儀器分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告

..儀器分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的含量院系：化學(xué)化工學(xué)院專業(yè)年級(jí):2013級(jí)應(yīng)用化學(xué)XX:馬芳學(xué)號(hào):413072532015年11月12日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理；2、掌握熒光光度計(jì)的操作技術(shù)和測定多維葡萄糖粉中維生素B2的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1、維生素B2，又叫核黃素，是橘黃色無臭的針狀結(jié)晶。維生素B2易溶于水二不易溶于乙醚等有機(jī)溶劑，在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對(duì)熱穩(wěn)定。2、維生素B2水溶液在430~440nm藍(lán)光或紫外光照射下回發(fā)生綠色熒光，熒光峰在535nm，在pH=6~7的溶液中熒光強(qiáng)度最大，在pH=11的堿性溶液中熒光消失。3、多維葡萄糖中含有維生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中維生素C和葡萄糖在水溶液中不發(fā)熒光，維生素B1本身無熒光，在堿性溶液中用鐵氰化鉀氧化后才產(chǎn)生熒光，維生素D2用二氯乙酸處理后才有熒光，他們都不干擾維生素B2的測定。維生素B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射會(huì)發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，光黃素的熒光比核黃素的熒光強(qiáng)的多，故測維生素B2的熒光時(shí)溶液要控制在酸性圍，且在避光條件下進(jìn)展。4、熒光分析法：常溫下，處于基態(tài)的分子吸收一定的紫外可見光的輻射能成為激發(fā)態(tài)分子，激發(fā)態(tài)分子通過無輻射躍遷至第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，再以輻射躍遷的形式回到基態(tài)，發(fā)出比吸收光波長長的光而產(chǎn)生熒光。在稀溶液中熒光IF與物質(zhì)的濃度c有以下的關(guān)系：IF=2.303φI0εbc(φ：量子產(chǎn)率，I0：入射光強(qiáng)度，ε：熒光分子的摩爾吸光系數(shù)，b：液槽厚度)當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件一定時(shí)，熒光強(qiáng)度IF與熒光物質(zhì)的濃度c成線性關(guān)系：IF=Kc5、熒光光譜：〔1〕激發(fā)光譜：固定測量波長(選最大發(fā)射波長)，化合物發(fā)射的熒光強(qiáng)度與照射光波長的關(guān)系曲線。激發(fā)光譜曲線的最高處，處于激發(fā)態(tài)的分子最多，熒光強(qiáng)度最大?！?〕發(fā)射光譜：固定激發(fā)光波長(選最大激發(fā)波長),化合物發(fā)射的熒光強(qiáng)度與發(fā)射光波長關(guān)系曲線。6、熒光分析儀器〔1〕常用的熒光分析儀器由激發(fā)光源、單色器、液槽、檢測器和顯示記錄器五局部構(gòu)成三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑熒光光度計(jì)5mL移液管1只，2mL移液管1只，50mL容量瓶10只，10.0μg·mL-1維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液〔置陰暗處保存〕，冰乙酸〔AR〕，多維葡萄糖粉試樣。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、翻開氙燈，再翻開主機(jī)，然后翻開計(jì)算機(jī)啟開工作站并初始化儀器，預(yù)熱；2、在6個(gè)干凈的50mL容量瓶中，用吸量管分別吸取0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00mL的10.0μg·mL-1維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別參加2.00mL冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。得到不同濃度的溶液分別是：0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6μg·mL-1的維生素B2溶液；3、儀器初始化完畢后，在比色皿中裝入0.3μg·mL-1的維生素B2溶液，在工作界面上選擇測量工程〔并設(shè)置適當(dāng)?shù)膬x器參數(shù)：如靈敏度＝2，入射縫寬和出射縫寬均為10nm等〕：〔1〕固定發(fā)射波長為526nm，掃描激發(fā)波長〔圍是400~480nm〕，記錄所得數(shù)據(jù)〔2〕再固定激發(fā)波長為452nm，掃描發(fā)射波長〔圍是500~550nm〕，記錄所得數(shù)據(jù)4、標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光強(qiáng)度的測定：根據(jù)步驟3中所得數(shù)據(jù)，確定激發(fā)波長為452nm，發(fā)射波長為535nm，將之前配置的0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6μg·mL-1的維生素B2溶液，從稀到濃測量系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，每種各測量三次，記錄所得數(shù)據(jù)5、未知試樣的測定：用電子天平準(zhǔn)確稱取0.15~0.20g多維葡萄糖粉試樣，用少量水溶解后轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，加2.00mL冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。用測定標(biāo)準(zhǔn)系列時(shí)一樣的條件，平行測量其熒光強(qiáng)度3次，記錄所得數(shù)據(jù)；五、數(shù)據(jù)處理1.由實(shí)驗(yàn)步驟3所得最大發(fā)射波長為535nm，最大激發(fā)波長為452nm。2.用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線濃度〔μg/mL〕123平均0.18685.7985.6785.820.2161.1161.5160.3161.00.3250.2250.4249.7250.10.4326.9326.5326.1326.50.5399.4399.1400.8399.80.6481.7483.2481.7482.2由圖可知，R2=0.9994，證明線性關(guān)系良好，可用于計(jì)算待測樣濃度3、未知樣品濃度的測定：稱取的多維葡萄糖粉質(zhì)量m1=0.1755g，m2=0.17g,m3=0.1767g試樣熒光強(qiáng)度①熒光強(qiáng)度②熒光強(qiáng)度③熒光強(qiáng)度平均1153.1152.2151.5152.32152.8152.8151.4152.33152.5152.6151.2152.1由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的線性方程y=793.66x+6.3533得C1=0.1839μg/mL,C2=0.1839μg/mL,C3=0.1836μg/mLC(平均值)=0.1838μg/mL標(biāo)準(zhǔn)偏差=1.732*10-4相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差=1.732*10-4/0.1838*100%=0.0942%所以多維葡萄糖粉中維生素B2的含量試樣一的含量=(0.1839×50×10-6)/0.1767×100％=0.00520％試樣二的含量=(0.1839×50×10-6)/0.1755×100％=0.00524％試樣三的含量=(0.1836×50×10-6)/0.1747×100％=0.00525％平均值=0.00523%標(biāo)準(zhǔn)偏差=2.646*10-5相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差=2.646*10-5/0.00523%=0.0506六、實(shí)驗(yàn)反思本次實(shí)驗(yàn)比擬簡單，完成得較成功，在配置溶液上比擬準(zhǔn)確，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也,較好，在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的方差為0.9994。但在實(shí)驗(yàn)中還應(yīng)注意以下幾個(gè)細(xì)節(jié)：1、在實(shí)驗(yàn)中，激發(fā)光波