血瘀證動(dòng)物模型制作研究進(jìn)展

血瘀證動(dòng)物模型制作研究進(jìn)展

中醫(yī)證候動(dòng)物模型發(fā)展迅速，發(fā)表了血瘀證候模型的制作現(xiàn)狀和問題。1郁狂、有氣目前,血瘀證動(dòng)物模型研制方法大約有二種:一是根據(jù)血瘀的病因病機(jī),如寒邪、外傷、郁怒、氣虛等建立的動(dòng)物模型。如《靈樞·賊風(fēng)》“若有所墮墜,惡血在內(nèi)而不去……則氣血不去……則氣凝結(jié)”;《素問·調(diào)經(jīng)論》“寒邪獨(dú)留則血凝,凝則脈不通”。二是根據(jù)血瘀證研究發(fā)現(xiàn)的病理生理異常,如血流變學(xué)異常,血液凝固性增高等制作的動(dòng)物模型。1.1基于血液抑郁癥的病因病機(jī)制的動(dòng)物模型1.1.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析將家兔固定在兔臺(tái)上,用杠桿壓其后腿內(nèi)側(cè)肌肉,加壓7.5kg,持續(xù)1.5h。實(shí)驗(yàn)結(jié)果,壓傷局部腫痛,血流減少。X線造影顯示動(dòng)脈萎縮狹窄,靜脈擴(kuò)張,病理檢查顯示局部肌肉水腫、缺血、壞死、血流變學(xué)指標(biāo)明顯異常,全身凝血機(jī)制失調(diào)處于高黏聚狀態(tài),病理組織學(xué)檢查及電鏡檢查均提示臟器形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)發(fā)生不同程度變化。1.1.2熱毒充盛的臨床表現(xiàn)在家兔耳靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:模型出現(xiàn)高熱,眼結(jié)膜和耳部血管明顯擴(kuò)張充血,心跳加快,呼吸急促等熱毒充盛的表現(xiàn)。病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)諸多瘀血、出血和廣泛血栓存在,細(xì)胞變性壞死。另外,還有血流變學(xué)的異常和凝血功能亢進(jìn)。1.1.3電針多次刺激家兔根據(jù)中醫(yī)七情過度導(dǎo)致氣郁、氣滯,進(jìn)而可導(dǎo)致血瘀的理論,采用電針刺激家兔引起恐、驚、怒,采用中藥療法,進(jìn)行血流變學(xué)、微循環(huán)、SOD、5-HT生化測(cè)定及各臟器電鏡光鏡檢查得出,電針連續(xù)刺激家兔,可造成氣滯血瘀模型。1.1.4小鼠血液凝塊手術(shù)中醫(yī)認(rèn)為,血液不循經(jīng)脈,溢于脈外則為瘀血,采用雌性家兔10ml/kg體重抽取心臟血液,放置20min后,取20ml經(jīng)無菌手術(shù)將血凝塊置于結(jié)腸下,12天后處死。用排液法測(cè)定殘留血凝塊體積,將血凝塊切片鏡檢,并觀察血凝塊周圍巨噬細(xì)胞聚集情況。1.1.5膽固醇及柴油劑量g/只/d處理將家兔適應(yīng)性喂養(yǎng)1個(gè)月后,統(tǒng)一喂飼膽固醇(劑量1g/只/d)豬油(劑量3g/只/d)每周6次。第8周后膽固醇及豬油劑量減半,第9周恢復(fù)原劑量,持續(xù)到第13周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見造模家兔出現(xiàn)少食稀便、皮毛欠光澤、少動(dòng)及紅細(xì)胞變形能力下降。1.1.6冷凍1.5h的模型測(cè)定在家兔兩側(cè)后腿足的周圍放置冰袋(-15℃~-25℃),冷凍1.5h后模型出現(xiàn)微循環(huán)障礙、肢體血流下降、血流變學(xué)改變,凝血指標(biāo)發(fā)生變化,SOD含量降低,電鏡檢查發(fā)現(xiàn):重要臟器和受凍局部壞死、水腫、瘀血、出血等。