比色分析及分光光度法

比色分析及分光光度法1第1頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月基本內(nèi)容和重點(diǎn)要求掌握物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收、吸光度和透光度、朗伯—比爾定律及摩爾吸光系數(shù)等知識(shí)了解比色分析和分光光度法的特點(diǎn)、基本原理、儀器構(gòu)造和各部件的作用學(xué)習(xí)掌握顯色反應(yīng)和顯色條件的選擇理解掌握分光光度法定量分析中的各種影響因素2第2頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月本章內(nèi)容提要§7.1概述§7.2物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收§7.3光吸收基本定律§7.4比色分析和分光光度法及其儀器3第3頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月§7.1概述方法依據(jù)及分類方法特點(diǎn)4第4頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月一、方法依據(jù)及分類基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來的分析方法，包括比色法、可見

及紫外光度法及紅外光譜法等。比色分析法：通過目視比較顏色的深淺來測定物質(zhì)的濃度。分光光度法：使用分光光度計(jì)測定的方法。5第5頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、分光光度法的特點(diǎn)靈敏度高、選擇性好準(zhǔn)確度較高應(yīng)用廣泛儀器簡單、操作簡便、分析快速6第6頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月§7.2物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收光的基本性質(zhì)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收7第7頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月一、光的基本性質(zhì)光的波動(dòng)性和微粒性：8第8頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月2.電磁波譜圖波長/nm

10-1110102103104105106107108光譜名稱X－射線紫外光可見光紅外光微波躍遷類型內(nèi)層電子中層、外層電子外層電子分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)分子轉(zhuǎn)動(dòng)分析方法X－射線光譜法紫外光度法比色及可見光度法紅外光譜法微波光譜法Ultraviolet－VisibleSpectrophotometry9第9頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月3.單色光與復(fù)合光單色光：具有同一波長的光復(fù)合光：不同波長組成的光可見光的波長大約在400～760nm之間，由紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等各種色光按一定比例混合而成，各種光具有一定的波長范圍。10第10頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月4.互補(bǔ)光11第11頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收12第12頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月1.物質(zhì)顏色和吸收顏色的關(guān)系物質(zhì)顏色吸收光顏色波長范圍

/nm黃綠紫400～450黃藍(lán)450～480橙綠藍(lán)480～490紅藍(lán)綠490～500紫紅綠500～560紫黃綠560～580藍(lán)黃580～600綠藍(lán)橙600～650藍(lán)綠紅650～75013第13頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月2.吸收光譜圖400450500550600650/nmA0.80.60.40.2最大吸收波長

max14第14頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月3.分析依據(jù)定性分析：最大吸收波長

max定量分析：吸光度大小400450500550600650/nmA0.80.40.60.2

1

215第15頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月§7.3光吸收基本定律透光率與吸光度朗伯－比爾定律吸光系數(shù)、摩爾吸光系數(shù)吸光度的加合性標(biāo)準(zhǔn)曲線（校正曲線）16第16頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月一、透光率與吸光度I0IrIaIt透光率或透射比吸光度Transmittanceandabsorptivity17第17頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月

0102030405060708090100T%

1.00.70.60.50.40.3

0.20.10.050A∞透光率T與吸光度A的關(guān)系18第18頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、朗伯—比爾定律Lambert-Beer’sLawA－吸光度K－比例常數(shù)，與吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長、溫度等有關(guān)b－液層厚度，cmc－溶液的濃度，mol

L-1或g

L-119第19頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月三、吸光系數(shù)、摩爾吸光系數(shù)吸光系數(shù)a：摩爾吸光系數(shù)：關(guān)系：e＝Mac－g

L-1b－cma=A/(bc)，L·g-1·cm-1c－mol

L－1b－cm

=A/(bc)，L·mol-1·cm-120第20頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月例150mL比色管中，加入含有0.025mg的Fe2+溶液，加入鄰二氮菲顯色劑，用水稀釋至50mL，用2cm比色池，在分光光度計(jì)上測得吸光度A=0.190，計(jì)算摩爾吸光系數(shù)

？解：21第21頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月四、吸光度的加合性多組分體系中22第22頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月Standardcurve，calibratedcurve，workingcurve五、標(biāo)準(zhǔn)曲線（校正曲線）

A0.500.400.300.200.1002.04.06.08.010mg/mL23第23頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月§7.4比色分析和分光光度法

