醫(yī)院消毒滅菌

醫(yī)院消毒滅菌效果及環(huán)境衛(wèi)生學檢測

安徽醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院醫(yī)務科院感辦

張世梅

醫(yī)院消毒、滅菌、無菌技術是預防醫(yī)院內感染的重要措施之一，消毒滅菌效果的監(jiān)測是評價其消毒滅菌設備運轉是否正常，消毒藥劑是否有效、消毒滅菌方法是否合理、消毒滅菌效果是否達標的唯一手段。

規(guī)范性文件、衛(wèi)生標準衛(wèi)生部《消毒技術規(guī)范》衛(wèi)生部《醫(yī)院感染管理辦法》衛(wèi)生部《內鏡清潔消毒技術操作規(guī)范》GB15982-1995《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準》衛(wèi)生部《醫(yī)院消毒供應室驗收標準》

規(guī)范性文件、衛(wèi)生標準GB15981-1995《消毒與滅菌效果的評價方法與標準》衛(wèi)生部《醫(yī)務人員手衛(wèi)生規(guī)范》2009-04-01發(fā)布2009-12-01實施衛(wèi)生部《醫(yī)院感染監(jiān)測規(guī)范》2009-04-01發(fā)布2009-12-01實施

規(guī)范性文件、衛(wèi)生標準衛(wèi)生部《醫(yī)院感染監(jiān)測規(guī)范》2009-04-01發(fā)布2009-12-01實施衛(wèi)生部《醫(yī)院隔離技術規(guī)范》2009-04-01發(fā)布2009-12-01實施衛(wèi)生部《醫(yī)院隔離技術規(guī)范》2009-04-01發(fā)布2009-12-01實施

規(guī)范性文件、衛(wèi)生標準衛(wèi)生部《醫(yī)療機構消毒技術規(guī)范》2012-04-05發(fā)布2012-08-01實施衛(wèi)生部《醫(yī)院空氣凈化管理規(guī)范》2012-04-05發(fā)布2012-08-01實施……….

檢測項目（一）環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測

1、空氣消毒效果監(jiān)測

2、醫(yī)護人員手衛(wèi)生效果監(jiān)測

3、物體表面消毒效果監(jiān)測

檢測項目（二）消毒滅菌效果監(jiān)測

1、使用中無菌物品監(jiān)測

2、使用中消毒劑及滅菌劑染菌量監(jiān)測

3、壓力蒸汽滅菌監(jiān)測

4、干熱滅菌監(jiān)測

檢測項目

5、低溫滅菌監(jiān)測

6、紫外線消毒燈管輻照強度測定

7、內鏡消毒滅菌效果監(jiān)測

8、血液透析系統(tǒng)監(jiān)測

9、口腔診療器械消毒與滅菌效果監(jiān)測

檢測單的填寫

采樣地點（醫(yī)院、科室）樣品名稱檢驗目的送檢時間送檢者檢測單的填寫

空氣消毒效果監(jiān)測

監(jiān)測科室：手術室、血液病房、ICU、感染疾病科、導管室、消毒供應室、輸血科、微生物實驗室、產房、母嬰同室、新生兒病房、內鏡中心、血液透析中心、口腔科、治療室、換藥室等部門的空氣凈化與消毒質量進行監(jiān)測?？諝庀拘ЧO(jiān)測1、監(jiān)測頻次：每季度進行；潔凈手術室、潔凈病房每月進行。新建與改建驗收時以及更換高效過濾器后應進行監(jiān)測；與醫(yī)院感染暴發(fā)空氣污染有關時隨時進行檢測，并進行相應致病性微生物的檢測。2、采樣：（1）采樣時間：在清潔消毒處理后，操作前。空氣消毒效果監(jiān)測（2）采樣方法：（平板暴露法）：暴露前先檢查平板是否污染，是否有氣泡及霉點。將普通營養(yǎng)瓊脂平板（直徑為9cm）放在室內各采樣點處（由內向外），采樣高度為距離地面1.5m，距墻1.0m，采樣時將平板蓋打開（由內向外），斜扣放于平板旁，暴露5分鐘，（手術室、產房、血液病房、ICU、導管室、新生兒病房暴露15分鐘）蓋好立即送檢。在放置、收?。ㄓ赏庀騼龋┢矫髸r，手不可在暴露平皿的正上方移動?？諝庀拘ЧO(jiān)測（3）布點方法：室內面積≤30m2，設內、中、外對角線上3點，內、外點布點部位距墻1m；室內面積＞30m2，設4角及中央共5點，4角的布點部位距墻壁1m處?？諝庀拘ЧO(jiān)測

