阿利克侖對糖尿病大鼠氧化應(yīng)激的影響

阿利克侖對糖尿病大鼠氧化應(yīng)激的影響

糖尿病是心血管疾病發(fā)展的主要危險因素之一。與糖尿病有關(guān)的危險因素包括高血糖癥、胰島素抵抗、脂質(zhì)障礙和氧化反應(yīng)。高血糖不僅減少一氧化氮(NO)的產(chǎn)生和活性,也增加超氧陰離子的產(chǎn)生。增加NO產(chǎn)物并增強它的活性,或者減少活性氧都是糖尿病心血管并發(fā)癥的治療策略阿利克侖(aliskiren)是第一個口服的有效的直接腎素抑制劑,它和傳統(tǒng)的腎素血管緊張素系統(tǒng)(reninagiotensin,RAS)阻斷劑有著不同的藥理機制1材料和方法1.1試劑、儀器和儀器清潔級SD大鼠,雄性,體重220～250g,南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。動物分籠飼養(yǎng)于12h明暗交替,室溫18～23℃潔凈動物房內(nèi),自由飲水?dāng)z食。阿利克侖(aliskiren,NovartisEuropharm公司,英國);鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ,Sigma公司,美國);黃嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所);一氧化氮(nitricoxide,NO)試劑盒(南京建成生物工程研究所);葡萄糖測定試劑盒(上海榮盛生物藥業(yè)有限公司);熒光探針-DHE(北京威格拉斯儀器有限公司);血糖儀(美國強生公司)。Poly-L-Lysine多聚賴氨酸處理的載玻片(武漢博士德);冰凍切片機(Leica);OCT冰凍切片包埋劑(SakuraFinetek,Tokyo公司,日本);熒光顯微鏡(Olympus公司,日本);熒光凝膠成像系統(tǒng)(ThermoFisherScinetific);GraphPadPrism4軟件(GraphPadSoftware)。1.2阿利克侖對stz誘導(dǎo)1型糖尿病大鼠stz-1型糖尿病大鼠血糖的影響雄性SD大鼠(6周齡)分成4組(9只/組):對照組(CON組,給予對應(yīng)溶劑),阿利克侖[30mg/(kg·day)]處理對照組(C+A組),STZ誘導(dǎo)1型糖尿病組(DM組,給予對應(yīng)溶劑),阿利克侖[30mg/(kg·day)]1.2.1血糖和血清no水平頸動脈取血后,常溫放置30min,3500r/min離心10min,取上清測血糖(BG)和血清NO水平。血糖使用葡萄糖測定試劑盒檢測。新鮮血(0.5ml)加EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二鈉,20mg/ml溶液,取50μl)抗凝,于江蘇省中醫(yī)院檢驗科檢測糖化血紅蛋白(HbA1C)。血清NO濃度水平用NO測定試劑盒進行測定。1.2.2黃嘌呤氧化酶測定方法血清XOD檢測:頸動脈取血后,常溫放置30min,3500r/min離心10min,取上清,使用黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒進行測定。血管活性氧(ROS)形成:胸主動脈ROS的形成在冰凍切片中檢測,使用DHE(2μmol/L)染色方法在熒光顯微鏡下觀察ROS1.3統(tǒng)計學(xué)處理各組數(shù)據(jù)均來自不同的測定結(jié)果,數(shù)值以平均值±標準差(x±s)表示,數(shù)據(jù)分析以及劑量反應(yīng)曲線的回歸采用Prism軟件進行處理,組間比較采用One-wayANOVA分析方法以及Bonferroni’stest進行檢驗,P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1阿利克侖對大鼠血糖和糖化血紅蛋白的影響12周齡的糖尿病大鼠(DM)的體重(335.0±30.87)g明顯小于同齡的對照組大鼠(CON)(412.8±46.59)g(P<0.01),這些改變沒有被5周的阿利克侖處理(D+A)(324.4±41.47)g影響。5周的阿利克侖處理也沒有降低糖尿病大鼠(DM)增高的血糖[CON:(13.25±1.539)mmol/L,DM:(37.91±3.856)mmol/L,D+A:(41.06±5.578)mmol/L)]和糖化血紅蛋白水平[CON:(2.50±0.378)%,DM:(10.72±2.017)%,D+A:(11.60±1.512)%,P<0.001]。(圖1)2.2阿利克侖對血清no濃度水平影響與對照組(44.60±9.924μmol/L)相比,糖尿病組(DM)血清NO濃度(68.87±19.84μmol/L)明顯增加(P<0.01),給阿利克侖后,血清NO濃度降低(44.48±12.92μmol/L,P<0.05)(圖2)。2.3血清中的黃酮酶水平2.4黃農(nóng)黃模型氧化應(yīng)激主動脈活性氧在冰凍切片中檢測,使用DHE染色的方法。DHE熒光顯示(圖4),在糖尿病大鼠影響鏈脲佐菌素(DM)處理激活了黃嘌呤氧化酶(P<0.01)(CON:33.97±6.066U/L,DM:45.23±6.441U/L),導(dǎo)致血清活性氧的形成。阿利克侖處理(D+A)可以改善這種氧化應(yīng)激(D+A:36.65±4.264U/L)(P<0.05)(圖3)。(DM)胸主動脈上活性氧形成(紅色熒光標志)顯著增長,阿利克侖處理(D+A)減少這些異?；钚匝醯男纬伞?阿利克侖對1型糖尿病大鼠血清中氧化應(yīng)激的作用STZ是目前使用最廣泛的糖尿病動物模型化學(xué)誘導(dǎo)劑,它對一些種屬的動物胰島β細胞有選擇地破壞,最終導(dǎo)致高血糖,獲得滿意的1型糖尿病動物模型。我們的研究中,腹腔注射STZ造模1型糖尿病,糖尿病組大鼠的血糖及糖化血紅蛋白都顯著高于對照組正常值,說明造模成功。當(dāng)前,直接腎素抑制劑對糖尿病及其并發(fā)癥的影響仍然需要確定。很多關(guān)于阿利克侖對糖尿病效果的研究都是在1型糖尿病模型上進行,近年來有報導(dǎo)顯示阿利克侖能降低血壓,保護STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病轉(zhuǎn)基因TG27大鼠的腎臟損傷,抑制STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病大鼠的心肌細胞凋亡和間質(zhì)纖維化等在這個研究中,選用阿利克侖(30mg/kg·day)劑量灌胃給藥,與參考文獻報道劑量一致一氧化氮(NO)是一種生物信息遞質(zhì),體內(nèi)的NO是由L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的催化作用下產(chǎn)生,NOS分為3種亞型,分別為神經(jīng)元型(nNOS)、誘導(dǎo)型(iNOS)和內(nèi)皮型(eNOS)綜上所述,STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激明顯增強,誘