骨髓細(xì)胞檢驗課件

學(xué)習(xí)目標(biāo)1.闡述血細(xì)胞的發(fā)育過程及形態(tài)演變規(guī)律；說出細(xì)胞凋亡的概念。

2.描述紅細(xì)胞系、粒細(xì)胞系、巨核細(xì)胞系、單核細(xì)胞系和淋巴細(xì)胞系的正常細(xì)胞形態(tài)。

3.描述成人正常骨髓象的特征、骨髓涂片觀察方法和骨髓細(xì)胞分類方法。

4.說出過氧化物酶染色、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色的原理、方法和臨床應(yīng)用。

學(xué)習(xí)目標(biāo)1.闡述血細(xì)胞的發(fā)育過程及形態(tài)演變規(guī)律；1學(xué)習(xí)目標(biāo)5.說出造血器官和造血微環(huán)境的概念。6.理解骨髓涂片、染色和骨髓細(xì)胞分類中應(yīng)注意的問題，粒紅比值、有核細(xì)胞增生程度的概念，骨髓檢驗的臨床應(yīng)用。7.理解中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶、酯酶、糖原和鐵粒染色的原理和臨床應(yīng)用。8.知道各系細(xì)胞的異常形態(tài)特征和常見非造血細(xì)胞形態(tài)和骨髓穿刺方法學(xué)習(xí)目標(biāo)5.說出造血器官和造血微環(huán)境的概念。2骨髓細(xì)胞檢驗

骨髓細(xì)胞檢驗是通過抽取骨髓組織并利用形態(tài)學(xué)、化學(xué)及生物學(xué)等技術(shù)對骨髓細(xì)胞進(jìn)行檢驗的方法，是血液檢驗的重要組成部分。本章重點介紹光學(xué)顯微鏡下瑞特-吉姆薩（Wright-Giemsa）染色的骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查方法，對常用的細(xì)胞化學(xué)染色方法也作簡要介紹。骨髓細(xì)胞檢驗骨髓細(xì)胞檢驗是通過抽取骨髓組3骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查

主要用于觀察骨髓與血液中的血細(xì)胞數(shù)量與質(zhì)量的變化，以了解造血功能的變化情況，對疾病特別是血液病的診斷、觀察療效、判斷預(yù)后等均有重大價值。若配用相應(yīng)的細(xì)胞化學(xué)染色，則可使診斷的準(zhǔn)確性有較大提高。骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查主要用于觀察骨髓與血液4你知道嗎？

人們發(fā)現(xiàn)血細(xì)胞已有300年的歷史，1673年觀察到紅細(xì)胞，1749年觀察到各種白細(xì)胞，而血小板在1842年被認(rèn)識。

這些細(xì)胞的形態(tài)學(xué)至今仍是血液學(xué)家研究的對象。各種特殊顯微鏡的發(fā)明與應(yīng)用，使血細(xì)胞檢驗技術(shù)不斷提高，血細(xì)胞形態(tài)學(xué)的概念更具體生動。目前應(yīng)用的特殊顯微鏡有：暗視野顯微鏡、偏光顯微鏡、位相顯微鏡、電子顯微鏡和干涉顯微鏡等。你知道嗎？人們發(fā)現(xiàn)血細(xì)胞已有300年的歷史5第一節(jié)造血與血細(xì)胞的分化發(fā)育一、造血器官與造血微環(huán)境二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控三、細(xì)胞凋亡的概念四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征第一節(jié)造血與血細(xì)胞的分化發(fā)育一、造血器官與造血微環(huán)境6一、造血器官與造血微環(huán)境（一）造血器官

造血細(xì)胞包括紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和漿細(xì)胞等系統(tǒng)。能夠生成造血細(xì)胞并支持其分化、發(fā)育和成熟的器官稱為造血器官。各種血細(xì)胞在造血器官內(nèi)的生成過程稱為造血。