圖1圖2室內面積≤30m2

布點圖室內面積＞30m2布點圖空氣消毒效果監(jiān)測3、注意事項（1）采樣前，關好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10分鐘進行采樣。（2）平板擺樣如取一條對角線，避免離門近的一條。（3）工作人員不要靠近自動門，以免影響監(jiān)測效果?？諝庀拘ЧO(jiān)測4、結果計算及判定（1）結果計算①平板暴露法結果計算公式：空氣菌落總數(shù)（cfu／m3）=50000N／（A×T）式中A為平均面積（cm2）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落總數(shù)（cfu）。

空氣消毒效果監(jiān)測

②浮游菌法計算公式：空氣菌落總數(shù)（cfu／m3）﹦采樣器各平皿菌落數(shù)之和（CFU）／采樣速率L／min×采樣時間（min）×1000空氣消毒效果監(jiān)測（2）結果判斷：①潔凈手術室、潔凈病房空氣中的細菌菌落總數(shù)≤10cfu／m3（按老的辦法采樣計算的），未檢出金黃色葡萄球菌，溶血性鏈球菌。空氣消毒效果監(jiān)測

②手術室、產房、血液病房、ICU、導管室、新生兒病房等空氣中的細菌菌落總數(shù)≤4cfu／min(15min.直徑9cm平皿)，未檢出金黃色葡萄球菌，溶血性鏈球菌?？諝庀拘ЧO(jiān)測

③感染疾病科、消毒供應室、輸血科、化驗室、婦產科檢查室、人流室、母嬰同室、內鏡中心、血液透析中心、口腔科、治療室、換藥室、急診室、注射室、各類普通病房空氣中的細菌菌落總數(shù)≤4cfu／min(5min.直徑9cm平皿)，未檢出金黃色葡萄球菌，溶血性鏈球菌。醫(yī)護人員手衛(wèi)生效果監(jiān)測

監(jiān)測高危重點科室：潔凈手術室、潔凈病房、非潔凈手術室、血液病房、ICU、感染疾病科、導管室、消毒供應室、輸血科、微生物實驗室、產房、母嬰同室、新生兒病房、內鏡中心、血液透析中心、口腔科、治療室、換藥室等工作的醫(yī)務人員手進行消毒效果監(jiān)測；當懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)與醫(yī)務人員手衛(wèi)生有關時，應及時進行檢測，并進行相應致病性微生物的檢測。醫(yī)護人員手衛(wèi)生效果監(jiān)測1、檢測頻率：（1）每季度進行；潔凈手術室、潔凈病房每月進行。有行業(yè)標準規(guī)定按標準執(zhí)行：如血液透析中心。（2）有醫(yī)院感染流行，懷疑與手衛(wèi)生或醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學因素有關時應及時進行監(jiān)測。醫(yī)護人員手衛(wèi)生效果監(jiān)測

2、采樣時間在手衛(wèi)生后，接觸患者、進行診活動前采樣。醫(yī)護人員手衛(wèi)生效果監(jiān)測

3、采樣方法：被檢人五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指曲面從指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，及時送檢。醫(yī)護人員衛(wèi)生效果監(jiān)測

4、檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩20秒或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，平皿內加入已溶化的45oC-48oC的營養(yǎng)瓊脂15ml-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36oC±1oC恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。醫(yī)護人員手衛(wèi)生效果監(jiān)測5、結果計算及判斷（1）細菌菌落數(shù)計算方法：細菌菌落總數(shù)（cfu／cm2）＝平皿上菌落數(shù)×采樣稀釋倍數(shù)／采樣面積（cm2）采樣液的稀釋倍數(shù)為10，采樣面積為30×2cm2。醫(yī)護人員手衛(wèi)生效監(jiān)測（2）判斷標準：一般醫(yī)護人員手不得檢出大腸桿菌、金黃色葡萄球菌；Ⅰ類、Ⅱ類壞境工作人員手不得檢出銅綠假單胞菌；母嬰同室、新生兒室及兒科病房工作人員手不得檢出沙門氏菌、溶血性鏈球菌。