及其儀器目視比色法分光光度法24第24頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月一、目視比色法（colorimetry）方法依據(jù)方法特點(diǎn)12481640x觀察方向c4c3c2c1c1c2c3c4方便、靈敏，準(zhǔn)確度差。常用于限界分析。25第25頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、分光光度法Spectrophotometry26第26頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月分光光度計(jì)基本部件光源單色器檢測器比色皿顯示裝置27第27頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月光源：在可見光和近紅外光區(qū)，常用鎢燈或碘鎢燈作光源，它們輻射320－2500nm波長的光；在近紫外區(qū)，常使用氫燈或氘燈，它們能輻射180－375nm波長的光。28第28頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月單色器：棱鏡－用光學(xué)玻璃或石英制成。光柵－光通過光柵發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光。29第29頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月棱鏡：依據(jù)不同波長光通過棱鏡時(shí)折射率不同單色器入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ280060050040030第30頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖原理：利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.31第31頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月吸收池：由無色透明的光學(xué)玻璃或石英制成。檢測器：硒光電池、光電管或光電倍增管。顯示系統(tǒng)：檢流計(jì)、記錄儀、數(shù)字顯示器、電腦等32第32頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測器SeAu，Ag半導(dǎo)體h

硒光電池Ag、Au33第33頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月光電管紅敏管625-1000nm藍(lán)敏管200-625nmNi環(huán)（片）堿金屬光敏陰極h

