梅毒的實驗診斷

梅毒的實驗診斷

及其方法學(xué)評價

梅毒的診斷必須依據(jù)病史，臨床體征，實驗室的檢查綜合分析。近年來隨著性病病例的上升，以及梅毒皮疹的多樣性和潛伏梅毒的存在，實驗室診斷已顯示其重要作用。

梅毒的實驗室診斷一般包括三個方面：1、從病灶取材檢查梅毒螺旋體。2、從血清中檢查侵入機體后所產(chǎn)生的相應(yīng)抗體。3、從病理組織切片上觀察其病理特征的改變和（或）查見梅毒螺旋旋體。一、檢查梅毒螺旋體抗原：

1、方法：檢查梅毒螺旋體抗原是對于早期疑似梅毒感染者，在體內(nèi)還沒有出現(xiàn)相應(yīng)抗體前，取病灶分泌物進行涂片檢查。常見的方法有顯微鏡暗視野檢查法；Fontana-Tribondean鍍銀染色法；姬姆薩Giemsa染色法；濃鹽酸蒸汽顯示法；單克隆免疫熒光法（DFI）；聚合酶鏈檢測法（PCR）。2、方法及其評價：上述方法各有其特點，若鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床上可診斷為梅毒。具有快速，方便，易操作等特點。顯微暗視野檢查法本法已被世界衛(wèi)生組織（WHO）指定為性病實驗室必備項目之一。它是利用暗視野顯微鏡或熒光顯微鏡的暗視野裝置進行檢查；亦可用普通顯微鏡加裝暗視野聚光器，若沒有專門的聚光器，也可加裝黑色的X光片包裝紙，用剪刀剪成直徑小于普通顯微鏡聚光鏡直徑，大約（0.8~1）CM，用少許鏡油輕輕粘附于聚光鏡頭上，使光源之光線能從其周圍透過即可進行應(yīng)用。

取材的方法為用無菌棉簽蘸取少量生理鹽水輕輕洗去病灶表面污物，用蓋玻片緊貼患處約30秒至1分鐘，馬上置于載玻片上滴加1至2滴生理鹽水制片，放于暗視野顯微鏡下觀察；若有一期硬下疳采樣時，用生理鹽水洗去表面污物后用鈍刀或小號注射器刮取或抽取膿液涂片，加已預(yù)熱鹽水在玻片上制片置鏡下檢查。螺旋體在暗視野下呈白色，折光性較強，反差明顯，形態(tài)如多個“S”字母相連，清晰可辯，在用溫鹽水制片時還可觀察其運動。低倍鏡下看到螺旋體運動活潑，呈現(xiàn)不停翻動的閃光白點，高倍鏡下見到其似多個連接的S狀形態(tài)及運動形式多呈蛇行運動。本法的缺點是與雅司螺旋體在形態(tài)上和運動方式上較難區(qū)別；與口腔及生殖器內(nèi)的一些條件致病性螺旋體也難區(qū)分。若患者取材前1~2天已用抗菌素治療，在病損處外用一些藥物，如碘酊，乙醇，其他化學(xué)藥物，可使其消失或形態(tài)發(fā)生改變，很可能見不到螺旋體。同時還應(yīng)注意從口腔，咽喉及外陰部取材時有非致病性螺旋體的存在。

鍍銀染色法對于組織來講有LEVOADITIS法和WARTHIN-STARRY法，在鏡下螺旋體呈棕黑色而背景呈淡棕色，在組織切片中可見梅毒螺旋體的數(shù)量。本法試劑須現(xiàn)配現(xiàn)用，且配制較繁瑣和一定的污染性，敏感性也較差。濃鹽酸蒸汽顯示法是用1%剛果紅和37%濃鹽酸，梅毒螺旋體被染成藍(lán)色，好處是操作簡單，試劑用量少，成本低，易于觀察；缺點是顯色時程度不易掌握，濃鹽酸易燒傷皮膚。

免疫熒光染色法（DFI-TP）

原理是使用熒光標(biāo)記的抗梅毒螺旋體單克隆抗體或多克隆抗體，檢測患者組織液中梅毒螺旋體。其方法有直接法和間接法；直接法是將患者組織液標(biāo)本涂片，片膜直徑小于1cm，使其自然干燥，丙酮固10分鐘，用已知抗梅毒螺旋體血清（一般用人或兔）經(jīng)非致病螺旋體培養(yǎng)物吸收后再用異硫氰酸鹽熒光素（FITC）標(biāo)記，直接覆蓋于標(biāo)本上，經(jīng)37攝氏度孵育30分鐘徹底清洗，緩沖甘油封片鏡檢。間接法是把已經(jīng)吸收處理好的已知抗梅毒螺旋體血清加在固定好的標(biāo)本上，37攝氏度孵育30分鐘徹底清洗，再加FITC標(biāo)記的抗體（人或兔），孵育，徹底清洗，用緩沖甘油封片固定鏡檢；結(jié)果在熒光顯微鏡下可見呈現(xiàn)亮綠色螺旋體，以見到完整的螺旋體為陽性。最大優(yōu)點是敏感性高，特異性強。因必須用熒光顯微鏡，加之熒光強度的觀察以及某些有熒光淬滅作用物質(zhì)如苯胺，酚，間苯二酚，硝基苯，鹵化物的干擾，須避免此類物質(zhì)污染，有鑒于此，難于在基層實驗室推廣。

