用不同內(nèi)生植物淀粉組合取代鼠尾藻粉飼養(yǎng)仿刺參幼參的生長(zhǎng)效果

用不同內(nèi)生植物淀粉組合取代鼠尾藻粉飼養(yǎng)仿刺參幼參的生長(zhǎng)效果

模擬子參apollo營(yíng)養(yǎng)元素和藥物的價(jià)值非常高。這是中國(guó)北方海水養(yǎng)殖的一個(gè)重要類(lèi)型。高效、廉價(jià)和安全的飼料是仿刺參養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)。目前常用的仿刺參飼料中多含有30%左右的鼠尾藻Sargassumthunbergii、馬尾藻Sargassumsp.或其它大型藻類(lèi)粉。鼠尾藻等大型藻類(lèi)的人工育苗尚處于研究階段,目前使用的鼠尾藻等均為野生的。近年來(lái),由于仿刺參養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,仿刺參的養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大,鼠尾藻等大型藻類(lèi)的用量不斷增加;同時(shí),由于近海水質(zhì)污染嚴(yán)重以及沿岸的非養(yǎng)殖應(yīng)用,鼠尾藻的生長(zhǎng)和生存空間逐年縮小,使鼠尾藻等大型藻類(lèi)的產(chǎn)量銳減,現(xiàn)已供不應(yīng)求,因而導(dǎo)致鼠尾藻粉等大型藻類(lèi)的價(jià)格不斷攀升,仿刺參的養(yǎng)殖成本也隨之增加。大型海藻是近海生態(tài)修復(fù)和“海洋牧場(chǎng)”建設(shè)的重要內(nèi)容和基礎(chǔ)環(huán)節(jié),即使將來(lái)鼠尾藻能進(jìn)行人工育苗和養(yǎng)殖成功,也不宜大面積采收,以免破壞近海天然牧場(chǎng)。因此,用來(lái)源廣、價(jià)格適宜的陸生植物淀粉替代鼠尾藻等大型藻類(lèi)粉,降低仿刺參飼料成本,具有一定的經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益和環(huán)保價(jià)值。目前,許多學(xué)者對(duì)仿刺參飼料中蛋白源和蛋白質(zhì)需要量,以及脂肪源和磷脂的需要量進(jìn)行了研究,但仿刺參對(duì)飼料中糖的種類(lèi)和數(shù)量的需求尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)中,作者研究了用不同陸生植物淀粉替代鼠尾藻等大型藻粉飼養(yǎng)仿刺參的效果,旨在豐富仿刺參的營(yíng)養(yǎng)學(xué)內(nèi)容,為研制高效、環(huán)保、安全的仿刺參配合飼料提供參考。1材料和方法1.1材料表面試驗(yàn)用仿刺參均來(lái)自大連海參養(yǎng)殖公司。1.2試驗(yàn)2:不同淀粉搭配的飼料試驗(yàn)1試驗(yàn)于2008年5月至7月在大連海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。試驗(yàn)用仿刺參平均體質(zhì)量為4.19g,用弗苯尼考液消毒,暫養(yǎng)兩周后,挑選315頭規(guī)格整齊、體色鮮亮、體質(zhì)健壯的個(gè)體隨機(jī)分成7組(F0為對(duì)照組,F1～F6為試驗(yàn)組),放入45cm×31cm×30cm的塑料水槽(盛水40～42L)中,每個(gè)水槽中放養(yǎng)15頭,每組設(shè)3個(gè)重復(fù),分別投喂不同淀粉搭配的7種飼料(表1)。試驗(yàn)2試驗(yàn)于2008年10月至12月在大連海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。水溫9～18℃,試驗(yàn)用仿刺參平均體質(zhì)量為4.22g,來(lái)源、暫養(yǎng)和飼養(yǎng)方法同試驗(yàn)1。挑選180頭分為4組(F0為對(duì)照組、F1～F3為試驗(yàn)組),每組設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)水槽中放養(yǎng)15頭,分別投喂用改進(jìn)的不同淀粉搭配的4種飼料(表2)。將淀粉在高壓鍋內(nèi)(120℃)糊化15min,然后烘干、研磨、粉碎。飼料中所有原料均經(jīng)100目篩絹過(guò)濾,除去上層,混合均勻,做成粉狀混合物。投喂前用80℃左右的熱水?dāng)嚢杈鶆?放至室溫下,待酵母發(fā)揮作用后成為松軟適宜的膏狀時(shí)投喂。投喂時(shí)將飼料均勻涂在波紋板(15cm×20cm)上,放入水槽底部,將充氣石壓在板下,涂抹飼料面朝上,以防飼料被沖散。每天下午6點(diǎn)投喂一次,投喂量約為幼參體質(zhì)量的2%～5%,稍過(guò)量投喂。飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的黃原膠,使飼料在水槽中不易分散。