醫(yī)護人員手衛(wèi)生效監(jiān)測衛(wèi)生手消毒細菌菌落總數(shù)≤10cfu／cm2，不得檢出致病菌。外科手消毒細菌菌落總數(shù)≤5cfu／cm2，不得檢出致病菌。醫(yī)護員手衛(wèi)生效果監(jiān)測Ⅰ類環(huán)境：層流潔凈手術室和層流潔凈病房。Ⅱ類壞境：普通手術室、產房、特護嬰兒室、普通保護性隔離病房、ICU、供應室無菌區(qū)。醫(yī)護員手衛(wèi)生效果監(jiān)測Ⅲ類壞境：兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、搶救室、化驗室、各類普通病房。醫(yī)護人員手衛(wèi)生效果監(jiān)測6、注意事項（1）若消毒因子為化學消毒劑，采樣液中應加入相應中和劑。（2）洗手后不要接觸未消毒的物品。（3）用無菌巾擦干或控干手上的水分。

物體表面消毒效果監(jiān)測

1、監(jiān)測頻次（1）每季度進行；潔凈手術室、潔凈病房每月進行。（2）懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)流行有關時應及時進行監(jiān)測。2、采樣時間：在消毒處理后或懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關時進行采樣。

物體表面消毒效果監(jiān)測

3、采樣方法：用5cm×5cm的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，連續(xù)采樣4個，采樣面積≥100cm2，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支在規(guī)格板內橫豎往返均勻涂擦5次，并隨之轉動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。

物體表面消毒效果監(jiān)測

4、注意事項：（1）被采樣本面積＜100cm2取全部表面；被采樣本面積≥100cm2，取100cm2。（2）不規(guī)則物體表面的采樣，盡量準確估算實際面積。（3）小型物體表面的結果計算，用cfu／件表示。

物體表面消毒效果監(jiān)測

5、檢測方法：充分振蕩采樣試管后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.0ml接種平皿，將冷至40oC-45oC的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15ml-20ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36oC±1oC恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)流行有關時應及時，進行目標微生物的檢測。

物體表面消毒效果監(jiān)測

6、結果計算及判斷（1）物體表面細菌菌落數(shù)計算方法：物體表面細菌菌落總數(shù)（cfu／cm2）＝平均每皿菌落數(shù)×洗脫液稀釋倍數(shù)／采樣面積（cm2）物體表面消毒效果監(jiān)測

(2)結果判斷：Ⅰ類環(huán)境、Ⅱ類環(huán)境物體表面細菌菌落總數(shù)≤5cfu／cm2；Ⅲ類環(huán)境物體表面細菌菌落總數(shù)≤10cfu／cm2，Ⅰ類環(huán)境不得檢出致病菌。使用中的無菌物品監(jiān)測1、采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內采樣。2、監(jiān)測頻次：每月進行。使用中的無菌物品監(jiān)測

3、采樣方法：用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復涂擦鉗、鑷子等無菌器械，將棉拭子投入無菌洗脫液中，將采樣液混勻。（環(huán)境要求在潔凈度為100級單向流空氣區(qū)域進行采樣，并嚴格無菌操作，避免微生物污染）。使用中的無菌物品監(jiān)測4、檢測方法：相對較復雜，正規(guī)要做細菌和真菌兩種培養(yǎng)。常規(guī)只做細菌培養(yǎng)。5、注意事項（1）送檢時間不得超過6h，若樣本保存于0oC-4oC，則不得超過24h。使用中的無菌物品監(jiān)測

（2）無菌物品采樣，應嚴格遵守無菌操作，避免微生物污染。

6、結果判斷：未檢出任何微生物為合格。

使用中的消毒劑、滅菌劑監(jiān)測

1、監(jiān)測時間（1）化學檢測：根據(jù)消毒劑、滅菌劑的性能設定監(jiān)測時間，如含氯消毒劑每日監(jiān)測；使用中的戊二醛常規(guī)監(jiān)測每周不少于一次（使用前），內鏡室消毒或滅菌的戊二醛必須每日或使用前監(jiān)測。（2）生物監(jiān)測：消毒劑每季度一次，滅菌劑每月一次。使用中的消毒劑、滅菌劑監(jiān)測2、使用中消毒液染菌量測定（1）檢測物品：酒精、碘酒、碘伏、戊二醛、次氯酸、外科手消毒劑等。使用中的消毒劑、滅菌劑監(jiān)測（2）采樣方法