34第34頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月光電倍增管待掃描160-700nm1個(gè)光電子可產(chǎn)生106～107個(gè)電子35第35頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月雙光束和雙波長分光光度計(jì)工作原理36第36頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月§7.2光度分析法的設(shè)計(jì)顯色反應(yīng)顯色條件的選擇測量波長和吸光度范圍的選擇參比溶液的選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作37第37頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月一、顯色反應(yīng)Colorreaction待測物質(zhì)本身有較深的顏色，直接測定；待測物質(zhì)是無色或很淺的顏色，需要選適當(dāng)?shù)脑噭┡c被測離子反應(yīng)生成有色化合物再進(jìn)行測定，此反應(yīng)稱為顯色反應(yīng)，所用的試劑稱為顯色劑（colorreagent）。按顯色反應(yīng)的類型來分，主要有氧化還原反應(yīng)和絡(luò)合反應(yīng)兩大類，而絡(luò)合反應(yīng)是最主要的。38第38頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月顯色反應(yīng)的選擇選擇性好，干擾少，或干擾容易消除；靈敏度高，有色物質(zhì)的ε應(yīng)大于104。有色化合物的組成恒定，符合一定的化學(xué)式。有色化合物的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，至少保證在測量過程中溶液的吸光度基本恒定。這就要求有色化合物不容易受外界環(huán)境條件的影響。有色化合物與顯色劑之間的顏色差別要大，即顯色劑對(duì)光的吸收與絡(luò)合物的吸收有明顯區(qū)別，要求兩者的吸收峰波長之差Δλ（稱為對(duì)比度）大于60nm。39第39頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月顯色劑無機(jī)顯色劑不多，因?yàn)樯傻慕j(luò)合物不穩(wěn)定，靈敏度和選擇性也不高。如用KSCN顯色測鐵、鉬、鎢和鈮；用鉬酸銨顯色測硅、磷和釩等。有機(jī)顯色劑分子中含有生色團(tuán)和助色團(tuán)。生色團(tuán)（chromophoricgroup）：某些含不飽和鍵的基團(tuán)，如偶氮基、對(duì)醌基和羰基等。這些基團(tuán)中的π電子被激發(fā)時(shí)需能量較小，可吸收波長200nm以上的可見光而顯色。助色團(tuán)（auxochromicgroup）：含孤對(duì)電子的基團(tuán)，如氨基、羥基和鹵代基等。這些基團(tuán)與生色團(tuán)上的不飽和鍵作用，使顏色加深。40第40頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月有機(jī)顯色劑多元絡(luò)合物三元混配絡(luò)合物離子締合物金屬離子－絡(luò)合劑－表面活性劑體系雜多酸41第41頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月有機(jī)顯色劑磺基水楊酸：OO型螯合劑，可與很多高價(jià)金屬離子生成穩(wěn)定的螯合物，主要用于測Fe3+。丁二酮肟：NN型螯合劑，用于測定Ni2+。1,10-鄰二氮菲：NN型螯合劑，測微量Fe2+。二苯硫腙：含S顯色劑，萃取光度測定Cu2+、Pb2+、Zn2+、Cd2+、Hg2+等。偶氮胂Ⅲ(鈾試劑Ⅲ)：偶氮類螯合劑，強(qiáng)酸性溶液中測Th(Ⅳ)、Zr(Ⅳ)、U(Ⅳ)等；在弱酸性溶液中測稀土金屬離子。鉻天青S：三苯甲烷類顯色劑，測定Al3+。結(jié)晶紫：三苯甲烷類堿性染料，測定Tl3+。42第42頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月多元絡(luò)合物多元絡(luò)合物是由三種或三種以上的組分所形成的絡(luò)合物。目前應(yīng)用較多的是由一種金屬離子與兩種配位體所組成的三元絡(luò)合物。三元絡(luò)合物在吸光光度分析中應(yīng)用較普遍。三元混配絡(luò)合物：金屬離子與一種絡(luò)合劑形成未飽和絡(luò)合物，然后與另一種絡(luò)合劑結(jié)合，形成三元混合配位絡(luò)合物，簡稱三元混配絡(luò)合物。例如，V(V)，H2O2和吡啶偶氮間苯二酚(PAR)形成1:1:1的有色絡(luò)合物，可用于釩的測定，其靈敏度高，選擇性好。43第43頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月2.離子締合物：金屬離子先與絡(luò)合劑生成絡(luò)陰離子或絡(luò)陽離子，再與帶反電荷的離子生成離子締合物。主要用于萃取光度法。如：Ag+與1,10-鄰二氮菲形成陽離子，再與溴鄰苯三酚紅的陰離子形成深藍(lán)色的離子締合物。用F-、H2O2、EDTA作掩蔽劑，可測定微量Ag+。作為離子締合物的陽離子，有堿性染料、1,10-鄰二氮菲及其衍生物、安替比林及其衍生物、氯化四苯砷(或磷、銻)等；作為陰離子，有X-，SCN-，ClO4-，無機(jī)雜多酸和某些酸性染料等。