1.2.3腸道樣品的制備試驗(yàn)1采用經(jīng)沉淀、曝氣1d的自然海水,水溫為12.5～23.0℃。傍晚根據(jù)仿刺參的攝食情況過(guò)量投喂,24h持續(xù)充氣,隔天換水2/3。水中溶氧量>7.0mg/L,TNH3-N<0.1mg/L。試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)逐頭稱(chēng)重,每個(gè)周期結(jié)束時(shí)于15:00稱(chēng)量各飼料組每箱中仿刺參的總重。稱(chēng)重前一天停止投喂。各周期采用統(tǒng)一方法、統(tǒng)一稱(chēng)量工具,根據(jù)各組仿刺參各周期的始末體質(zhì)量計(jì)算其特殊增重率:SGR=ln末體重?ln初體重飼養(yǎng)天數(shù)×100%。試驗(yàn)2中,每20d中有4d投喂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的Cr2O3飼料,投喂添加Cr2O3的飼料后于第3天8:00和19:00各收集一次糞便和殘餌,以消除前期攝食未添加Cr2O3飼料的影響,連續(xù)收集4d。收集的糞便和殘餌冷凍干燥保存。Cr2O3的含量用濕式灰化定量法測(cè)定。干物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的計(jì)算公式為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率=(1?A′A×BB′)×100%,干物質(zhì)的消化率=(1?BB′)×100%,其中:A′和A分別為飼料和糞便中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量;B和B′分別為飼料和糞便中Cr2O3的含量。試驗(yàn)結(jié)束時(shí),從各試驗(yàn)組分別隨機(jī)取20頭仿刺參解剖,去掉腸及呼吸樹(shù),在70℃下烘至恒重,分別用凱氏定氮法、索氏抽提法(以乙醚為抽提液)和馬福爐灼燒法(500℃,4h)測(cè)定粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量。試驗(yàn)2結(jié)束后,從每組取14頭仿刺參,抽取體腔液,采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定血清中溶菌酶、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。溶菌酶含量(μg/mL)=(測(cè)定管透光度-空白管透光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管透光度-空白管透光度)×標(biāo)準(zhǔn)管濃度×樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)。酸性磷酸酶含量(U/g蛋白)=測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×標(biāo)準(zhǔn)管含酚的量(0.005mg)×100mL/0.05mL。SOD活力(U/mg蛋白)=(對(duì)照管吸光度-測(cè)定管吸光度)/對(duì)照管吸光度/50%×(反應(yīng)液總體積/取樣量)/組織中蛋白的含量。試驗(yàn)2結(jié)束后,從每個(gè)試驗(yàn)組取仿刺參15頭,置于冰盤(pán)內(nèi),解剖取出全部腸,用去離子水清洗腸內(nèi)含物后研磨離心,取上清液,將每個(gè)平行組中每5頭仿刺參的腸混合樣品設(shè)為一重復(fù),每個(gè)平行組設(shè)3個(gè)重復(fù)。將腸道樣品置于-70℃下保存?zhèn)溆?。分別用福林—酚試劑法、淀粉—碘顯色法和牛奶—?dú)溲趸c滴定法測(cè)定腸道中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。1.3相關(guān)方差分析所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0軟件進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)、單因素方差分析和LSD多重比較。以P<0.05表示差異顯著,以P<0.01為差異極顯著。2結(jié)果2.1飼料添加不同植物淀粉量對(duì)小麥粉飼料的影響試驗(yàn)1中,60d的飼養(yǎng)結(jié)果表明,所有試驗(yàn)組的仿刺參均無(wú)死亡和排臟,表明用陸生植物淀粉代替大部分鼠尾藻粉對(duì)仿刺參的成活和排臟無(wú)顯著影響。從表3可見(jiàn):試驗(yàn)結(jié)束時(shí),F4組仿刺參的特殊增重率最高(1.83%/d),比對(duì)照組(1.27%/d)高44.09%,極顯著地高于其它各組(P<0.01);各試驗(yàn)組仿刺參的特殊增重率由高至低依次為F4>F0>F2>F3>F5>F1>F6。