免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)1

免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

TechniquesforImmunology

概論

免疫學(xué)技術(shù)利用免疫學(xué)反應(yīng)的特異性原理建立的各種檢測(cè)與分析技術(shù)以及建立這些技術(shù)的各種制備方法。包括：免疫血清學(xué)技術(shù)用于抗原或抗體檢測(cè)的體外免疫反應(yīng)技術(shù)；細(xì)胞免疫技術(shù)用于研究機(jī)體細(xì)胞免疫功能與狀態(tài)的技術(shù)；免疫制備技術(shù)指制備與免疫檢測(cè)有關(guān)制劑的各種技術(shù)。

一、細(xì)胞免疫技術(shù)

淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類淋巴細(xì)胞功能測(cè)定細(xì)胞因子測(cè)定E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)T細(xì)胞亞群檢測(cè)試驗(yàn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞試驗(yàn)巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)白介素測(cè)定干擾素測(cè)定用途免疫機(jī)理診斷治療藥物選擇類型++-++--+++-+++-+++-++-+++-++體內(nèi)細(xì)胞免疫試驗(yàn)皮膚試驗(yàn)++-+試驗(yàn)名稱

（一）淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類

1.淋巴細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)技術(shù)1.1T細(xì)胞E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)檢測(cè)T細(xì)胞

T淋巴細(xì)胞表面CD2分子是綿羊紅細(xì)胞（SRBC）受體，也稱E受體，在一定條件下，SRBC環(huán)繞T細(xì)胞與之結(jié)合，形成花環(huán)狀，稱E花環(huán)（E-rosette），形成此種花環(huán)的細(xì)胞稱E花環(huán)形成細(xì)胞。

1.2EA玫瑰花環(huán)試驗(yàn)檢測(cè)B細(xì)胞

B淋巴細(xì)胞有表面Fc受體，以雞紅細(xì)胞作為指示細(xì)胞與相應(yīng)的抗紅細(xì)胞抗體形成EA，B淋巴細(xì)胞可以通過(guò)Fc受體與EA形成花環(huán)，以此計(jì)算B淋巴細(xì)胞的數(shù)目。

1.3EAC玫瑰花環(huán)試驗(yàn)檢測(cè)B細(xì)胞B淋巴細(xì)胞表面具有補(bǔ)體C3受體，紅細(xì)胞可與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物（EA），進(jìn)而與補(bǔ)體結(jié)合(EAC)，然后與B淋巴細(xì)胞表面的補(bǔ)體C3受體結(jié)合而形成花環(huán)，以供計(jì)數(shù)B淋巴細(xì)胞。

1.4酯酶染色法ANAE+檢測(cè)T細(xì)胞

T淋巴細(xì)胞的胞漿內(nèi)存在著酸性a–醋酸萘酯酶(ANAE+)，在酸性條件下，能使底物醋酸萘酯水解產(chǎn)生a–萘酚，而a–萘酚與六偶氮副品紅作用形成不溶性的紅色沉淀物而沉積在T淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)酯酶所在的部位。2.T細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)

T細(xì)胞總數(shù)：CD3；TH:CD4；Tc:CD8

應(yīng)用針對(duì)CD抗原的單抗來(lái)鑒別各T細(xì)胞亞群。

2.1間接免疫熒光法

分離淋巴細(xì)胞CD單抗熒光二抗鏡檢計(jì)數(shù)

2.2流式細(xì)胞術(shù)分離淋巴細(xì)胞CD單抗熒光二抗FACS測(cè)試管計(jì)數(shù)

（二）淋巴細(xì)胞功能測(cè)定

淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）或特異性抗原刺激后，可出現(xiàn)代謝旺盛、蛋白質(zhì)和核酸合成增加、細(xì)胞體積增大并能進(jìn)行分裂的淋巴母細(xì)胞，此稱為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低，可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平，因此，可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一。淋巴胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)的方法有形態(tài)學(xué)方法、MTT法、3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）摻入法。A、形態(tài)學(xué)方法1、原理

淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中受有絲分裂原如植物血凝素（PHA）等刺激后，可轉(zhuǎn)化為體積較大的母細(xì)胞，胞漿增多而深染，核增大并可見(jiàn)核仁部分細(xì)胞可出現(xiàn)有絲分裂，計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的百分率可反映機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。2、方法

（1）取無(wú)菌肝素抗凝血0.1ml，加入1.8ml細(xì)胞培養(yǎng)液中，同時(shí)加入PHA（1000μg/ml）0.1ml，對(duì)照管不加PHA，將細(xì)胞置37℃、5%CO2培養(yǎng)3天，每天搖動(dòng)1次。（2）培養(yǎng)結(jié)束時(shí)吸棄大部分上清液，加入4mlNH4Cl（8.5g/L）混勻，置37℃水浴10min。（3）2500r/min離心10min后棄去上清液，沉淀加5ml固定液，室溫作用10