44第44頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月3.金屬離子－絡(luò)合劑－表面活性劑體系金屬離子與顯色劑反應(yīng)時(shí)，加入某些表面活性劑，可以形成膠束化合物，它們的吸收峰向長波方向移動(dòng)（紅移），而測定的靈敏度顯著提高。目前，常用于這類反應(yīng)的表面活性劑有溴化十六烷基吡啶、氯化十四烷基二甲基芐胺、氯化十六烷基三甲基銨、溴化十六烷基三甲基銨、溴化羥基十二烷基三甲基銨、OP乳化劑。例如，稀土元素、二甲酚橙及溴化十六烷基吡啶反應(yīng)，生成三元絡(luò)合物，在pH8~9時(shí)呈藍(lán)紫色，用于痕量稀土元素總量的測定。45第45頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月4.雜多酸溶液在酸性的條件下，過量的鉬酸鹽與磷酸鹽、硅酸鹽、砷酸鹽等含氧的陰離子作用生成雜多酸，作為吸光光度法測定相應(yīng)的磷、硅、砷等元素的基礎(chǔ)。雜多酸法需要還原反應(yīng)的酸度范圍較窄，必須嚴(yán)格控制反應(yīng)條件。很多還原劑都可應(yīng)用于雜多酸法中。氯化亞錫及某些有機(jī)還原劑，例1-氨基-2-萘酚-4-磺酸加亞硫酸鹽和氫醌常用于磷的測定。硫酸肼在煮沸溶液中作砷鉬酸鹽和磷鉬酸鹽的還原劑。抗壞血酸也是較好的還原劑。46第46頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、顯色條件的選擇實(shí)驗(yàn)條件包括：溶液酸度、顯色劑用量、試劑加入順序、顯色時(shí)間、顯色溫度、有機(jī)絡(luò)合物的穩(wěn)定性及共存離子的干擾等。溶液的酸度M+HR=MR+H+影響被測金屬離子的存在狀態(tài)影響顯色劑的平衡濃度和顏色影響絡(luò)合物的組成可由pH與吸光度關(guān)系曲線確定pH范圍。pHA047第47頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月2.顯色劑的用量M(被測組分)+R(顯色劑)=MR(有色絡(luò)合物)為使顯色反應(yīng)進(jìn)行完全，需加入過量的顯色劑。但顯色劑不是越多越好。有些顯色反應(yīng)，顯色劑加入太多，反而會(huì)引起副反應(yīng)，對(duì)測定不利。在實(shí)際工作中根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來確定顯色劑的用量。cA0cA0cA012348第48頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月3.顯色反應(yīng)時(shí)間有些顯色反應(yīng)瞬間完成，溶液顏色很快達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，并在較長時(shí)間內(nèi)保持不變;有些顯色反應(yīng)雖能迅速完成，但有色絡(luò)合物的顏色很快開始褪色;有些顯色反應(yīng)進(jìn)行緩慢，溶液顏色需經(jīng)一段時(shí)間后才穩(wěn)定。制作吸光度-時(shí)間曲線確定適宜時(shí)間。tA0tA0tA012349第49頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月4.顯色反應(yīng)溫度顯色反應(yīng)大多在室溫下進(jìn)行。但是，有些顯色反應(yīng)必需加熱至一定溫度完成。5.溶劑有機(jī)溶劑降低有色化合物的解離度，提高顯色反應(yīng)的靈敏度。如在Fe(SCN)3的溶液中加入丙酮顏色加深。還可能提高顯色反應(yīng)的速率，影響有色絡(luò)合物的溶解度和組成等。50第50頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月6.干擾及其消除方法試樣中存在干擾物質(zhì)會(huì)影響被測組分的測定。例如干擾物質(zhì)本身有顏色或與顯色劑反應(yīng)，在測量條件下也有吸收，造成正干擾。干擾物質(zhì)與被測組分反應(yīng)或與顯色劑反應(yīng)，便顯色反應(yīng)不完全，也會(huì)造成干擾。干擾物質(zhì)在測量條件下從溶液中析出，便溶液變混濁，無法準(zhǔn)確測定溶液的吸光度。51第51頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月為消除以上原因引起干擾，可采取方法：控制溶液酸度加入掩蔽劑：選取的條件是掩蔽劑不與待測離子作用，掩蔽劑以及它與干擾物質(zhì)形成的絡(luò)合物的顏色應(yīng)不干擾待測離子的測定。利用氧化還原反應(yīng)，改變干擾離子的價(jià)態(tài)。利用校正系數(shù)用參比溶液消除顯色劑和共存有色離子的干擾。選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL當(dāng)溶液中存在有消耗顯色劑的干擾離子時(shí)，可通過增加顯色劑的用量來消除干擾。分離：以上方法均不奏效時(shí)，采用預(yù)分離方法。52第52頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月三、測量波長和吸光度范圍的選擇測量波長的選擇“最大吸收原則”（maximumabsorption）不僅靈敏度高，且能減少或消除由非單色光引起的對(duì)朗伯-比爾定律的偏離。“吸收最大、干擾最小”在最大吸收波長處有其他吸光物質(zhì)干擾測定A