這說(shuō)明用陸生植物淀粉可以代替大部分鼠尾藻粉,只添加馬鈴薯、紅薯、玉米和小麥粉4種植物淀粉的效果不及添加多種植物淀粉的效果好。根據(jù)試驗(yàn)1的結(jié)果,在試驗(yàn)2飼料中添加了南瓜等淀粉以全部取代鼠尾藻粉。經(jīng)60d的飼養(yǎng),結(jié)果表明(表4):仿刺參攝食以陸生植物淀粉全部代替鼠尾藻粉的飼料時(shí),特殊增重率均比對(duì)照飼料高。F2組、F1組和F3組仿刺參的特殊增重率分別比對(duì)照組(F0組)高123.81%、42.86%和14.29%,即在同樣配方下添加10%芋頭的促長(zhǎng)效果最好,添加過(guò)多反而效果不好。統(tǒng)計(jì)分析表明:F1組與對(duì)照組差異顯著(P<0.05);F3組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05);F2組與其它各組差異均極顯著(P<0.01),這表明F2組飼料不僅完全可以取代鼠尾藻,而且具有明顯的促生長(zhǎng)效果。不同試驗(yàn)階段水溫不同,仿刺參的生長(zhǎng)速度即SGR也不同。從表4可見(jiàn):前20d內(nèi),水溫為16～18℃,雖然仿刺參個(gè)體較小,但剛開(kāi)始攝食時(shí),各組間的SGR值已經(jīng)有了差異,但F1、F2組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),僅F3組極顯著低于對(duì)照組和F1、F2組(P<0.01);第20～40d內(nèi),水溫為12～15℃,F1組、F2組、F3組的SGR增長(zhǎng)明顯,均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01),F2組仿刺參的攝食尤其活躍,由第一個(gè)20d的平均0.20%/d升至1.04%/d,并極顯著高于其它各組(P<0.01);在最后20d內(nèi),水溫為9～13℃,各組仿刺參生長(zhǎng)緩慢,個(gè)別仿刺參甚至呈零增長(zhǎng)或負(fù)增長(zhǎng),其中對(duì)照組生長(zhǎng)最慢,而F2組的生長(zhǎng)仍是最快,并極顯著高于其它各組(P<0.01),其余組間差異均不顯著(P>0.05)。2.2驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果從表5可見(jiàn):仿刺參攝食添加陸生植物淀粉的飼料時(shí),其腸道內(nèi)蛋白酶活性均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01);而淀粉酶的活性卻極顯著高于對(duì)照組(P<0.01),其中F1組、F2組和F3組仿刺參腸淀粉酶的活性分別比對(duì)照組提高95.28%、133.93%和99.68%,這3組之間以F2組最高。值得注意的是,攝食添加陸生植物淀粉的飼料時(shí),生長(zhǎng)最快的F2組仿刺參腸脂肪酶的活性雖然比對(duì)照組有所提高,但與對(duì)照組差異并不顯著(P>0.05),而F1、F3組均較對(duì)照組有所下降,其中F1組較對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),而F3組較對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。這表明,添加多種陸生植物淀粉誘導(dǎo)了腸淀粉酶和脂肪酶活性的增加,促進(jìn)了仿刺參對(duì)飼料的消化和吸收,因而促進(jìn)了其生長(zhǎng)。2.3fps對(duì)血清中酸性磷酸酶活性的影響從表5可見(jiàn):仿刺參攝食添加陸生植物淀粉的飼料時(shí),血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性均較對(duì)照組有所提高,但F1組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),F2、F3組與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01);而溶菌酶的活性均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01);F1組仿刺參血清中酸性磷酸酶活性極顯著高于對(duì)照組(P<0.01),而F2組、F3組均極顯著地低于對(duì)照組(P<0.01)。這表明添加多種陸生植物淀粉誘導(dǎo)了SOD的活性。2.4不同飼料對(duì)復(fù)合核心的分解率的影響從表6可見(jiàn):仿刺參攝食添加陸生植物淀粉的飼料時(shí),對(duì)飼料蛋白質(zhì)和脂肪的表觀(guān)消化率均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。2.5不同飼料對(duì)復(fù)合體成分的影響從表7可見(jiàn):飼料中搭配不同淀粉對(duì)仿刺參體成分的影響均不顯著(P>0.05)。