(1)用無菌吸管按無菌操作方法吸取消毒液1.0ml被檢消毒液，加入9.0ml含有相應中和劑中混勻。醇類與酚類消毒劑用普通營養(yǎng)肉湯中和，含氯消毒劑、含碘消毒劑和過氧化物消毒劑用含0.1%硫代硫酸鈉中和劑，使用中的消毒劑、滅菌劑監(jiān)測

洗必泰、季銨鹽類消毒劑用含0.3%吐溫80和0.3%卵凝脂中和劑，醛類消毒劑用含0.3%甘氨酸中和劑，含有表面活性劑的各種復方消毒劑可在中和劑中加入吐溫80至3%；也可使用該消毒劑消毒效果檢測的中和劑鑒定試驗確定的中和劑。使用中的消毒劑、滅菌劑監(jiān)測

(2)用無菌吸管吸取一定稀釋比例的中和混合液1.0ml接種平皿，將冷至40oC-50oC的溶化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每皿傾注15ml-20ml，36oC±1oC恒溫箱培養(yǎng)72h，計數(shù)菌落數(shù)；懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關時，進行目標微生物的檢測。使用中的消毒劑、滅菌劑監(jiān)測（3）結果計算及判斷①結果計算：消毒液染菌量（cfu／ml）=平均每皿菌落數(shù)×10×稀釋倍數(shù)②結果判斷：使用中滅菌用消毒液無菌生長。使用中皮膚黏膜消毒液染菌量≤10cfu／ml；其他使用中消毒液染菌量≤100cfu／ml。

壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測

1、物理監(jiān)測法：每次滅菌連續(xù)監(jiān)測每鍋并詳細記錄滅菌的壓力、強度（波動范圍在+3oC內）、時間等滅菌參數(shù)。

2、化學監(jiān)測法：每包進行外用化學指示物監(jiān)測（包外、包內），觀察顏色變化，判斷結果。高度危險性物品包內應放置包內化學指示物，置于最難滅菌部位。

壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測

3、生物監(jiān)測法：每周進行，對新滅菌器使用前或擬采用新包裝容器、擺放方式、排氣方式及特殊滅菌工藝，都必須進行生物監(jiān)測。采用嗜熱脂肪芽胞菌片制成的標準生物測試包（23cm×23cm×15cm）。

4、B-D測試：預真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器，每日進行一次B-D試驗。

5、滅菌器新安裝、移動和大修后監(jiān)測：應進行物理、化學、生物監(jiān)測。物理、化學監(jiān)測通過后，生物監(jiān)測應空載連續(xù)監(jiān)測三次，合格后滅菌器方可使用。預真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌器應進行B-D試驗并重復三次，連續(xù)監(jiān)測合格后，滅菌器方可使用。壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測

干熱滅菌監(jiān)測

1、物理監(jiān)測法：每滅菌批次進行監(jiān)測。將多點溫度檢測儀的多個探頭分別放于滅菌器各層內、中、外各點，關好柜門，引出導線，由記錄儀中觀察溫度上升與持續(xù)時間。溫度在設定時間內均達到預置溫度，則物理檢測合格。

干熱滅菌監(jiān)測

2、化學監(jiān)測法：每一滅菌包外使用化學指示物監(jiān)測（包外、包內），并置于最難滅菌部位，觀察顏色變化，判斷結果。

3、生物監(jiān)測法：每周監(jiān)測一次。采用枯草菌黑色變種芽孢菌片制成的標準生物測試包。

4、新安裝、移位和大修后：應進行物理、化學、生物監(jiān)測法監(jiān)測（重復三次），監(jiān)測合格后無菌器方可使用。

低溫滅菌監(jiān)測

1、環(huán)氧乙烷氣體滅菌效果監(jiān)測（1）物理監(jiān)測法：每次滅菌應連續(xù)監(jiān)測并記錄滅菌時的溫度、壓力、時間等滅菌參數(shù)，符合要求。

（2）化學監(jiān)測法：每包進行外用化學指示物監(jiān)測（包外、包內），并置于最難滅菌部位，觀察顏色變化，判斷結果。（3）生物監(jiān)測法：每滅菌批次應生物監(jiān)測。采用枯草菌黑色變種芽孢菌片制成的標準生物測試包。1、環(huán)氧乙烷氣體滅菌效果監(jiān)測