/nm0

1

253第53頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月選擇測定波長l2

？還是l3？選擇原則：靈敏度高，測量準(zhǔn)確，干擾少。l1l2l3l/nmA被測物與顯色劑形成的絡(luò)合物顯色劑054第54頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月吸光度范圍的選擇從儀器測量誤差的角度來看，為使測量結(jié)果得到較高的準(zhǔn)確度，一般應(yīng)控制標(biāo)準(zhǔn)溶液和被測試液的吸光度在0.2~0.8范圍內(nèi)?？赏ㄟ^控制溶液的濃度（如改變?cè)嚇拥娜恿炕蚋淖冿@色體系的體積）或選擇不同厚度的吸收池來達(dá)到目的。55第55頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月四、參比溶液的選擇參比溶液作用：調(diào)節(jié)儀器的零點(diǎn)，消除由吸收池壁及溶劑對(duì)入射光的反射和吸收帶來的誤差，扣除干擾的影響。即將參比溶液裝入光學(xué)性質(zhì)相同，厚度相同的比色皿，調(diào)節(jié)儀器使透過參比皿的吸光度A參為零（T%＝100）

56第56頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月四、參比溶液的選擇參比溶液選擇：蒸餾水：試液及顯色劑均無色。不加顯色劑的被測試液：顯色劑為無色，被測試液中存在其他有色離子。不加試樣溶液的試劑空白：顯色劑有顏色。一份試液加適當(dāng)掩蔽劑掩蔽被測組分，使之不再與顯色劑作用，而顯色劑及其他試劑均按試液測定方法加入：顯色劑和試液均有顏色。改變加入試劑順序，使被測組分不顯色。57第57頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月§7.3光度分析法的誤差誤差來源：偏離朗伯－比爾定律非單色光引起的偏離非平行入射光引起的偏離介質(zhì)不均勻引起的偏離由于溶液本身的化學(xué)反應(yīng)引起的偏離測量吸光度引入的誤差吸光度A在0.2－0.8之間，測量的相對(duì)誤差較小。A0.500.400.300.200.1002.04.06.08.010mg/mL正偏離負(fù)偏離58第58頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月一、偏離朗伯－比爾定律非單色光引起的偏離目前各種分光光度計(jì)得到的入射光實(shí)際上都是具有某一波段的復(fù)合光，物質(zhì)對(duì)不同波長光的吸收程度的不同，因而導(dǎo)致對(duì)朗伯－比爾定律的偏離?？朔菃紊庖鸬钠x的措施：使用比較好的單色器人射光波長選擇在被測物質(zhì)的最大吸收處測定時(shí)應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臐舛确秶?9第59頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月介質(zhì)不均勻引起的偏離溶液不均勻時(shí)，入射光通過溶液后，有一部分因散射現(xiàn)象而損失，使透射比減少，實(shí)測吸光度增加，使標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離直線向吸光度軸彎曲（正偏離）。在光度法中應(yīng)避免溶液產(chǎn)生膠體或混濁。60第60頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月由于溶液本身的化學(xué)反應(yīng)引起的偏離溶液中的吸光物質(zhì)常因解離、絡(luò)合、締合、形成新化合物或互變異構(gòu)等化學(xué)變化而改變其濃度，因而導(dǎo)致偏離朗伯—比爾定律。由于溶液中各吸光物質(zhì)質(zhì)點(diǎn)間的相互作用61第61頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、吸光度測量引起的誤差儀器測量不準(zhǔn)確，如光源不穩(wěn)定、實(shí)驗(yàn)條件偶然變動(dòng)、讀數(shù)不準(zhǔn)確等。對(duì)于同一儀器，讀數(shù)的波動(dòng)對(duì)透射比為一定值；而對(duì)吸光度讀數(shù)波動(dòng)不為定值。

0102030405060708090100T%

1.00.70.60.50.40.3

0.20.10.050A62第62頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月當(dāng)A=0.434(或透射比T=36.8%)時(shí)，測量的相對(duì)誤差最小。待測溶液的透射比T在15%~65%之間，或使吸光度A在0.2~0.8之間，才能保證測量的相對(duì)誤差較小。00.20.40.60.81.0T108642108642|Et|%0.36863第63頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月§7.4應(yīng)用鐵的測定：＋Fe2+NN3NNFe32+pH=5顯色，

max＝508nm，＝1.1×104Lmol-1cm-164第64頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月硅鉬藍(lán)法測定微量SiO2pH0.5~2顯色，提高溫度可加快硅鉬黃形成，

max＝810nm，通常在620～660nm測定。PO43-、AsO43-有干擾（F-）65第65頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月鈦的測定（H2O2法）H2SO4介質(zhì)顯色，

max＝410nm，＝720Lmol-1cm-1干擾：Fe3+－H3PO4V、W、Mo、U有干擾，但一般樣品中不存在。66第66頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月弱酸和弱堿解離常數(shù)的測定67第67頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月本章小結(jié)概述物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收光吸收基本定律比色分析和分光光度法及其儀器68第68頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月示差吸光光度法DifferentialSpectrophotometry原理：吸光度差與這兩種溶液的濃度差成正比。以把空白溶液作為參比的稀溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線作為ΔA和Δc的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測得的ΔA求出相應(yīng)的Δc值，從cx=c0+c可求出待測試液的濃度，這就是示差吸光光度法定量的基本原理。69第69頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月示差吸光光度法的誤差Δc(即cx-c0)，測量誤差為x%，結(jié)果為cx±(cx-c0)×x%；普通光度法的結(jié)果為cx±cx·x%。因cx只是稍大于c0，故cx總是遠(yuǎn)大于Δc，故示差吸光光度法的準(zhǔn)確度高。參比溶液的濃度越接近待測試液的濃度，測量誤差越小，最小誤差可小于0.3％。標(biāo)尺擴(kuò)展：01020304050607080901000102030405060708090100Tx70第70頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月雙波長吸光光度法（dual-wavelengthSpectrophotometry）使兩束不同波長的單色光以一定的時(shí)間間隔交替地照射同一吸收池，測量并記錄兩者吸光度的差值。這樣就可以從分析波長的信號(hào)中扣除來自參比波長的信號(hào)，消除各