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文檔簡介

1實(shí)驗(yàn)四過氧化物同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分析2（1）掌握聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）技術(shù)的原理和操作方法。（2）掌握PAGE法分離過氧化物同工酶的原理和方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）過氧化物同工酶及活性染色二、實(shí)驗(yàn)原理

1、電泳概念：帶電粒子在電場中向與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象?！稹稹稹稹?+-+-二、實(shí)驗(yàn)原理

2、電泳分類：顯微電泳自由界面電泳區(qū)帶電泳紙電泳醋酸薄膜電泳瓊脂糖凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）二、實(shí)驗(yàn)原理

3、電泳法原理：在一定條件下，任何帶點(diǎn)顆粒都有自己特定的電泳遷移率。影響電泳遷移率的因素：顆粒性質(zhì)：凈電荷數(shù)目、顆粒大小、顆粒形狀電場強(qiáng)度：V/cm溶液性質(zhì)：緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、溶液黏度、電滲二、實(shí)驗(yàn)原理

4、聚丙烯酰胺凝膠電泳：是由單體丙烯酰胺（Acr）和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺（Bis）在加速劑

N,N,N,N-四甲基乙二胺（TEMED）和催化劑過硫酸銨（AP）的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamidegelelectrophoresis，簡稱PAGE)8反應(yīng)過程：TEMED催化AP生成硫酸自由基

S2O82－

2SO4·ˉ硫酸自由基的氧原子激活A(yù)cr單體并形成單體長鏈：9Bis將單體長鏈間連成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)：10PAGE法分離蛋白質(zhì)的三種效應(yīng)：電荷效應(yīng)：各種蛋白質(zhì)分子所帶電荷不同，在同一電場中泳動率不同；分子篩效應(yīng)：蛋白質(zhì)分子大小和形狀各不相同，在通過一定濃度（一定孔徑）凝膠時受阻力各不相同，泳動率也不相同；濃縮效應(yīng)：凝膠為不連續(xù)系統(tǒng)（凝膠層、pH、電位梯度均不連續(xù)），從

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