貓血壓法多組分生化藥降壓物質(zhì)檢查時值分析

貓血壓法多組分生化藥降壓物質(zhì)檢查時值分析

多組生物化學是指從人體和動物組織或體液中提取的藥物，或由發(fā)酵而來的非單一成分引起的藥物。近年來,由于對藥品安全性的逐漸重視,生化藥注射劑不良反應(yīng)的報道逐漸增加,其中報道較多而且反應(yīng)嚴重的過敏反應(yīng),在部分生化藥注射劑目前執(zhí)行的質(zhì)量標準中卻未規(guī)定與此相關(guān)的降壓物質(zhì)檢查項。為此,本文采用貓血壓法考察了腦苷肌肽注射液、曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液、脾多肽注射液等幾種多組分生化藥降壓物質(zhì)項,為其注射劑質(zhì)量標準提高提供了科學依據(jù)。1材料表面1.1動物貓,2.0~4.0kg,雌者無孕(北京市興旺動物養(yǎng)殖場)。1.2藥代動力學用量腦苷肌肽注射液(2個藥廠13批樣品,見表1,人用劑量為0.33mL·kg-1);曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液(1個藥廠6批樣品,見表2,人用劑量為0.17mL·kg-1);脾多肽注射液(1個藥廠8批樣品,見表4,人用劑量為0.17mL·kg-1);鹿瓜多肽注射液(規(guī)格:2mL∶4mg,批號:050718、070328、050309,E廠家,人用劑量為0.2mL·kg-1);注射用鹿瓜多肽(規(guī)格:4mg·支-1,批號:20060915,F廠家,人用劑量為0.4mg·kg-1);骨瓜提取物注射液(共2個藥廠6批樣品,見表6,人用劑量為0.33mL·kg-1)。供試藥物以生理鹽水稀釋成不同濃度的供試品溶液。1.3對照品和試劑MPA2000多道生物信號分析系統(tǒng)(上海奧爾科特生物科技有限公司);磷酸組胺對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:150510-200412);戊巴比妥鈉(國藥集團化學試劑有限公司,批號:WS20051129);肝素鈉(規(guī)格:160U·mg-1,北京欣經(jīng)科生物技術(shù)有限公司分裝,批號:H040730)。2方法和結(jié)果2.1保溫手術(shù)臺上把氣管關(guān)關(guān)用4%戊巴比妥鈉(40~50mg·kg-1)ip麻醉貓后,固定于保溫手術(shù)臺上,分離氣管及頸動脈、股靜脈,在一側(cè)頸動脈插入另端連接至多道生物信號分析系統(tǒng)的動脈插管,管內(nèi)充滿肝素鈉生理鹽水,以記錄血壓;在一側(cè)股靜脈內(nèi)插入靜脈插管,供給藥用。待血壓穩(wěn)定后即可進行敏感度測定。2.2重復(fù)給藥次數(shù)自股靜脈依次注入組胺對照品稀釋液,劑量按動物體重每kg0.05、0.1、0.15μg,重復(fù)給藥2次。如0.1μg劑量所致的血壓下降值均不小于20mmHg,同時相應(yīng)各劑量所致反應(yīng)的平均值有差別,可認為該動物的靈敏度符合規(guī)定。2.3血壓下降值測定取靈敏度符合規(guī)定的實驗用貓,分別依次組織胺標準溶液(ds)→供試品溶液(dT)→供試品溶液(dT)→組織胺標準溶液(ds)從股靜脈注入相應(yīng)濃度的供試品溶液或組織胺標準溶液(0.1μg·kg-1),記錄血壓下降值。供試品溶液(dT)與組織胺標準溶液(ds)的注入體積應(yīng)相等。2.4按相同方法添加不同劑量時的反應(yīng)以第一與第三、第二與第四劑量所致的反應(yīng)分別比較,如dT所致的反應(yīng)值均不大于ds所致的反應(yīng)值的一半,即認為供試品降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定;否則按上述次序繼續(xù)注射一組4個劑量,并按相同方法分別比較2組內(nèi)各對ds、dT劑量所致反應(yīng)值;如dT所致的反應(yīng)值均不大于ds所致的反應(yīng)值,仍認為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定;如dT所致的反應(yīng)值均大于ds所致的反應(yīng)值,即認為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定;否則,應(yīng)另取動物復(fù)試。如復(fù)試的結(jié)果仍有dT所致的反應(yīng)值大于ds所致的反應(yīng)值,即認為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定。