷該培養(yǎng)基的作用是什么？五、培養(yǎng)基的配制過(guò)程（一）、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制1.計(jì)算:21加熱、溶化加熱、溶化22微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用ppt課件23

5.分裝：培養(yǎng)基高度1/5不要污染試管口

棉塞塞緊5.分裝：246、包扎3-5支試管扎成一捆，外包一層牛皮紙，用線(xiàn)扎好。6、包扎25

思考：滅菌的溫度、壓力、時(shí)間分別是多少？8.擱置斜面/倒平板（斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管的1/2)

8.擱置斜面/倒平板（斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管的1/2)26圖中哪些措施是防止雜菌污染的？圖中哪些措施是防止雜菌污染的？27培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50度左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？剛剛不燙手。為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？防止瓶口附近的微生物污染培養(yǎng)基培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50度左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什28平板冷凝后，為什么要將平板倒置？使培養(yǎng)基表面的水更好的揮發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基在倒平板的過(guò)程中，不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

空氣中的微生物會(huì)在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，最好不要用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物。平板冷凝后，為什么要將平板倒置？29六、無(wú)菌操作1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：2、無(wú)菌操作避免雜菌感染操作對(duì)象的操作過(guò)程3、哪些地方有菌可能導(dǎo)致菌體感染？操作者培養(yǎng)基、接種工具、器皿空間

防止外來(lái)雜菌的入侵六、無(wú)菌操作1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：防止外來(lái)雜菌的入侵304、滅菌和消毒

消毒：溫和的因素殺死一部分對(duì)人體有害的微生物。舉例：煮沸，70%酒精溶液?jiǎn)栴}：一段時(shí)間后為什么會(huì)腐??？不包括芽孢和孢子

滅菌：強(qiáng)烈的因素殺死所有微生物，包括芽孢和孢子。思考：哪些因素可以滅菌、消毒？物理——高溫、紫外線(xiàn)化學(xué)——酒精、氯氣、石碳酸4、滅菌和消毒不包括芽孢和孢子滅菌：強(qiáng)烈的因素殺死所有31

常用的滅菌方法常用的滅菌方法32常用的消毒方法常用的消毒方法33思考：以下應(yīng)當(dāng)用何種方法滅菌、消毒？操作者培養(yǎng)基接種工具器皿空間牛奶——手用酒精消毒——高壓蒸汽滅菌——灼燒——干熱滅菌——紫外線(xiàn)——巴氏消毒70～75度30min80度15min思考：以下應(yīng)當(dāng)用何種方法滅菌、消毒？——手用酒精消毒——高壓34灼燒滅菌微生物的接種工具(接種環(huán)、接種針、試管口)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒灼燒滅菌微生物的接種工具(接種環(huán)、接種針、試管口)或其35干熱滅菌

160－170℃；1－2h能耐高溫的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌100kPa121℃15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌干熱滅菌能耐高溫的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高壓蒸汽36總結(jié)：無(wú)菌技術(shù)

1、實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者、衣著和手要

和

。2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行

。3、為了避免周?chē)h(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在

附近進(jìn)行。4、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)锲废嘟佑|。清潔滅菌酒精燈消毒總結(jié)：無(wú)菌技術(shù)清潔滅菌酒精燈消毒37七、接種技術(shù)

無(wú)菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過(guò)程稱(chēng)為接種。1、接種工具七、接種技術(shù)1、接種工具382、常用的接種方法斜面劃線(xiàn)法2、常用的接種方法斜面劃線(xiàn)法39微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用ppt課件40做什么準(zhǔn)備？點(diǎn)燃酒精燈斜面向上斜面劃線(xiàn)接種的操作過(guò)程做什么準(zhǔn)備？斜面劃線(xiàn)接種的操作過(guò)程41斜面用什么接種？接種環(huán)如何滅菌？斜面用什么接種？42取棉塞（不放到桌面？）試管口滅菌取棉塞（不放到桌面？）43挑取少量菌體挑取少量菌體44從里到外輕輕劃“S”型曲線(xiàn)，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基試管口通過(guò)火焰，塞緊試管口放在37度恒溫箱中培養(yǎng)24h從里到外輕輕劃“S”型曲線(xiàn)，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基45稀釋涂布平板法包括涂抹平板法和混合平板法涂抹平板法混合平板法稀釋涂布平板法包括涂抹平板法和混合平板法涂抹平板法混合平板法46從哪里可以獲得微生物呢？微生物的大本營(yíng)：土壤從眾多微生物中分離某種微生物有什么方法？原理：根據(jù)微生物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、pH不同利用選擇性培養(yǎng)基選擇。對(duì)微生物進(jìn)行分離的培養(yǎng)基是？（固體培養(yǎng)基）固體培養(yǎng)基上不同菌的區(qū)別是什么？（菌落）菌落作用：微生物分類(lèi)、鑒定的依據(jù)分離微生物的方法：平板劃線(xiàn)法和稀釋涂抹平板法八、微生物的分離、數(shù)量測(cè)定從哪里可以獲得微生物呢？八、微生物的分離、數(shù)量測(cè)定47平板劃線(xiàn)分離微生物的原理：連續(xù)劃線(xiàn)。由于劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端的細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少，每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。注意事項(xiàng)：第一步以及每一次劃線(xiàn)之前和劃線(xiàn)結(jié)束后都要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)要冷卻后再劃線(xiàn)。每次劃線(xiàn)之間灼燒接種環(huán)的目的是殺死上一次劃線(xiàn)殘留的菌種，使下一次劃線(xiàn)的菌種直接來(lái)至于上一次劃線(xiàn)的末端，使每一次劃線(xiàn)的菌種數(shù)目減少。平板劃線(xiàn)分離微生物的原理：連續(xù)劃線(xiàn)。由于劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端的細(xì)48平板劃線(xiàn)的幾種方法平板劃線(xiàn)的幾種方法49平板劃線(xiàn)的具體操作：A.從試管中取菌平板劃線(xiàn)的具體操作：A.從試管中取菌50微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用ppt課件51微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用ppt課件52問(wèn)題：每次劃線(xiàn)后要灼燒接種環(huán)，目的是什么？滅菌問(wèn)題：每次劃線(xiàn)的起點(diǎn)有什么特點(diǎn)？問(wèn)題：每次劃線(xiàn)后要灼燒接種環(huán)，目的是什么？53微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用ppt課件54問(wèn)題：上述結(jié)果反應(yīng)了什么情況？問(wèn)題：可對(duì)菌液如何處理？問(wèn)題：上述結(jié)果反應(yīng)了什么情況？55稀釋