化妝品常用植物提取物中16種香豆素類化合物測定 液質(zhì)聯(lián)用法（征求意見稿）

T/FSBMEAXXXX—XXXX化妝品常用植物提取物中16種香豆素類化合物的測定液質(zhì)聯(lián)用法本文件規(guī)定了化妝品中常用植物提取物中16種香豆素類化合物的液質(zhì)聯(lián)用測定方法。本文件適用于液體類常用植物提取物中16種香豆素類化合物的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理樣品提取后，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測。根據(jù)保留時間和特征離子對的相對豐度比定性、定量離子對峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。5試劑除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1乙腈：色譜純。5.2甲酸：色譜純。5.3甲醇：色譜純。5.40.1%甲酸溶液：取1mL甲酸（5.2）用水定容至1000mL，混勻。5.5標(biāo)準(zhǔn)品：香豆素、7-羥基香豆素、補骨酯素、7-甲基香豆素、異補骨酯素、8-甲氧基補骨酯素、歐前胡素、異歐前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新補骨酯異黃酮、補骨酯二氫黃酮、4-甲基-7-羥基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基補骨酯素、2,4,8-三甲基補骨酯素、環(huán)香豆素標(biāo)準(zhǔn)品純度均≥98%。5.6標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取香豆素、7-羥基香豆素、補骨酯素、7-甲基香豆素、異補骨酯素、8-甲氧基補骨酯素、歐前胡素、異歐前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新補骨酯異黃酮、補骨酯二氫黃酮、4-甲基-7-羥基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基補骨酯素、2,4,8-三甲基補骨酯素、環(huán)香豆素各10mg（精確到0.00001g），分別置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇(5.3)溶解并定容至刻度，混勻。制成標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的質(zhì)量濃度均為1000mg/L。置于-18℃以下冰箱中保存，有效期3個月。T/FSBMEAXXXX—XXXX5.7混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：準(zhǔn)確移取各標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量置于20mL棕色容量瓶中，用甲醇(5.3)并定容至刻度，搖勻，制成配制香豆素質(zhì)量濃度范圍約為80μg/mL，7-羥基香豆素、補骨酯素、7-甲基香豆素、異補骨酯素、8-甲氧基補骨酯素質(zhì)量濃度范圍約為40μg/mL，歐前胡素、異歐前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新補骨酯異黃酮、補骨酯二氫黃酮質(zhì)量濃度范圍約為8.0μg/mL，4-甲基-7-羥基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基補骨酯素、2,4,8-三甲基補骨酯素、環(huán)香豆素質(zhì)量濃度范圍約為4.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。置于-18℃中避光保存，有效期1個月。5.8混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：精密移取適量混合對照品中間溶液，用甲醇(5.3)配制香豆素質(zhì)量濃度范圍約為0.20μg/mL～8.0μg/mL，7-羥基香豆素、補骨酯素、7-甲基香豆素、異補骨酯素、8-甲氧基補骨酯素質(zhì)量濃度范圍約為0.10μg/mL～4.0μg/mL，歐前胡素、異歐前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新補骨酯異黃酮、補骨酯二氫黃酮質(zhì)量濃度范圍約為0.02μg/mL～0.80μg/mL，4-甲基-7-羥基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基補骨酯素、2,4,8-三甲基補骨酯素、環(huán)香豆素質(zhì)量濃度范圍約為0.01μg/mL～0.40μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，具體濃度見表1。表1香豆素等16種組分的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度序號名稱混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度(μg/mL）1香豆素0.200.502.04.08.027-羥基香豆素0.100.250.502.04.03補骨酯素0.100.250.502.04.047-甲基香豆素0.100.250.502.04.05異補骨酯素0.100.250.502.04.068-甲氧基補骨酯素0.100.250.502.04.07歐前胡素0.020.050.100.200.400.808異歐前胡素0.020.050.100.200.400.8096,7-二甲氧基香豆素0.020.050.100.200.400.80新補骨酯異黃酮0.020.050.100.200.400.80補骨酯二氫黃酮0.020.050.100.200.400.804-甲基-7-羥基香豆素0.010.0250.050.100.200.404-甲基-7-乙氧香豆素0.010.0250.050.100.200.405-甲氧基補骨酯素0.010.0250.050.100.200.402,4,8-三甲基補骨酯素0.010.0250.050.100.200.40環(huán)香豆素0.010.0250.050.100.200.406儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，配電噴霧離子源（ESI源）。6.