微生物-金黃色葡萄球菌-課件

一、生物學特性——菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽性球菌，直徑為0.5-1.0微米，鏡檢時呈單個、成對、四聯或不規(guī)則的簇群，如葡萄狀，故稱為葡萄球菌。ppt課件一、生物學特性——菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽性球菌，直徑為0大多數菌株產生類胡羅卜素，使細胞團呈現出深橙色到淺黃色，色素的產生取決于生長的條件，故稱金黃色葡萄球菌。ppt課件大多數菌株產生類胡羅卜素，使細胞團呈現出深橙色到淺黃色，色素大多數菌株最適生長溫度30-37℃，最適pH為7.0-7.5；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長。一般用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌或7.5%氯化鈉肉湯增菌。ppt課件大多數菌株最適生長溫度30-37℃，最適pH為7.0-7.5

所有的毒株產生血漿凝固酶，人和動物來源的菌株通?？赡掏谩⑷?、馬和豬的血漿。金黃色葡萄球菌產生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多數菌株可水解天然的動物蛋白并釋放脂肪酸。在BP平板產生磷脂環(huán)。ppt課件所有的毒株產生血漿凝固酶，人和動物來源的菌株生物學特性——致病性

金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強弱主要取決于其產生的毒素和侵襲性酶：a.溶血素：外毒素，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；在血平板培養(yǎng)出現溶血環(huán)。b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。d.脫氧核糖核酸酶（DNA酶）

e.腸毒素：引起急性胃腸炎。ppt課件生物學特性——致病性金黃色葡萄球菌為條

金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，臨床表現多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。

ppt課件金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌葡萄球菌皮膚感染ppt課件葡萄球菌皮膚感染ppt課件

葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經8-10小時即可相當數量的腸毒素。ppt課件葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾二、檢驗程序與操作方法根據中華人民共和國國家標準：《食品衛(wèi)生微生物學檢驗》GB4789.10-94

金黃色葡萄球菌檢驗ppt課件二、檢驗程序與操作方法根據中華人民共和國國家檢樣25g(ml)+225ml滅菌生理鹽水國標：金黃色葡萄球菌檢驗程序直接計數方法增菌培養(yǎng)方法Baird-parker（貝爾德-帕克）0.3ml、0.3ml、0.4ml7．5％氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯血平板血平板，Baird-parker涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

ppt課件檢樣國標：金黃色葡萄球菌檢驗程序直接計數方法增菌培養(yǎng)方法Ba檢驗程序——增菌培養(yǎng)

利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯或7.5%氯化鈉肉湯增菌。置37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。ppt課件檢驗程序——增菌培養(yǎng)利用金黃色葡萄球菌耐鹽檢驗程序——分離培養(yǎng)血平板：金黃色葡萄球菌可以產生溶血素，因此在血平板上產生明顯的溶血環(huán)。典型菌落：呈金黃色，有時也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)。ppt課件檢驗程序——分離培養(yǎng)血平板：金黃色葡萄球菌可以產生溶血素，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)ppt課件大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)ppt課件血平板制作成分：豆粉瓊脂（或營養(yǎng)瓊脂）100mL，脫纖維羊血（或兔血）5-10mL。制法：加熱融化瓊脂，冷至50℃，以無菌操作加入脫纖維羊血或兔血，搖勻，傾注平板?；蚍盅b滅菌試管，擺成斜面。ppt課件血平板制作成分：豆粉瓊脂（或營養(yǎng)瓊脂）100mL，脫纖維羊血BP（貝爾德-帕克）平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和礦物元素丙酮酸鈉是一種生長促進劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。檢驗程序——分離培養(yǎng)ppt課件BP（貝爾德-帕克）平板：檢驗程序——分離培養(yǎng)ppt課件

在BP平板上典型菌落為：灰色到黑玉色，圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3mm，邊緣常為淡色（米黃色或灰色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗燥，質地較干燥。ppt課件在BP平板上典型菌落為：灰色到黑玉色，圓形，B-P平板ppt課件B-P平板ppt課件革蘭氏陽性，球形，組成葡萄狀檢驗程序——鑒定之革蘭氏染色鏡檢ppt課件革蘭氏陽性，球形，組成葡萄狀檢驗程序——鑒定之革蘭氏染色鏡檢驗程序——鑒定之凝固酶試驗

金黃色葡萄球菌可以產生血漿凝固酶，因此對其鑒別的主要試驗是測定其凝固酶。方法一：試管法吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，放36±1℃恒溫箱或水浴內，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現凝塊者，被認為陽性結果。ppt課件檢驗程序——鑒定之凝固酶試驗金黃色葡萄球試管法ppt課件試管法ppt課件陽性反應陰性反應不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固完全凝固，倒置不流動ppt課件陽性反應陰性反應不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固有凝塊血漿均勻混濁生理鹽水方法二：玻片法

在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環(huán)取待檢培養(yǎng)物與其混合（設陽性和陰性對照）制成菌懸液，若經10~20s內無自凝現象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿1環(huán)（不用稀釋），與菌懸液混合，觀察結果。ppt課件有凝塊血漿均勻混濁生理鹽水方法二：玻片法ppt課件

兔血漿制備成分：檸檬酸鈉0.106mol/L（31.3gNa3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸餾水中）制法：一份加兔血9份混合后離心2000rpm，10min吸取上清液即為兔血漿。ppt課件兔血漿葡萄糖肉浸液肉湯的制備成分：絞碎牛肉500g，氯化鈉5g，蛋白胨10g，磷酸氫二鉀2g，葡萄糖10g，蒸餾水1000mL，pH7.4～7.6。制法：將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g，與蒸餾水混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時，使肉渣完全凝結成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加水補足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH，煮沸并過濾、分裝，121℃30min高壓滅菌。ppt課件葡萄糖肉浸液肉湯的制備成分：絞碎牛肉500g，氯化鈉5g，蛋25g樣品+225ml生理鹽水

5mL樣品勻液（1:10）+50mL胰酪胨大豆肉湯血平板36±1℃

24hr

鏡檢與肉浸液肉湯培養(yǎng)血漿凝固酶試驗

報告結果

定性檢測36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃6hr

BP平板ppt課件25g樣品+225ml生理鹽水5mL樣品勻液（1:1025g樣品+225ml生理鹽水

選三個連續(xù)梯度，每個梯度分別取1mL接種之至表面干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL）平板計數（分別記錄每種類型的菌落數）36±1℃

48hr

血平板、鏡檢與肉浸液肉湯培養(yǎng)血漿凝固酶試驗報告結果金葡菌數/g(mL)定量檢測（平板法）每種類型選取一個菌落

36±1℃

24hr

36±1℃

6hr

適用于檢測金黃色葡萄球菌數不小于10/g（mL）的食品計算辦法：（三個平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數相加）×血漿凝固酶陽性數÷5×稀釋倍數梯度稀釋

ppt課件25g樣品+225ml生理鹽水選三個連續(xù)梯度，每個梯度第一天器材準備、樣品處理、增菌培養(yǎng)和BP平板分離接種ppt課件第一天器材準備、樣品處理、增菌培養(yǎng)和BP平板分離接種p