1.1.7造模大鼠血小板計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)將大鼠置于低溫冰箱中,在-15℃環(huán)境中持續(xù)受凍4h,實(shí)驗(yàn)結(jié)果:造模大鼠畏寒喜暖、縮少動(dòng)、反應(yīng)遲鈍、皮毛蓬松無光澤、便爛唇周發(fā)黑、爪尾部紫暗,耳廓循環(huán)嚴(yán)重障礙,血小板數(shù)量明顯下降。1.1.8虛、實(shí)、瘀中醫(yī)認(rèn)為:“氣為血之帥,血為氣之母?！毖摽蓪?dǎo)致氣虛,氣虛可導(dǎo)致血瘀。采用放血方法制作家兔血瘀模型,通過血流變學(xué)、微循環(huán)等病理形態(tài)觀察證明符合血瘀或脾虛的特點(diǎn)。1.1.9不同年齡大鼠血流變學(xué)的變化分別選取3月齡青年大鼠,18月齡中年大鼠,27~30月齡老年大鼠。觀察隨年齡增長(zhǎng),其血流變學(xué)的變化,老年大鼠在電刺激頸項(xiàng)動(dòng)脈后,內(nèi)皮受損易形成體內(nèi)或體外血栓。紅細(xì)胞變形能力下降,且壓積增高,故老年大鼠可作為病性天然血瘀證模型。1.2家兔體內(nèi)制定的“腦?！蹦Ｐ驮诨钛鲅芯窟^程中,發(fā)現(xiàn)某些病理狀態(tài),具有典型血瘀證的癥狀和體征,如患者有血流變學(xué)異常,血液凝固性增高等病理生理異常,常見的有:1.2.1通過結(jié)扎動(dòng)脈(冠狀動(dòng)脈或腦動(dòng)脈)造成心梗或腦梗通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈或腦動(dòng)脈造成心肌梗塞或腦梗塞作為局部血液循環(huán)的血瘀模型。此方法為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中急性心梗或腦梗模型。由于氣滯血瘀,血脈瘀滯,所造成心腦缺血模型也能體現(xiàn)出血瘀證的特點(diǎn)。1.2.2用高分子右旋糖苷制作的模型在家兔耳緣注入10%高分子右旋糖苷,每周靜注兩次,歷時(shí)10周。其結(jié)果:眼球結(jié)膜微循環(huán)變化,微小靜脈普遍擴(kuò)張,血流速度變快,部分血流停止,微血管周圍有滲出,血黏度升高,紅細(xì)胞電泳時(shí)間延長(zhǎng)等顯著全身微循環(huán)障礙。1.2.3耳緣注入去甲腎上腺素或腎上腺素造成局部循環(huán)障礙在家兔耳注入腎上腺素或去甲腎小腺素,造模后發(fā)現(xiàn)全血黏度、血漿黏度、全血還原黏度均升高,紅細(xì)胞壓積明顯降低,電泳時(shí)間明顯延長(zhǎng),血漿TXB2含量明顯升高,PGl2含量明顯降低。1.2.4放射損傷動(dòng)物模型用Co-60-r射線造模動(dòng)物經(jīng)過r射線或X射線照射后,可出現(xiàn)符合“血瘀證”變化的血流變學(xué)和微循環(huán)障礙。以射線照射家兔后觀察眼球結(jié)膜循環(huán),可觀察毛細(xì)血管滲透變化。經(jīng)活血化瘀治療可緩解炎癥反應(yīng)。2中醫(yī)證候動(dòng)物模型的概念一般而言,成功的模型建立必須滿足三個(gè)條件:①模型與原型之間有相似關(guān)系。②模型能夠代替原型。③對(duì)模型的研究,應(yīng)該能夠得出原型的信息。就中醫(yī)證候動(dòng)物模型而言,所謂原型就是指中醫(yī)證候以及具有中醫(yī)特色病證結(jié)合的病理反應(yīng)。最為重要的是模型要符合中醫(yī)理論。因此,判斷中醫(yī)證候動(dòng)物模型成功與否的依據(jù)或標(biāo)準(zhǔn)就是中醫(yī)固有的理論及現(xiàn)代研究成熟的新理論。中醫(yī)傳統(tǒng)辨證的依據(jù)是癥狀、體征、脈象和舌象,而現(xiàn)代中醫(yī)研究成果又使得中醫(yī)證候的診斷標(biāo)準(zhǔn)包涵了一些實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和特殊檢查結(jié)果。因此,成功的中醫(yī)證候模型應(yīng)當(dāng)在癥狀、體征(包括脈象、舌象等),實(shí)驗(yàn)室及特殊檢查以及治療反應(yīng)等五方面。