2.5降壓物質(zhì)含量測定本法系通過靜脈注射限值劑量的供試品,觀察對麻醉貓血壓下降的程度,以判定供試品中所含降壓物質(zhì)的量是否符合規(guī)定。一般可以按臨床單次靜脈注射公斤體重劑量的1/5~5倍作為降壓物質(zhì)檢查劑量限值。若靜脈注射原液1.0mL·kg-1劑量未見降壓反應(yīng),該劑量可作為限值。2.5.1靜脈原液用量選擇A-6(批號:20060805)和B-13(批號:20060402)2批腦苷肌肽注射液樣品,根據(jù)臨床用量,從1.0mL·kg-1開始進行預(yù)試驗。靜脈注射本品原液0.4~1.0mL·kg-1時,貓血壓有所下降但反應(yīng)值均小于對照品組織胺(0.1μg·kg-1)所致的反應(yīng)值一半,表明本品未見降壓反應(yīng)。因此,將本品的降壓物質(zhì)的限值確定為靜脈注射原液1.0mL·kg-1。按照確定的限值,依法進行了腦苷肌肽注射液2廠家13批次樣品的驗證實驗,結(jié)果見表1。2.5.2靜脈原液用量根據(jù)臨床用量,對曲克蘆丁腦蛋白水解注射液C-6(批號:20060601)從1.0mL·kg-1開始進行預(yù)試驗。靜脈注射本品原液0.4~1.0mL·kg-1時,貓血壓有所下降但反應(yīng)值均小于對照品組織胺(0.1μg·kg-1)所致的反應(yīng)值一半,表明本品未見降壓反應(yīng)。因此,將本品的降壓物質(zhì)的限值確定為靜脈注射原液1.0mL·kg-1。按照確定的限值,依法進行了曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液1廠家6批次樣品的驗證實驗,結(jié)果見表2。2.5.3降壓物質(zhì)的限值的確定根據(jù)臨床用量,我們對D-8(批號:20060503)從1.0mL·kg-1開始進行預(yù)試驗,預(yù)試驗結(jié)果見表3。預(yù)試驗結(jié)果表明本品有降壓作用,靜脈注射本品1∶5稀釋液0.2mL·kg-1~原液1.0mL·kg-1時,樣品的血壓下降值超過對照品組織胺(0.1μg·kg-1)所致的反應(yīng)值;當靜脈注射本品1∶20稀釋液0.2mL·kg-1時貓血壓下降反應(yīng)值小于對照品組織胺(0.1μg·kg-1)所致的反應(yīng)值一半。因此,將本品的降壓物質(zhì)的限值確定為靜脈注射本品1∶20稀釋液0.2mL·kg-1。按照確定的限值,依法進行了脾多肽注射液1廠家8批次樣品的驗證實驗,結(jié)果見表4。2.5.4產(chǎn)品的質(zhì)量關(guān)以臨床用藥劑量0.4mg·kg-1作為本品降壓物質(zhì)檢查劑量限值,依法進行了鹿瓜多肽注射液1廠家3批次樣品和注射用鹿瓜多肽1廠家1批次樣品的驗證實驗,結(jié)果見表5。2.5.5骨瓜提取物注射液2廠家3批樣品的驗證實驗以臨床用藥劑量0.33mL·kg-1作為本品降壓物質(zhì)檢查劑量限值,依法進行了骨瓜提取物注射液2廠家3批樣品的驗證實驗,結(jié)果見表6。從表6可以看出,2廠家樣品存在著差異,G廠家2批樣品均不符合規(guī)定,提示G廠家的生產(chǎn)工藝有待改進。3降壓物質(zhì)檢查多組分生化藥大多來自動物臟器的提取物,來源復(fù)雜,存在組分不明、結(jié)構(gòu)不清或有可能因臟器離體后組織出現(xiàn)自溶現(xiàn)象混入組胺、類組胺樣具有降壓作用的活性物質(zhì),從而影響藥物的治療和產(chǎn)生意外不良反應(yīng)。因此,在多組分生化藥注射劑質(zhì)量標準中檢查降壓物質(zhì)是確保臨床安全用藥的重要措施。鹿瓜多肽注射劑和骨瓜提取物注射液分別從梅花鹿骨和甜瓜籽、豬骨和甜瓜籽提取精制后制成,藥物成分復(fù)雜,原標準中均有降壓物質(zhì)檢查項,但未設(shè)劑量限值,說明該類品種質(zhì)量標準不完善,本研究根據(jù)《中國藥典》2005年版一部附錄確定了臨床用藥劑量作為降壓物質(zhì)的檢查限值,對原有標準進行了補充修改。腦苷肌肽注射液和曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液本研究雖未發(fā)現(xiàn)有降壓反應(yīng),但在我國,GMP尚處于初級階段,藥品質(zhì)量尚處于中低水平,在藥品生產(chǎn)過程中由于可變因素多而不可避免地產(chǎn)生影響安全性、有效性的質(zhì)量問題,此類產(chǎn)品增訂降壓物質(zhì)檢查項對其藥品的質(zhì)量控制是必要