在人體發(fā)育的不同階段，主要造血器官是不相同的。一、造血器官與造血微環(huán)境（一）造血器官71．胚胎期造血器官（1）中胚葉造血期（2）肝造血期（3）骨髓造血期1．胚胎期造血器官（1）中胚葉造血期82．出生后造血器官（1）骨髓造血：紅骨髓、黃骨髓（2）淋巴器官造血：胸腺、脾、淋巴結(jié)（3）髓外造血2．出生后造血器官（1）骨髓造血：紅骨髓、黃骨髓9一、造血器官與造血微環(huán)境

一、造血器官與造血微環(huán)境10一、造血器官與造血微環(huán)境（二）造血微環(huán)境

是由除造血細(xì)胞以外的所有參與調(diào)控造血的間質(zhì)成分構(gòu)成的空間。包括微血管系統(tǒng)、末梢神經(jīng)、基質(zhì)細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，是造血干細(xì)胞賴以生存的場所。在適宜的造血微環(huán)境中，造血細(xì)胞在各種成分的調(diào)控下得以增殖、分化、發(fā)育和成熟。一、造血器官與造血微環(huán)境（二）造血微環(huán)境11二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控（一）造血干（祖）細(xì)胞的分化

造血干細(xì)胞（HSC）基本特征：1．有自我更新和自我維持能力HSC只進(jìn)行不對稱有絲分裂。2．有多向分化能力HSC能分化為髓系和淋巴系祖細(xì)胞。3．具有多態(tài)性HSC群體在形態(tài)和生物特性及表面標(biāo)志上不同。二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控（一）造血干（祖）細(xì)胞的分化12二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控

造血祖細(xì)胞（HPC）：由造血干細(xì)胞分化而來。這類細(xì)胞部分或完全失去了自我更新能力，只能定向分化為各系統(tǒng)的原始、幼稚細(xì)胞，故又稱為造血定向干細(xì)胞。二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控造血祖細(xì)13急性淋巴細(xì)胞白血病時POX呈陰性反應(yīng)，F(xiàn)AB分型規(guī)定原始和幼稚細(xì)胞陽性率＜3％。二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控Ⅱ型幼稚紅細(xì)胞質(zhì)中含3～5個小鐵粒。二、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色因此NAP活性反應(yīng)主要出現(xiàn)于中性粒細(xì)胞成熟階段，其他細(xì)胞皆為陰性。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征蘇丹黑B染色也是一種鑒別細(xì)胞類型的細(xì)胞化學(xué)染色法，其原理為SB是一種脂溶性染料，可溶解于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的中性脂肪、磷脂及類固醇結(jié)構(gòu)中，而使胞質(zhì)中的脂類物質(zhì)呈棕黑色或深黑色顆粒顯示出來，即使是細(xì)胞內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)的脂類也可顯示。(參見第三章第五節(jié))2．有多向分化能力HSC能分化為髓系和淋巴系祖細(xì)胞。實在困難時應(yīng)作形態(tài)學(xué)描述、攝像記錄、動態(tài)觀察或用有關(guān)針對細(xì)胞系統(tǒng)表面標(biāo)志的單克隆抗體檢測進(jìn)行區(qū)別。常見于特發(fā)性血小板減少性紫癜患者的骨髓涂片中。物理法有凍結(jié)干燥和火焰固定等，化學(xué)法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和乙酸固定等方法。涂抹細(xì)胞多時，支持急性淋巴細(xì)胞性白血病；1．單核細(xì)胞系的正常形態(tài)二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控凡抑制率＞50％者，提示確受NaF所抑制。（2）幼稚漿細(xì)胞：胞體直徑12～16μm，橢圓或圓形。粒-單核系祖細(xì)胞在巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）的作用下，分化為單核系祖細(xì)胞，繼而進(jìn)一步分化發(fā)育，經(jīng)過原始、幼稚階段，3～4次分裂增殖后而成熟。（1）在幾種病癥中，骨髓象相似，血象顯著不同見于氯霉素或酒精中毒的患者。（3）顆粒型巨核細(xì)胞：胞體直徑40～70μm，有時可達(dá)100μm，外形多不規(guī)則。5．染色應(yīng)用液二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控（二）造血的調(diào)控