低溫滅菌監(jiān)測

2、過氧化氫等離子滅菌效果監(jiān)測（1）物理監(jiān)測法：每次滅菌應連續(xù)監(jiān)測并記錄每個滅菌周期的臨界參數(shù)如艙內壓、溫度、過氧化氫的濃度，電源輸入和滅菌時間等滅菌參數(shù)，符合要求。2、過氧化氫等離子滅菌效果監(jiān)測

（2）化學監(jiān)測法：每包進行外用化學指示物監(jiān)測（包外、包內），并置于最難滅菌部位，觀察顏色變化，判斷結果。（3）生物監(jiān)測法：應每天至少進行一次滅菌循環(huán)的生物監(jiān)測。

3、新安裝、移位和大修后，滅菌失敗，包裝材料或滅菌物品改變：應進行物理、化學、生物監(jiān)測法監(jiān)測（重復三次），監(jiān)測合格后無菌器方可使用。低溫滅菌監(jiān)測

紫外線消毒燈管監(jiān)測

1、檢測項目（1）日常監(jiān)測：包括燈管應用時間，累計照射時間、燈管清潔和使用人簽名。（2）強度檢測：每半年一次。

紫外線消毒燈管監(jiān)測

2、紫外線燈輻照度值檢測方法（1）紫外線強度照射指示卡檢測法：開啟紫外線燈5min后，將指示卡置紫外燈下垂直距離1m處，有圖案一面朝上，照射1min（紫外線照射后，圖案正中光敏色塊由乳白色變成不同程度的淡紫色），觀察指示卡色塊的顏色，將其與標準色塊比較，讀出照射強度。

紫外線消毒燈管監(jiān)測

（2）紫外線輻照計測定法：將紫外線輻照計探頭置于被檢紫外線燈垂直距離1m的中央處，開啟紫外線燈5min后，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈的輻照度值。

紫外線消毒燈管監(jiān)測

3、注意事項（1）紫外線燈管開啟后穩(wěn)定5min后，讀測試數(shù)值。（2）紫外線輻照計必須在計量部門檢定的有效期內使用（要求一年校準一次）。紫外線消毒燈管監(jiān)測

（3）輻照計探頭放于燈管中央部位，儀器探頭與拉桿保持垂直。（4）測定電壓220V±5V，溫度20-25oC，相對濕度＜60%，紫外線燈管每周無水酒精保潔一次。

紫外線消毒燈管監(jiān)測

（5）紫外線指示卡照射強度以當時判斷為準，隨保存時間延長色塊顏色會變淡。指示卡應獲得衛(wèi)生許可批件，并在有效期內使用。（6）測試人員勿直視紫外線燈管，應穿防護衣，帶白紗手套，防護眼鏡。

紫外線消毒燈管監(jiān)測

4、結果判斷：30W普通石英新燈管輻照度強不低于90uW／cm2為合格；使用中舊燈管輻照強度不低于70uW／cm2為合格；30W高強度紫外線新燈管輻照強度≥180uW／cm2為合格。

內鏡消毒滅菌效果監(jiān)測

1、監(jiān)測時間：消毒后內鏡每季度進行；滅菌后內鏡每月進行。2、采樣（1）采樣時間：在消毒滅菌后，使用前進行采樣。內鏡消毒滅菌效果監(jiān)測

（2）采樣方法：監(jiān)測采樣部位為內鏡的內腔面。用20ml無菌注射器抽取10ml含相應中和劑的緩沖劑，從待檢內鏡活檢口注入，用15ml無菌試管從活檢出口收集，及時送檢，2h內檢測。

內鏡消毒滅菌效果監(jiān)測

3、結果判定及報告（1）消毒后內鏡：細菌總數(shù)≤20cfu／件，并未檢出致病菌為合格（致病菌：金黃色葡萄球菌、沙門氏菌，并不得檢出大腸桿菌）。（2）滅菌后內經：未檢出任何微生物為合格。

血液透析系統(tǒng)監(jiān)測

1、透析用水細菌培養(yǎng)應每月一次，要求細菌數(shù)＜200cfu／ml，采樣部位在水進入血液透析機的位置收集標