臨床檢驗方法評價考點總結(jié)

臨床檢驗方法評價考點總結(jié)新的或修改的方法引入到臨床實驗室對臨床實驗室專業(yè)技術(shù)人員期望保證高質(zhì)量的服務(wù)來說是經(jīng)常性的任務(wù)。方法的選擇和評價是執(zhí)行新方法過程的關(guān)鍵步驟（見下圖）。因此，良好的實驗室規(guī)范（實踐）要求必須仔細(xì)地選擇新的或修改的方法，在常規(guī)應(yīng)用之前對其性能必須在實驗室條件下進(jìn)行嚴(yán)格和公正的本節(jié)的目的是描述臨床實驗室人員能用于客觀地選擇和評價分析方法的技術(shù)。為了實現(xiàn)這一目標(biāo)，我們提供了（1）與方法學(xué)選擇和評價過程密不可分的基本概念和定義的討論；（5）用于可接受方法的標(biāo)準(zhǔn)的描述。一、基本概念和定義建立檢測的需求是選擇候選方法的第一步。這種需求可能由以下情況提出：①臨床醫(yī)師的建議考慮增加新的診斷試驗；②新方法與已存在的方法相比，將提供改進(jìn)的不準(zhǔn)確度或精密度；③用更有效的程序替換老的、勞動強(qiáng)度大的檢測方法。在決定是否將新的方法或儀器在某一實驗室本、校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)頻率、隨機(jī)處理能力，質(zhì)控方法、空間需求（包括試劑儲存）、廢物處理要求以及化學(xué)危險物和安全的考慮。如候選方法的實際特征與實驗室的要求不一致的話，其將不會被采用。（二）性能參數(shù)讀數(shù)、檢出限、干擾、精密度、試劑穩(wěn)定性、“穩(wěn)健性”及樣本的交互作用等。對這些參數(shù)的評價來評價方法的性能；這些研究的結(jié)論然后可作為臨床使用是否是可接受的基礎(chǔ)?！搬t(yī)學(xué)實用性”的定義可能要求實驗室人員與臨床人員之間的交流。性能要求取決于試驗結(jié)果的預(yù)期用途或在其醫(yī)學(xué)上不同的應(yīng)用；因此，可產(chǎn)生不同的準(zhǔn)確度和精密度的目標(biāo)。1.準(zhǔn)確度（accuracy）國際臨床化學(xué)聯(lián)合會（IFCC）將準(zhǔn)確度定義為分析項目測定值與其“真值”之間的一致性。實際上，分析項目的真值可使用不同的參考方法技術(shù)獲得。然后通過使用系統(tǒng)誤差或總誤差概念來確定方法的準(zhǔn)確度，并由它評價分析項目真值與其測定值之間的一致性。準(zhǔn)確度研究取決于研究方法。美國國家臨床檢驗參考系統(tǒng)以分析方法和參考物質(zhì)層狀結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)開發(fā)了準(zhǔn)確度庫，允許服務(wù)實驗室評價候選方法的準(zhǔn)確度。這些包括（按準(zhǔn)確度降低的順序）決定性方法，參考方法、可比較的方法均值，參考實驗室均值，以及同組的均值（基于方法組的均值）。決定性方法指的是與某些絕對的物理量有關(guān)系，如質(zhì)量。它們被用于檢測物質(zhì)來提供與分析物真值最接近的值。向血清樣本中加入已知量同位素標(biāo)記的分析物被再用質(zhì)譜法測定稱為同位素稀釋質(zhì)譜法，這是用于決定性方法的常見技術(shù)。已校準(zhǔn)的質(zhì)量分光光度計允許確定未標(biāo)記分析物的量和已標(biāo)記分析物的量的比值。這些量的比值可計算出未知的量。參考方法是在工業(yè)和臨床實驗室由有經(jīng)驗的工作人員執(zhí)行得更高精度的方法。參考方法的結(jié)果可溯源許多組織已參與開發(fā)臨床上分析物的準(zhǔn)確度。例如，美國國家床上感興趣分析物可溯源的準(zhǔn)確度庫-已有證書的參考系統(tǒng)有12個分析物。3）比較方法均值是選擇方法能力驗證試驗結(jié)果的平均值。它們可通過使用不同儀器和技術(shù)的多個實驗室產(chǎn)生的平均結(jié)4）同組均值是使用相同儀器和技術(shù)從幾個實驗室獲得的能力驗證試驗結(jié)果的平均值。