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。6.3超聲波清洗器。T/FSBMEAXXXX—XXXX6.4渦旋混合儀。6.5高速離心機，轉(zhuǎn)速不低于6000r/min。6.6微孔濾膜：0.22μm。7樣品精密稱取不同柑橘類、石斛類、當(dāng)歸類、馬齒莧類等化妝品植物提取物品種植物提取物1.0g（精確至0.1mg）于20mL容量瓶中，加入適量甲醇，漩渦2min后，移至超聲器超聲提取20min，甲醇定容，混勻后取適量溶液至離心管中，8000r/min離心8min，取上清液用0.22μm濾膜過濾，進樣，分析測定。8試驗步驟8.1儀器參考條件8.1.1色譜條件色譜柱：C18柱（2.1mm×100.0mm，1.7μm），或等效色譜柱；流動相：A為乙腈（5.1)，B為0.1%甲酸溶液（5.4)，梯度洗脫程序見表2。流速：0.30mL/min；柱溫：30℃;表2梯度洗脫程序時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0.005955952.007.009.0011.0013.009015.009015.1059517.105958.1.2質(zhì)譜條件監(jiān)測模式：正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表3。毛細(xì)管電壓：3600V毛細(xì)管溫度：500℃離子源溫度：150℃表316種香豆素類化合物質(zhì)譜檢測參數(shù)Table3Massspectrometricconditionformonitoringof16coumarincompoundsT/FSBMEAXXXX—XXXX序號名稱保留時間(min)母離子子離子錐孔電壓（V）碰撞電壓1香豆素5.43146.990.9*76.927-甲基香豆素8.35160.9104.9*90.837-羥基香豆素4.00162.976.844-甲基-7-羥基香豆素4.76176.9120.9*104.95補骨酯素8.21186.9130.9*76.86異補骨脂素8.47186.9130.8*76.974-甲基-7-乙氧香豆素9.20205.0176.9*104.986,7-二甲氧基香豆素5.06207.0106.9*150.998-甲氧基補骨脂素8.54217.0201.9*89.55-甲氧基補骨脂素8.92217.0202.0*117.92,4,8-三甲基補骨脂素9.73229.1141.8*173.042異歐前胡素10.14271.1203.0*90.840歐前胡素9.79271.1146.9*202.9環(huán)香豆素10.44323.2120.9*251.044新補骨酯異黃酮9.35323.2267.0*255.0補骨酯二氫黃酮9.47325.264.8*148.944*為推薦的定量離子。注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。8.2定性判定T/FSBMEAXXXX—XXXX取樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測成分的特征離子峰保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的保留時間一致，且選擇的定性離子的相對豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液的定性離子的相對豐度比的最大偏差不超過表4規(guī)定的范圍，則可以確定試樣中檢出對應(yīng)的成分。表4定性確證時相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度（X）/%X>5050≥X>2020≥X>10X≤10允許的最大偏差/%8.3定量測定取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.8）依次測定，以待測組分的系列濃度為橫坐標(biāo)，待測組分的峰面積為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。取樣品溶液（7.1）測定，將對應(yīng)的定量離子色譜峰面積代入線性回歸方程。按“8”計算樣品中待測組分的含量。供試品溶液中待測組分的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。8.4平行試驗按以上步驟，對同一樣品進行平行試驗測定。8.5空白試驗除不加試樣外，均按上述步驟完成測定。9結(jié)果計算結(jié)果按式(1)計算：…………(1)式中：ω—樣品中16種香豆素類化合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，mg/kg；ρ—供試品溶液中16種香豆素類化合物質(zhì)量濃度，μg/mL；V—樣品定容體積，mL；m—樣品取樣量，g；D—稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。T/FSBMEAXXXX—XXXX計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。10精密度和準(zhǔn)確度定量下限濃度回收率為70%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于9.5%（n=6），中、高濃度回收率為85%～115%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8.0%（n=6）。11檢出限和定量限本方法中各組分的檢出限、定量下限和取樣量為0.2g時的檢出濃度、最低定量濃度見表516種香豆素類化合物的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度序號組分名稱檢出限定量下限檢出濃度最低定量濃度1香豆素0.180.660.027-羥基香豆素0.130.4343.03補骨酯素0.280.9328.093.047-甲基香豆素0.230.7723.077.05異補骨脂素0.270.927.090.068-甲氧基補骨脂素0.10.3333.07歐前胡素0.030.13.08異歐前胡素0.010.0333.396,7-二甲氧基香豆素0.010.0333.3新補骨酯異黃酮0.0070.0220.72.2補骨酯二氫黃酮0.0130.0454.54-甲基-7-羥基香豆素0.0060.020.62.04-甲基-7-乙氧香豆素0.180.60.72.25-甲氧基補骨脂素0.130.430.82.82,4,8-三甲基補骨脂素0.2