2.6兩組每公斤成本比按2008年5月大連市場(chǎng)價(jià)格,在試驗(yàn)1中,試驗(yàn)飼料(F1、F2、F3、F4、F5和F6)每公斤成本比對(duì)照組(F0)降低52.71%、42.29%、55.63%、37.92%、36.88%和39.17%;在試驗(yàn)2中,試驗(yàn)飼料(F1、F2和F3)每公斤成本比對(duì)照組(F0)降低39.79%、43.96%和44.79%(表8)。3不同水生植物淀粉對(duì)仿刺參免疫功能的影響有多種因素可以提高仿刺參消化酶的活性,但飼料組成是較重要的影響因素。在養(yǎng)殖過(guò)程中,通過(guò)改變飼料組成,可以在一定程度上改變仿刺參腸道內(nèi)消化酶的分泌,而不同食物成分的含量可以刺激消化道分泌相應(yīng)量的酶來(lái)消化食物。消化酶活性是反映仿刺參消化生理機(jī)能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。消化酶活性的高低決定著仿刺參對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力,因而對(duì)其生長(zhǎng)速度有決定性的影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明,攝食添加陸生植物淀粉組的仿刺參其脂肪酶活性很低,可能與飼料中的脂類(lèi)物質(zhì)含量很低有關(guān);而添加陸生植物淀粉組的仿刺參淀粉酶活性卻極顯著地高于對(duì)照組,以F2組最高。這可能是因?yàn)樵陉懮参锏矸鄣拈L(zhǎng)期誘導(dǎo)下,仿刺參體內(nèi)淀粉酶的活性和含量相應(yīng)提高,加快了腸道內(nèi)對(duì)淀粉的分解,進(jìn)而促進(jìn)對(duì)淀粉的消化和吸收,因而仿刺參的生長(zhǎng)速度加快。山藥、芋頭、紅薯、南瓜、木瓜等淀粉是很好的營(yíng)養(yǎng)食品,都具有極其重要的免疫功能。超氧化物歧化酶作為重要的抗氧化酶,在清除超氧陰離子自由基、防止生物分子損傷方面有十分重要的作用。溶菌酶作為機(jī)體非特異性免疫因子之一,不僅參與一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收、運(yùn)輸,而且還是生物體內(nèi)重要的解毒體系。酸性磷酸酶除了參與磷酸酯的代謝外,還參與代謝調(diào)節(jié)、能量轉(zhuǎn)換及信號(hào)傳導(dǎo)等重要生命活動(dòng)。從試驗(yàn)2對(duì)免疫相關(guān)酶活性的研究結(jié)果顯示,仿刺參攝食添加陸生植物淀粉的飼料時(shí),血清中超氧化物歧化酶的活性均極顯著高于對(duì)照組,F2組超氧化物歧化酶的活性最高,表明添加多種陸生植物淀粉誘導(dǎo)了血清中超氧化物歧化酶的活性。各試驗(yàn)組仿刺參血清中酸性磷酸酶活性和溶菌酶活性呈現(xiàn)無(wú)規(guī)律的變化,F1組血清中酸性磷酸酶活性極顯著高于對(duì)照組,F2、F3組酸性磷酸酶活性極顯著低于對(duì)照組,F1、F2、F3組溶菌酶活性極顯著低于對(duì)照組。發(fā)生上述現(xiàn)象,可能是因?yàn)楦髟囼?yàn)的飼料中含有多種不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),這是多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)影響的效果。目前尚不知對(duì)仿刺參幼參免疫功能起作用的有效成分,有關(guān)誘導(dǎo)血清中超氧化物歧化酶、酸性磷酸酶、溶菌酶的活性物質(zhì)及其適宜添加量還有待進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)結(jié)果表明,試驗(yàn)2中,各試驗(yàn)組仿刺參對(duì)粗蛋白和粗脂肪的表觀(guān)消化率極顯著高于對(duì)照組,以F2組最高,這表明添加不同陸生植物淀粉的飼料能顯著提高仿刺參幼參對(duì)粗蛋白和粗脂肪的表觀(guān)消化率,從而促進(jìn)了仿刺參幼參的生長(zhǎng)。而不同比例淀粉搭配的飼料對(duì)仿刺參幼參體成分沒(méi)有顯著性影響。鼠尾藻因其營(yíng)養(yǎng)豐富一直被作為海參養(yǎng)殖的優(yōu)質(zhì)餌料,通過(guò)對(duì)鼠尾藻和陸生植物淀粉的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn),多種陸生植物淀粉組合中所含的營(yíng)養(yǎng)成分比單一的鼠尾藻所含營(yíng)養(yǎng)成分更加全面。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,添加陸生植物淀粉的F2組刺參的特殊生長(zhǎng)率極顯著高于添加鼠尾藻的對(duì)照組,這說(shuō)明不同的陸生植物淀粉組合其營(yíng)養(yǎng)成分更能滿(mǎn)足仿刺參的生長(zhǎng)需要,可以完全取