目前中醫(yī)動(dòng)物模型主要存在以下問題:2.1效證多為慢性過程所謂中醫(yī)特色應(yīng)著重體現(xiàn)在造模時(shí)所采用的病因和方法以及模型動(dòng)物所表現(xiàn)出來的癥狀體征是否符合中醫(yī)理論的本質(zhì)內(nèi)涵,如用“頭尾法”采取肝郁血瘀的模型,時(shí)間僅為2天,中醫(yī)理論認(rèn)為“怒傷肝,久則郁”,肝郁則氣滯,氣滯則血瘀,因而瘀血是一個(gè)長(zhǎng)期的過程。再如,目前制作血瘀證的模型多以急性結(jié)扎為主以及靜脈注射腎上腺素、去甲腎上腺素、高分子右旋糖苷等方法。血瘀證是一個(gè)慢性過程,而兩天時(shí)間造的模是否能代表血瘀證值得懷疑。目前血瘀證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型大部分是血瘀證某些病理表現(xiàn)如微循環(huán)障礙、高黏血癥、結(jié)締組織增生等復(fù)制,這些帶有相當(dāng)大的人為性。按中醫(yī)傳統(tǒng)的血瘀證有四大主癥,即痛、腫塊、瘀斑和出血,判斷是否為血瘀四大主癥必居其一。如果不對(duì)模型動(dòng)物細(xì)致觀察其外在表現(xiàn),而僅以實(shí)驗(yàn)室指標(biāo),如血黏度、血流變學(xué)為依據(jù),其說服力是不夠的,因而中醫(yī)特色不強(qiáng)。2.2原因一:單一因素造模難反映血藥濃度計(jì)檢測(cè)結(jié)果目前血瘀證動(dòng)物模型多是單一因素造模,導(dǎo)致血瘀證的原因很多,如外邪、內(nèi)傷、出血等原因,而且是各種因素長(zhǎng)期相互作用的結(jié)果,故有“久病必瘀”之說,因此單一因素造模難以反映血瘀證的病因病機(jī)和病理、生理異常。因此應(yīng)采用多種因素造模,才能較全面反映血瘀證的本質(zhì),從而可制出既反映中醫(yī)證候的基本特點(diǎn),又與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的某些病癥的基本病理過程相一致的動(dòng)物模型。2.3病證結(jié)合,中證結(jié)合以活物模型為主應(yīng)關(guān)注臨床概念的理論依據(jù)和臨床概念的理論依據(jù),并注意病證結(jié)合和病證結(jié)合的模型的分由于證是中醫(yī)學(xué)認(rèn)知疾病特有的概念,大多數(shù)血瘀證的動(dòng)物模型是根據(jù)中醫(yī)血瘀證的病因病機(jī)或西醫(yī)學(xué)的血瘀病理生理改變而建立的,缺乏病證結(jié)合的模型,而病證結(jié)合是中西醫(yī)結(jié)合的重要環(huán)節(jié),既辨證又辨病,取中西醫(yī)所長(zhǎng),所以病證結(jié)合中西醫(yī)結(jié)合動(dòng)物模型將對(duì)臨床有一定指導(dǎo)意義,同時(shí)對(duì)揭示中醫(yī)證的本質(zhì),和加深西醫(yī)學(xué)特定疾病的認(rèn)識(shí)有一定價(jià)值。比較理想的病證結(jié)合的模型尚少見,一方面由于血瘀證兼挾證較多,如血虛血瘀、氣虛血瘀等。另一方面一種疾病常在疾病不同階段出現(xiàn)證型變化或疾病本身具有多種證的分類而難以找到比較明確而穩(wěn)定的病證結(jié)合的血瘀模型。2.4對(duì)模型的確定因素不夠中醫(yī)實(shí)驗(yàn)起步較晚,積累方法和經(jīng)驗(yàn)不多,在實(shí)驗(yàn)過程中往往忽略技術(shù)細(xì)節(jié)操作,隨意性強(qiáng),氣候環(huán)境等以及被選動(dòng)物生物學(xué)特性等諸多因素對(duì)模型制作、對(duì)模型有什么影響均未加以認(rèn)真考慮。由于主客觀因素,實(shí)驗(yàn)難以做到標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化,如疼痛所致血瘀模型時(shí)用電針做刺激,刺激引起血瘀,