熒光PCR檢測(cè)乙肝病毒DNA的臨床意義(全文)

精品文檔-下載后可編輯熒光PCR檢測(cè)乙肝病毒DNA的臨床意義(全文)乙型肝炎是一種由乙肝病毒(HBV)感染引起的傳染病。我國屬HBV感染高流行區(qū)，我國是乙肝攜帶者高于人群的10%。急性乙肝中有20%會(huì)轉(zhuǎn)為慢性，進(jìn)而可能發(fā)展為肝硬化和肝癌，因此準(zhǔn)確迅速診斷對(duì)乙肝的治療和預(yù)后顯得極為重要。熒光定量PCR技術(shù)把PCR、雜交及光譜技術(shù)相融合，達(dá)到了對(duì)原始模板量定量的目的。HBV-DNA是乙肝病毒的遺傳物質(zhì)，HBV-DNA(PCR)是從血清中檢測(cè)HBV存在的靈敏而直接的方法。進(jìn)一步證實(shí)HBV-DNA檢測(cè)在乙型肝炎早期診斷、傳染性識(shí)別、病毒復(fù)制水平判斷以及抗病毒藥物的選擇、治療效果以及監(jiān)測(cè)的臨床價(jià)值。以285份血清標(biāo)本分別用酶免法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半和熒光定量PCR法檢測(cè)HBV-DNA，進(jìn)行對(duì)比分析。

資料與方法

血清標(biāo)本均取自2022年1月～2022年5月門診及住院患者，選擇其中285例臨床資料完整病例進(jìn)行方法的靈敏性、實(shí)用性及臨床應(yīng)用價(jià)值的探討，并通過綜合分析，對(duì)乙型肝炎血清標(biāo)記物進(jìn)行評(píng)價(jià)。

血清標(biāo)本的采集：采用滅菌的一次性真空塑料管，清晨空腹抽取靜脈血5ml，離心分離血清，-20℃凍存?zhèn)溆茫袡z測(cè)。

試劑與方法：①測(cè)定方法：血清HBV-DNA測(cè)定采用FQ-PCR，實(shí)驗(yàn)儀器Lightcycler20，檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。②HBV免疫血清標(biāo)志物用ELISA法檢測(cè)。采用酶標(biāo)儀進(jìn)行結(jié)果判斷，檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

結(jié)果

用ELISA法分別對(duì)285例血清進(jìn)行HBV兩對(duì)半檢測(cè)并依據(jù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分組。見表1。

討論

血清HBV標(biāo)志物(HBVM)的檢測(cè)給臨床診斷乙肝病毒感染提供了較便捷的診斷依據(jù)。在臨床應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)由于病情的發(fā)展過程的結(jié)局的多樣性，尤其是肝功正常而體內(nèi)確實(shí)有病毒復(fù)制者的治療中，定量PCR檢測(cè)HBVDNA為HBV感染及其療效的判定提供了一項(xiàng)重要指標(biāo)。診斷乙型肝炎及了解病毒復(fù)制狀態(tài)的檢測(cè)指標(biāo)主要包括兩部分：病毒DNA的表達(dá)物及其抗體應(yīng)答系統(tǒng)；ELISA方法一直是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，它實(shí)際就是檢測(cè)病毒DNA的表達(dá)物及應(yīng)答系統(tǒng)，直接探測(cè)PCR過程中熒光信號(hào)的變化，結(jié)果特異、準(zhǔn)確。

第1組(俗稱大三陽)125例患者血清的HBV-DNA陽性率100%，血清的HBV-DNA平均含量753×108copy/ml，兩者的結(jié)果是相互關(guān)聯(lián)的，兩者具有相似的流行病學(xué)意義，同時(shí)也反映了HBV-DNAPCR定量檢測(cè)結(jié)果陽性率更高，更能直接體現(xiàn)HBV的復(fù)制過程。

第2組模式中128例血清的HBV-DNA陽性率524%，血清的HBV-DNA平均含量958×107copy/ml，從中可看出隨著HBeAg(陽性)轉(zhuǎn)變?yōu)镠BeAg(陰性)，抗-HBe(陽性)的出現(xiàn)HBV-DNA的陽性率大為減低，但HBV-DNA的平均含量與第1組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜005)，反映出HBV-DNA較ELISA這一模式特異性更強(qiáng)，敏感性更高，更能直接反映HBV-DNA復(fù)制水平。

第3組模式中32例血清的HBV-DNA陽性率518%，血清的HBV-DNA平均含量774×107copy/ml，說明HBeAg(陰性)與血清HBV-DNA含量的變化并不一致，因此不能僅為ELISA法測(cè)定血清HBeAg(陰性)就確定HBV在體內(nèi)無復(fù)制現(xiàn)象，而要用敏感性較高的PCR檢測(cè)HBV-DNA含量水平，才能更確切地判斷HBV復(fù)制狀況，更好的服務(wù)于臨床。

乙型肝炎病毒(HBV)感染人體是一個(gè)連續(xù)動(dòng)態(tài)的過程，用ELISA法檢測(cè)免疫標(biāo)志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)可在一定程度上反映病毒是否處于復(fù)制狀態(tài)，但是不可避免地具有一定的局限性，而PCR法檢測(cè)HBV-DNA含量水平能直接體現(xiàn)HBV復(fù)制過程，敏感性更強(qiáng)，特異性更高。探討血清HBV-DN