造血干（祖）細(xì)胞的增殖、分化和成熟過程是受多種因素影響的復(fù)雜活動，如基因水平調(diào)控、神經(jīng)體液因子、體液調(diào)控等。不同方面信息相互結(jié)合，對造血細(xì)胞發(fā)揮綜合的調(diào)控作用。急性淋巴細(xì)胞白血病時POX呈陰性反應(yīng)，F(xiàn)AB分型規(guī)定原始和幼14三、細(xì)胞凋亡的概念

細(xì)胞的死亡有兩種形式，一種是細(xì)胞壞死，另一種則是細(xì)胞凋亡。凋亡一種細(xì)胞死亡的生理形式，是在基因的控制下細(xì)胞自主死亡的過程，又稱為程序性細(xì)胞死亡。

現(xiàn)已證明細(xì)胞凋亡具有復(fù)雜的分子調(diào)控機(jī)制，具有重要的生物學(xué)意義。細(xì)胞凋亡與許多臨床疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。三、細(xì)胞凋亡的概念細(xì)胞的死亡有兩種形式，15四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律（一）血細(xì)胞的發(fā)育成熟

血細(xì)胞的成熟是指由原始階段細(xì)胞經(jīng)幼稚到成熟細(xì)胞的發(fā)育過程，發(fā)育成熟過程是連續(xù)性的。四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律（一）血細(xì)胞的發(fā)育成熟16（1）在幾種病癥中，骨髓象相似，血象顯著不同胞質(zhì)染淡紅或淡藍(lán)色，其中充滿細(xì)小、密集的淡紫紅色特異性中性顆粒，早期尚可見個別殘留的嗜天青顆粒。3．干抽干抽是指非技術(shù)性錯誤，多部位、多次穿刺均抽不出骨髓。（2）紅細(xì)胞系：除觀察紅細(xì)胞系增生程度、各階段細(xì)胞百分率外，還應(yīng)注意中幼、晚幼紅細(xì)胞胞質(zhì)變化，晚幼紅細(xì)胞脫核情況，有無巨幼紅細(xì)胞出現(xiàn)和其他異?，F(xiàn)象。（1）巨幼紅細(xì)胞：它是胚胎早期的幼稚紅細(xì)胞，出生后僅見于葉酸、維生素B12缺乏的巨幼細(xì)胞性貧血或某些血液病時。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）是成熟粒細(xì)胞S顆粒釋放的一種酶。是由除造血細(xì)胞以外的所有參與調(diào)控造血的間質(zhì)成分構(gòu)成的空間。由于各實驗室條件不同（如實驗方法、試劑質(zhì)量和結(jié)果判斷），參考值有很大差別，最好建立自己實驗室的參考值，這里的數(shù)據(jù)僅供參考。不同的部位造血活動有顯著差異。在光學(xué)顯微鏡下，僅能區(qū)別原始、幼稚、成熟階段，而不能區(qū)別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。核形畸變，如凹陷、折疊、腎形、分葉及扭曲等，因分裂異常而呈雙核、母子核、蝶形核等；祝賀你完成了本次學(xué)習(xí)任務(wù)!胞核大，約占細(xì)胞體積的4/5，圓形或橢圓形，居于細(xì)胞中央或稍偏位，染色質(zhì)為細(xì)致的顆粒狀，較原始粒細(xì)胞稍粗而緊密，染紫紅色，可見1～2個核仁，核膜清楚。胞質(zhì)量較其它原始細(xì)胞豐富，染不透明的藍(lán)色或灰藍(lán)色，無顆粒，偶見鈍偽足。2．判斷骨髓增生程度骨髓涂片中有核細(xì)胞的多少，可大致反映骨髓造血的增生程度。8．各種退化的細(xì)胞成分但也可能是骨髓尚未反映出來的疾病早期，特別是臨床癥狀典型者，應(yīng)慎重對待，進(jìn)一步作多部位多次穿刺，經(jīng)仔細(xì)檢查，甚至長期追蹤觀察后，才能提出否定意見。（一）四甲基聯(lián)苯胺法嗜酸性粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，嗜堿性粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)。見于氯霉素或酒精中毒的患者。胞核卵圓、半月形，略有凹陷，常因顆粒遮蓋而輪廓不清。四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律