同組均值可允許實驗室通過與其他實驗室使用相同的儀器的比較來評價自己儀器的準(zhǔn)確度。此種方法，實驗室依賴于廠家來描述方法與某些準(zhǔn)確度更獨立測量之間的關(guān)系。（2）系統(tǒng)誤差概念價的方法與準(zhǔn)確度已建立和確認(rèn)的方法同時檢測臨床標(biāo)本。不準(zhǔn)確度和偏倚常被用來強(qiáng)調(diào)比較方法之間的缺乏一致性。對于給定的方法，系統(tǒng)誤差可為正或負(fù)偏倚，其不同于隨機(jī)誤差，其出現(xiàn)正和負(fù)兩方向。系統(tǒng)誤差可分為兩種類型，即固定的和比例的誤差。固定的系統(tǒng)誤差指的是即使分析物濃度改變但仍處于同一大?。欢壤到y(tǒng)誤差大小是分析物濃度的百分?jǐn)?shù)。當(dāng)在某些樣本存在干擾物質(zhì)時可發(fā)生固定系統(tǒng)誤差。系統(tǒng)誤差的大小和類型可通過方法比較試驗來估計。固定和比例系統(tǒng)誤差是可以檢出的，并可以通過繪制試驗方法的結(jié)果與一組樣本的“真值”之間的關(guān)差造成在同一方向的偏移，其可通過線與Y軸的交點（Y軸截距）來定量估計。比例誤差造成線的斜率偏離理想的45度角。因此，仔細(xì)地檢查關(guān)系圖能提供有關(guān)這些分析誤差分量的有價值的信息。（3）總誤差（totalerror）概念在判斷新方法必須考慮的是誤差分量的整體效果或總誤差。許多誤差分量具有相加性；因此，最終的的可接受性是其臨床應(yīng)用。2.分析范圍（analyticalrange）較寬范圍的特定分析物量的參考溶液。理想情況下，校準(zhǔn)曲線（響應(yīng)對分析物濃度之間關(guān)系圖）應(yīng)該是線性并通過原點。如果曲線是線性，檢測范圍被稱為方法的線性范圍。如果無法獲得線性響應(yīng)，校準(zhǔn)程序應(yīng)使用較高校準(zhǔn)溶液數(shù)量來足夠地確定響應(yīng)曲線，以及校準(zhǔn)溶液應(yīng)包括未知濃度。方法的分析范圍應(yīng)足夠的寬包括沒有預(yù)稀釋期望樣本的95%至99%。正如美國臨床實驗室改進(jìn)修正案3.分析靈敏度（analyticalsensitivity）國際理論和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC）將方法的分析靈敏度定義為校準(zhǔn)曲線的斜率及對于規(guī)定量的變化分析程序產(chǎn)生信號的變化?；旧?，這一詞語定量了相對于分析物量、濃度或特性的變化的信號變化。對于詞語“分析靈敏度”和“檢出限”經(jīng)常是混淆甚至是誤用。存在這種混淆是因為詞語是互相關(guān)聯(lián)兩者被認(rèn)為是方法“敏感”的特性。實際上，理想的方法是描述為具有高的分析靈敏度水平和低的檢出限。4.分析特異性（analyticalspecificity）這一詞語是與準(zhǔn)確度相關(guān)聯(lián)，并指的是分析方法只確定分析物，而對其他相關(guān)的物質(zhì)不起作用的能力。例如，如果存在類似的己糖（如：甘露糖和半乳糖）時，葡萄糖方法僅準(zhǔn)確地測量葡萄糖，則此方法將是異性也可受到血清或血漿中膽紅素、血紅蛋白和脂類等物質(zhì)的影響。這些成分可能通過它們的顏色、濁度或其他物理或化學(xué)特性來影響方法。5.空白測定在測量程序過程中由于試劑和樣本成分而觀察到的響應(yīng)被認(rèn)為是“空白測量”。通過下列試驗可獲得這些值1）沒有樣本試劑溶液（即試劑空白2）樣本溶液和缺少關(guān)鍵試劑的溶液（即樣本空白）。6.檢出限國際理論和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC）將檢出限定義為給定分析程序具有適當(dāng)?shù)拇_定檢出的分析物的最小濃度或量。檢出限依賴于空白讀數(shù)大小，并且被認(rèn)為與這些測量的精密度有關(guān)系。7.干擾（interference）干擾描述的是除了分析物以外，某些其他成分的影響或一組成分對分析物測量的準(zhǔn)確度的影響。