PCR法

PCR法:在性病學(xué)研究領(lǐng)域中應(yīng)用得較多，在臨床上現(xiàn)國內(nèi)暫停應(yīng)用。PCR法是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱，其基本方法主要是兩大步，一是引物的設(shè)計，二是循環(huán)擴增。PCR法的最大特點是特異性和敏感性都非常高，有作者提出特異性和敏感性均優(yōu)于血清學(xué)方法，且PCR法對實驗室內(nèi)的環(huán)境如防塵，無菌，無化學(xué)藥物污染，以及實驗操作人員的技術(shù)和責(zé)任心要求相當(dāng)高。

二、檢查其侵入機體后產(chǎn)生的相應(yīng)抗體梅毒螺旋體侵入機體后，全身各組織器官均可侵犯。病程具有長期性和潛伏性。機體對梅毒螺旋體感染可產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，機體持續(xù)梅毒螺旋體感染時才有免疫力。患者血清中有兩種抗體，一種是特異性梅毒螺旋體抗體；一種是非特異性抗類脂質(zhì)抗體，它可能是感染組織破壞而裂解出的一種類脂質(zhì)，作為半抗原與螺旋體的蛋白質(zhì)結(jié)合形成完全抗原后刺激機體產(chǎn)生的一種抗體。（一）非特異性抗類脂質(zhì)抗體的檢測1、方法：性病研究室試驗（VDRL）；不加熱血清反應(yīng)素試驗（USB）；快速血漿反應(yīng)素試驗（RPR）或TRUST；自動反應(yīng)素試驗（ART）；以及VDRL-CSF試驗。

2、方法及其評價：上述方法都是檢測血清中的抗類脂質(zhì)抗體。主要變化在于針對抗原在不斷改良，以及被測血清的滅活上；其原理大同小異，都只能用于梅毒的初篩和從滴度上反映患者感染梅毒螺旋體的程度和療效觀察；在實驗中也可防止“前帶現(xiàn)象”的產(chǎn)生?，F(xiàn)就常用的幾種方法進行評價。

性病研究室試驗（VDRL）是華斯曼（WASSERMANN1906）和MICHELIS最早建立的原型補體固定試驗和絮狀反應(yīng)的基礎(chǔ)上逐步改良而來。VDRL所用抗原：從牛心中提取的有效成分：心磷脂，卵磷脂，膽固醇。本方法作為梅毒的初篩試驗，即定性又定量；亦可用于檢測腦脊液，即VDRL-CSF，對神經(jīng)性梅毒有診斷價值。

不加熱血清反應(yīng)素試驗（USR）；所用抗原為改良的VDRL抗原，經(jīng)稀釋離心后于沉淀中加入EDTA-Na2，氯化膽堿，防腐劑。其中EDTA-Na2可使抗原半年有效，氯化膽堿起化學(xué)滅活作用，使待測血清不必加熱滅活，抗原不必每天現(xiàn)配。4-8攝氏度冰箱可保存6個月。主要用于梅毒感染的初篩試驗。快速血漿（清）反應(yīng)素試驗（RPR或TRUST）：特點是所用抗原與USR相同，與抗原中加入活性膠體碳微?；蚣谆芳t標(biāo)記抗原，在特制的圓凹形紙卡上進行抗原抗體反應(yīng)。RPR陽性可見黑色的絮狀凝集顆粒；TRUST陽性可見紅色的絮狀凝集顆粒。

上述方法的優(yōu)點是不須顯微鏡，肉眼就能觀察，直觀性強；操作簡單，出結(jié)果快，特別適合普查和婚檢。其敏感性在梅毒病程的早期階段，各種血清反應(yīng)中以RPR或TRUST最為敏感。有文獻稱：RPR對初期梅毒病灶出現(xiàn)1-2周的陽性率為53~83%；二期梅毒的陽性率可達(dá)100%；晚期梅毒為58~85%，經(jīng)藥物治療后血清學(xué)試驗可轉(zhuǎn)陰；胎傳梅毒陽性率為80~100%。其特異性為RPR或TRUST的滴度大于1:8時，要考慮有生物學(xué)真陽性和生物學(xué)假陽性的存在；前者主要見于與梅毒螺旋體同屬的一些螺旋體感染，如品他，雅司螺旋體等；后者主要見于一些急性發(fā)熱性疾病和自身免疫性疾病，如風(fēng)疹，麻疹，傳染性單核細(xì)胞增多癥，上呼吸道感染，活動性肺結(jié)核，亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，紅斑狼瘡，麻醉及海洛因成癮者。另外妊娠及0.4%的孕婦也可造成。凡是RPR或TRUST滴度小于1：8者，且是第一次查血RPR或TRUST，建議都須作確證試驗以明確診斷，減少誤診的發(fā)生。另外也要防止“前帶現(xiàn)象”造成假陰性的發(fā)生。近些年有一種較新的商品試劑膠體金試條示也可作為梅毒的初篩試驗，有作者報道[7]其特