吳茱萸健康昆明種小鼠研究

吳茱萸健康昆明種小鼠研究

中藥吳茱萸是吳茱萸的植物。材料表面實(shí)驗(yàn)動(dòng)物0.健康昆明種小鼠,體重17~22g(急性毒性試驗(yàn))或25~35g(精子畸變?cè)囼?yàn))、25~30g(骨髓微核試驗(yàn)),由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供,合格證號(hào)為SCXK(京)2002-0021。動(dòng)物置于(22±1)℃控溫和光暗周期為12h環(huán)境下,給予清潔級(jí)普通小鼠飼料飼養(yǎng)(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供)。蘑菇菌株采用經(jīng)鑒定符合要求的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門菌特效藥湖南湘潭產(chǎn)吳茱萸由湖南宏生堂制藥有限公司提供,經(jīng)北京大學(xué)藥學(xué)院楊秀偉教授鑒定為吳茱萸血清和培養(yǎng)基2-氨基芴(2-aminofluorene,2-AF;FlukaChemieAG,Buchs,Switzerland)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CP;上海華聯(lián)制藥有限公司)、多氯聯(lián)苯(polychlorinatedbiphenyls,PCBs;Accustandard,NewHaven,CT,USA)、瓊脂粉(日本進(jìn)口分裝,上海麥莎生物科技有限公司)、小牛血清和RPMI1640培養(yǎng)基(GibcoLaboratories,LifeTechnologiesInc.,GrandIsland,NY,USA)、Giemsa染液(北京耀明前沿科技發(fā)展中心)、絲裂霉素C(mitomycinC,MMC;Roche公司,日本);4-硝基喹啉-1-氧化物(NQO,4-nitroquinoline-1-oxide)、黃曲霉毒素B儀器HERAcell型CO方法吳兩種提取方法取吳茱萸粗粉2.0kg用20L水提取,共提取3次;合并提取液,過濾,濾液減壓濃縮,得吳茱萸水提取物(ERWE,批號(hào)001223)563g,收率28.15%。試驗(yàn)時(shí)用生理鹽水溶解并稀釋至受試濃度。另取吳茱萸粗粉2.0kg用20L70%乙醇水溶液提取,共提取3次;合并提取液,過濾,濾液減壓濃縮,得吳茱萸70%乙醇提取物(EREE,批號(hào)001225)524g,收率26.20%。試驗(yàn)時(shí)用適量DMSO溶解,并用生理鹽水稀釋至受試濃度。ERWE和EREE在“北京大學(xué)營(yíng)養(yǎng)與保健食品評(píng)價(jià)中心”備案號(hào)分別為010008,010007。男性進(jìn)行試驗(yàn)試驗(yàn)采用霍恩氏法,選用健康昆明種小鼠40只,雌雄各20只進(jìn)行試驗(yàn)。小鼠隨機(jī)分為4個(gè)受試藥物劑量組:1.00,2.15,4.64,10.00g·kg突變?cè)囼?yàn)受試藥物回復(fù)突變?cè)囼?yàn)采用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型TA97,TA98,TA100,TA1024種試驗(yàn)菌株進(jìn)行試驗(yàn);采用PCB誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿作為體外代謝活化系統(tǒng)。受試藥物研磨后,稱取一定量配成所需濃度,15min高壓滅菌后用于試驗(yàn)。在頂層瓊脂中加入0.1mL試驗(yàn)菌株增菌液、0.1mL受試藥物溶液和0.5mLS-9混合液(當(dāng)需要代謝活化時(shí)),混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。設(shè)0.2,20,200,1000,5000μg/皿5個(gè)劑量組,同時(shí)設(shè)自發(fā)回復(fù)突變和陽性突變劑(2-AF或NQO)對(duì)照組。在37℃培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)每皿回復(fù)突變菌落數(shù)。如果受試藥物的回復(fù)突變菌落數(shù)是自發(fā)回復(fù)突變菌落數(shù)的2倍以上,并呈劑量-反應(yīng)關(guān)系者則定為陽性。整套試驗(yàn)在相同條件下重復(fù)進(jìn)行2次試驗(yàn)。以單因素方差分析比較各組回復(fù)突變菌落數(shù)。受試藥物試驗(yàn)組將體重25~35g的性成熟雄性小鼠25只隨機(jī)分為5組,每組5只,5組分別為陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組和3個(gè)劑量受試藥物試驗(yàn)組。陽性對(duì)照組按60g·kg受試藥物試驗(yàn)組選用體重為25~30g的昆明種小鼠50只,隨機(jī)分為5組,每組10只,雌雄各半。5組分別為:陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組和3個(gè)劑量受試藥物試驗(yàn)組。陽性對(duì)照組按60mg·kg統(tǒng)計(jì)處理所有數(shù)據(jù)處理用MicrosoftExcel(Microsoft,Redmond,W