為掌握細(xì)胞的發(fā)育成熟程度，動態(tài)地觀察細(xì)胞的變化情況，特將各系細(xì)胞按其發(fā)育過程中形態(tài)變化特征和功能的成熟度，劃分為原始、幼稚、成熟三個階段。幼稚階段形態(tài)變化比較大的再細(xì)分為早幼、中幼、晚幼三個時期。（1）在幾種病癥中，骨髓象相似，血象顯著不同四、血細(xì)胞的成熟17四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律（二）骨髓血細(xì)胞的形態(tài)演變規(guī)律

在骨髓血細(xì)胞發(fā)育成熟過程中，其外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)都在不斷地發(fā)生變化。細(xì)胞正常發(fā)育演變有一定的規(guī)律性，如表15-2所示。四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律（二）骨髓血細(xì)胞的形態(tài)演變規(guī)律18四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律四、血細(xì)胞的成熟規(guī)律19五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（一）造血干細(xì)胞及各系祖細(xì)胞（二）紅細(xì)胞系（三）粒細(xì)胞系（四）巨核細(xì)胞系（五）單核細(xì)胞系（六）淋巴細(xì)胞系（七）漿細(xì)胞系（八）其他細(xì)胞及有關(guān)成分五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（一）造血干細(xì)胞及各系祖20五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（一）造血干細(xì)胞及各系祖細(xì)胞

造血干細(xì)胞和各系祖細(xì)胞分布于造血組織和血液中，細(xì)胞數(shù)量很少。在瑞特-吉姆薩染色法中只能識別原始階段及其以后的細(xì)胞，對于干細(xì)胞只能用脾集落形成試驗和體外培養(yǎng)等方法進(jìn)行檢測。其瑞特-吉姆薩染色形態(tài)為直徑7～10μm的圓形細(xì)胞，核圓或有切跡，染淡紫色，結(jié)構(gòu)均勻纖細(xì)，胞質(zhì)染淡藍(lán)色，不含顆粒。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（一）造血干細(xì)胞及各系祖21五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（二）紅細(xì)胞系

紅細(xì)胞系祖細(xì)胞在促紅細(xì)胞生成素的作用下分化為原始紅細(xì)胞，通過3～5次有絲分裂，在形態(tài)上經(jīng)過原始、早幼、中幼、晚幼紅細(xì)胞階段，脫核成網(wǎng)織紅細(xì)胞，而后成熟。正常情況下，中幼及其以前的幼稚紅細(xì)胞，均具有分裂增殖能力，其中早幼和中幼紅細(xì)胞均可分裂1～2次。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（二）紅細(xì)胞系221．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)

（1）原始紅細(xì)胞：胞體直徑15～20μm，圓形或橢圓形，邊緣常有偽足或突起。胞核大，約占細(xì)胞體積的4/5，圓形或橢圓形，居于細(xì)胞中央或稍偏位，染色質(zhì)為細(xì)致的顆粒狀，較原始粒細(xì)胞稍粗而緊密，染紫紅色，可見1～2個核仁，核膜清楚。胞質(zhì)量較少，因含有大量游離核糖體，而呈濃密的油墨藍(lán)色，近核處著色淺淡，稱核周淡染區(qū)，無顆粒。其分裂相染色體粗短，呈18°～21°銳角。1．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)（1）原始紅細(xì)胞：胞23原始紅細(xì)胞原始紅細(xì)胞241．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)