一種例子是葡萄糖氧化酶反應(yīng)測量葡萄糖，其中產(chǎn)物過氧化氫可能與尿酸而不是期望的色團(tuán)起反應(yīng)。干擾可能是輕微的，例如，藥物的存在與某些疊氮試劑起反應(yīng)。很明顯，對于給定的分析方法對所有可能的干擾進(jìn)行檢驗是很困難，并且是不可能的。8.精密度（precision）分析方法對同一樣本產(chǎn)生重復(fù)測量相同值的能力被稱為它的精密度，也被稱為隨機(jī)分析誤差。精密度通常由同一材料至少分析20次并且計算標(biāo)準(zhǔn)差的重復(fù)試驗來估計?？晒烙嫵霾煌木芏确至?，其依賴于批內(nèi)精密度是在同一分析批內(nèi)重復(fù)地分析同一樣本的變異性，或?qū)σ幌盗械呐R床標(biāo)本在同一批內(nèi)進(jìn)行異的條件的機(jī)會最小。當(dāng)在同一天內(nèi)在幾個不同批重復(fù)檢測同一樣本時，可估計要比觀察到的批內(nèi)重復(fù)的變異性要高些。日間精密度是當(dāng)在不同天重復(fù)檢測同一樣本獲得的變異性。這種最后的估計值是性能的最實際的評價，因為它包括了由于不同操作人員、儀器日間的變化、不同移液器的使用以及實驗室的溫度或其他條件的變化而導(dǎo)致方法性能的改變。9.回收（recovery）回收是指當(dāng)已知量物質(zhì)加入到真實樣本中分析方回收試驗也可對競爭性的干擾（如對于檢測血清鈣采用結(jié)合染料法的鈣與蛋白的競爭）進(jìn)行檢驗。然而，當(dāng)分析參考方法和參考物質(zhì)受到局限或不可獲得時，回收試驗可以說是評價準(zhǔn)確度的唯一實際二、選擇分析方法選擇候選方法是引入新方法到實驗室過程的第二步（見下圖）?？刹捎貌煌耐緩絹碜R別候選的方法，包括復(fù)習(xí)科學(xué)文獻(xiàn)、咨詢同行、評價商業(yè)的資料或在專業(yè)學(xué)術(shù)會上與廠商代表對方法進(jìn)行討論。當(dāng)評價有前景的方法時，下面的內(nèi)容應(yīng)值得注意：（1）檢測的原理，具有原始參考文獻(xiàn)。（2）試劑和參考物質(zhì)的組分，提供的量及容器開啟前后它們儲存的要求（如空間、溫度、光及濕度的（3）試劑和參考物質(zhì)的穩(wěn)定性（如有效期）。（4）可能的危害、適當(dāng)?shù)陌踩A(yù)防措施及職業(yè)安全和衛(wèi)生管理指南。（8）方法的參考區(qū)間，包括的信息有：如何導(dǎo)出健康和疾病獲得典型值，以及自己機(jī)構(gòu)內(nèi)確定參考區(qū)（11）技術(shù)支持、供應(yīng)品和服務(wù)的可獲得性。三、性能標(biāo)準(zhǔn)此種試驗結(jié)果對于臨床醫(yī)師作出診斷、監(jiān)測或治療決定的解釋時是非常關(guān)鍵的。當(dāng)分析物有不同的醫(yī)學(xué)應(yīng)例如，血鈣需要的關(guān)鍵濃度有：①低鈣血癥；②正常的血鈣；③高鈣血癥（見下圖）。因此，評價測量鈣的候選方法需要在這些關(guān)鍵濃度上設(shè)計來估計誤差。（二）建立質(zhì)量目標(biāo)（1）基于實驗室試驗的醫(yī)學(xué)使用的經(jīng)驗的專業(yè)判斷（2）臨床醫(yī)師的調(diào)查（3）分析物個體內(nèi)生物學(xué)變異（4）基于當(dāng)前分析技術(shù)水平的界限（5）分析物參考區(qū)間分?jǐn)?shù)計算的界限在文獻(xiàn)中已發(fā)表了建立分析質(zhì)量目的的指南。Barnett是第一位在此領(lǐng)域進(jìn)行研究的學(xué)者，并在20世Skendzel和Platt等人合作增加了其他的目標(biāo)。美國臨床實驗室改進(jìn)修正案（CLIA）法規(guī)對方法選擇和評價過程最具有影響意義在于對特定的法定分析物建立了評價方法和實驗室性能的固定限（見下表）。