乙肝疫苗的生產工藝專家講座

乙肝疫苗是用于預防乙肝特殊藥品。疫苗接種后，可刺激免疫系統(tǒng)產生保護性抗體，這種抗體存在于人體液之中，乙肝病毒一旦出現(xiàn)，抗體會馬上作用，將其去除，阻止感染，并不會傷害肝臟，從而使人體含有了預防乙肝免疫力，從而到達預防乙肝感染目標。接種乙肝疫苗是預防乙肝病毒感染最有效方法。

乙肝疫苗的生產工藝專家講座第1頁基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原（HbsAg）亞單位疫苗，它系采取當代生物技術將乙肝病毒表示表面抗原基因進行質粒構建，克隆進入啤酒酵母菌或CHO細胞（中國倉鼠卵巢細胞）中，經過培養(yǎng)這種重組酵母菌或CHO細胞來表示乙肝表面抗原亞單位。發(fā)酵后經過細胞破碎和一系列微濾、超濾、硅膠吸附、洗脫等工序，再經過疏水層析，可使產品抗原蛋白純度達99%以上。乙肝疫苗的生產工藝專家講座第2頁乙肝疫苗制造工藝1.目標基因獲取2.工程菌構建3.目標基因表示4.蛋白質分離純化乙肝疫苗的生產工藝專家講座第3頁

目標基因獲取編碼乙型肝炎表面抗原基因獲取普通目標基因獲取方法有：反轉錄法化學合成法反轉錄—聚合酶鏈反應法工程菌構建CHO(中國倉鼠卵巢）細胞特點①含有準確轉錄后修飾功效,表示糖基化藥

物蛋白在分子結構、理化特征和生物學功效方面最靠近于天然蛋白分子②含有產物胞外分泌功

能,便于下游產物分離純化;③含有重組基因高效

擴增和表示能力;④含有貼壁生長特征,且有較高

耐受剪切力和滲透壓能力,能夠進行懸浮培養(yǎng),表示水平較高;⑤CHO細胞屬于成纖維細胞(fibrob2last),極少分泌本身內源蛋白,利于外源蛋白后分離目標基因表示蛋白質分離純化

細胞破碎→固液分離→濃縮與初步純化→高度純化→成品加工乙肝疫苗的生產工藝專家講座第4頁生產工藝控制基因工程乙肝疫苗生產工藝包含發(fā)酵、提取、純化、吸附、配制、分裝等工序。生產工藝中采取世界一流發(fā)酵罐，經過全自動控制，提供酵母菌最優(yōu)生長條件，發(fā)酵后經過細胞破碎和一系列微濾、超濾、硅膠吸附、洗脫等工序，再經過疏水層析，可使產品抗原蛋白純度達99%以上全部工藝設備可自動清洗、自動滅菌，有效地降低了種種人為原因干擾，確保生產穩(wěn)定和質量一致性。乙肝疫苗的生產工藝專家講座第5頁蛋白質分離純化

乙肝疫苗的生產工藝專家講座第6頁細胞破碎

微濾

超濾

發(fā)酵結束后，經過過濾或離心，使酵母與發(fā)酵液分離，然后細胞經過高壓勻漿機破碎，釋放出抗原。酵母細胞壁較厚，比大腸桿菌難破碎，可在高壓勻漿機內施加幾千個大氣壓力，經過針形閥突然降壓到零，使細胞破碎。在細胞破碎前加入蛋白酶抑制劑以防抗原被分解。細胞破碎后加入表面活性劑使抗原溶解。粗細胞裂解物用0.2um中空纖維柱進行微濾?？乖痛蟛糠值头肿恿克拗骷毎麅群锝涍^濾膜，細胞碎片被膜攔截。濾液再進行超濾，此時抗原被膜攔截而低分子量宿主細胞內含物經過濾膜除去。乙肝疫苗的生產工藝專家講座第7頁疏水柱層析介質：ButylSSepharoseFF加入適量硫酸銨，調整電導率與柱層析平衡液電導率相等按照平衡柱床、上樣吸附、平衡液洗柱、降低硫酸銨濃度解析、清柱再生程序層析陰離子交換柱層析介質：DEAESepharoseFFHBsAg活性蛋白經SephadexG-25柱脫鹽換液，使緩沖鹽系統(tǒng)PH、離子強度和IEC平衡液一致按照平衡柱床、丄樣吸附、氯化鈉濃度梯度分段洗脫、清柱再生程序層析凝膠過濾柱層析介質：Sepharose4FF超濾濃縮到適當體積按照平衡柱床、丄樣、洗脫程序層析乙肝疫苗的生產工藝專家講座第8頁

無菌過濾氫氧化鋁共沉淀

分裝純化后抗原再與氫氧化鋁共沉淀，在共沉淀時，抗原吸附在氫氧化鋁上。疫苗穩(wěn)定性較差，普通在2~8℃下能保留12個月，但當溫度升高后，效力很快降低。在37℃下，許多疫苗只能穩(wěn)定幾天或者幾個小時，非常不利于在室溫下運輸。為了使疫苗穩(wěn)定性提升，可用凍干方法使之干燥。收取到HBsAg除菌過濾，即為純品乙肝疫苗的生產工藝專家講座第9頁臨床應用乙肝疫苗自1979年問世以來，經過20多年大規(guī)模應用和觀察，至今還未見到相關注射后引發(fā)嚴重不良反應報道，只有少數人出現(xiàn)接種部位紅腫、硬結、疼痛、手臂酸重或發(fā)燒、惡心、嘔吐、乏力、皮疹等與普通疫苗接種大致相仿輕微反應，多于1-3天內不治自愈。因為乙肝疫苗屬血源性，在制備過程中純化與滅活程序十分嚴密，故不會產生像破傷風等動物血清