CLIA法規(guī)具有的法律和懲罰結(jié)果，這些界限目前和Westgard進(jìn)一步建議方法的變異系數(shù)應(yīng)不超過1/4的CLIA界限，這樣包括了不穩(wěn)定性能的可能性及使四、評價分析方法一般來說，初步評價期應(yīng)該是熟悉分析方法，它的儀器及程序步驟；這種熟悉階段涉及到預(yù)試驗來確一旦分析人員滿足執(zhí)行的方法并沒有任何困難，精密度應(yīng)使用在每一決定性水平上材料重復(fù)進(jìn)行測量。然后再執(zhí)行回收和干擾研究。如果具有可溯源性或已建立準(zhǔn)確度和精密度的必備的比較方法可獲得，應(yīng)根據(jù)方法比較試驗來檢驗準(zhǔn)確度。對每一類型的誤差可獲得定量的值；這些值可以與規(guī)范的允許誤差限進(jìn)行比較。實際上，這些誤差量和Westgard推薦）提供隨機(jī)誤差的估計；這種估計值然后與允許總誤差進(jìn)行比較。對干擾、回收和方法比較試驗（見下表）能建立類似的準(zhǔn)則。不同評價試驗估計的誤差判斷其可接受性準(zhǔn)則誤差類型誤差類型試驗判斷準(zhǔn)則隨機(jī)誤差重復(fù)試驗S＜S或4×S＜TEA總誤差重復(fù)和比較試驗4×S＋|（a＋bx）A-x|＜TEB（二）方法評價逐步描述執(zhí)行方法評價的實驗室必須完成下列任務(wù)：1.書面評價草案和程序文件（例如NCCLSGP2-A3“臨床實驗室技術(shù)程序手冊-批準(zhǔn)指南”并需要對程序文件進(jìn)行維護(hù)。2.記錄從評價到?jīng)Q定使之生效之間收集的信息，用文件的方式來證明方法的有效性。3.通過分析一套參考溶液或含有高濃度分析物的一系列的質(zhì)控品或混合樣本的溶液來確定可報告范5.通過將候選方法的性能與決定性或參考方法作比較，執(zhí)行回收試驗，或?qū)⒑蜻x方法的性能與被替代方法的性能比較，來確定方法的準(zhǔn)確度。6.通過確定校準(zhǔn)曲線的斜率可估計新方法的靈敏度。7.使用公式估計方法的檢出限。8.通過評價由于在血樣本中出現(xiàn)如膽紅素、血紅蛋白、脂類、抗凝劑和常見藥物物質(zhì)的干擾來檢驗新9.建立分析物的參考區(qū)間。的相關(guān)系數(shù)值。相關(guān)系數(shù)在揭示兩方法是否有關(guān)系時是有用處的，在方法學(xué)評價上通過幫助證實最小平方線性回歸統(tǒng)計量應(yīng)用于方法比較數(shù)據(jù)來確定數(shù)據(jù)范圍是否適當(dāng)?shù)膶捝嫌泻芨叩膬r值。相關(guān)系數(shù)（r）大于或等于0.975表明對于應(yīng)用簡單線性回歸技術(shù)時樣本數(shù)據(jù)是適當(dāng)范方法學(xué)比較研究中再沒有其他的適用之處。t檢驗：t值可用于確定偏倚是否是統(tǒng)計上的顯著性。這一事實可有意義，但它不能幫助作出基于臨床意義上關(guān)于試驗方法可接受性的決定。五、評價方法可接受性當(dāng)已成功地完成了方法評價的前四個步驟后，根據(jù)下列要求可得出方法性能的可接受性的客觀結(jié)論。1.通過試驗確定的誤差估計與分析目標(biāo)建立的規(guī)范確定的界限進(jìn)行比較。2.當(dāng)獲得的總誤差值小于方法允許的總誤差時，可認(rèn)為候選方法的性能是可接受的。3.當(dāng)一種或多種分析參數(shù)發(fā)現(xiàn)大于方法的允許誤差，可認(rèn)為候選方法的性能是不可接受的。當(dāng)這種情況出現(xiàn)時，必須改進(jìn)方法的性能；如果不能改進(jìn)，則需要舍棄該方法。表示測量值與真值的一致程度的是A.精密度B.準(zhǔn)確度C.系統(tǒng)誤差D.允許誤差E.隨機(jī)誤差『答案解析』準(zhǔn)確度是測量結(jié)果中系統(tǒng)誤差與隨機(jī)誤差的綜合，表示測量結(jié)果與真值的一致程度。A.標(biāo)準(zhǔn)差B.偏倚C.允許不精密度D.允許不準(zhǔn)確度E.總誤差『答案解析』精密度通常由同一材料至少分析20次并且計算標(biāo)準(zhǔn)差的重復(fù)試驗來估計。理想的回收率與實際的回收率是有一定的差距，這里所指的理想回收率應(yīng)該是A.50%B.100%C.1