（2）早幼紅細(xì)胞：略似原始紅細(xì)胞，但細(xì)胞開始變小，胞體直徑15～18μm，呈圓形或橢圓形。胞核仍占細(xì)胞大部分（2/3以上），圓形，多居中，染色質(zhì)較原始紅細(xì)胞更緊密并已開始聚集，核仁模糊或消失。胞質(zhì)量稍多，呈藍(lán)色或稍變淺。1．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)（2）早幼紅細(xì)胞：略25早幼紅細(xì)胞早幼紅細(xì)胞26中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的堿性磷酸酶（neutrophilalkalinephosphatase，NAP），在pH9.（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法不同的涂片，不同的染色方法，細(xì)胞受色深淺、染色質(zhì)清晰程度等有所不同。Ⅱ型幼稚紅細(xì)胞質(zhì)中含3～5個小鐵粒。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）是成熟粒細(xì)胞S顆粒釋放的一種酶。（一）血細(xì)胞的發(fā)育成熟（2）幼稚單核細(xì)胞：胞體直徑15～25μm，圓形或不規(guī)則形。2．淋巴細(xì)胞的異常形態(tài)一般而言，急性淋巴細(xì)胞性白血病時退化細(xì)胞的百分率較高，單核細(xì)胞白血病時則較低。2．注意區(qū)別原始細(xì)胞。單核細(xì)胞來自粒-單核系祖細(xì)胞。無血小板生成，細(xì)胞周圍可附有血小板。1．全面觀察涂片情況要對骨髓涂片全面瀏覽，了解骨髓取材和涂片情況，觀察細(xì)胞受色是否滿意，若涂片情況較差，應(yīng)另選良好涂片，并將情況填寫記錄。5mg），按上述方法染色，若陽性明顯減弱或呈陰性，示被NaF抑制。1．選髓粒豐富的骨髓片，用甲醇固定10min。（五）骨髓象分析與報告（2）異型淋巴細(xì)胞：常見于病毒感染時。一、造血器官與造血微環(huán)境1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)1．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)

（3）中幼紅細(xì)胞：胞體明顯變小，直徑8～15μm，圓形。核占細(xì)胞的2/3～1/2，呈圓形，多居中，染色質(zhì)粗糙濃染，呈團(tuán)塊狀或索條狀，有明顯空隙，呈打碎的墨塊狀，染深紫紅色，核仁消失。胞質(zhì)量增多，因多少不等的血紅蛋白與聚核糖體同時存在而呈不同程度的嗜多色性，染灰藍(lán)色、灰色或灰粉色。中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的堿性磷酸酶（neutrophilalka27中幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞281．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)

（4）晚幼紅細(xì)胞：胞體更小，直徑7～10μm，圓形。胞核小于細(xì)胞直徑的1/2，早期尚可見墨塊狀結(jié)構(gòu)，晚期多固縮，染深紫紅色，多居偏位，有的細(xì)胞可見欲脫核狀。胞質(zhì)因充滿血紅蛋白，染粉紅色。1．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)（4）晚幼紅細(xì)胞29晚幼紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞301．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)

（5）網(wǎng)織紅細(xì)胞：見第四章第五節(jié)。（6）紅細(xì)胞：為紅細(xì)胞系完全成熟的細(xì)胞，見第四章第一節(jié)。1．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)（5）網(wǎng)織紅細(xì)胞：見第四章第五節(jié)。312．幼稚紅細(xì)胞的異常形態(tài)

（1）巨幼紅細(xì)胞：它是胚胎早期的幼稚紅細(xì)胞，出生后僅見于葉酸、維生素B12缺乏的巨幼細(xì)胞性貧血或某些血液病時。其形態(tài)特征是胞體較一般正常幼稚紅細(xì)胞為大，胞質(zhì)豐富，胞核的成熟落后于胞質(zhì)，染色質(zhì)細(xì)致、疏松。巨幼紅細(xì)胞的發(fā)育也有原始、早幼、中幼、晚幼四個階段，成熟后為巨紅細(xì)胞。2．幼稚紅細(xì)胞的異常形態(tài)（1）巨幼紅細(xì)胞：32原始巨幼紅細(xì)胞早巨幼紅細(xì)胞中巨幼紅細(xì)胞晚巨幼紅細(xì)胞原始巨幼紅細(xì)胞早巨幼紅細(xì)胞中巨幼紅細(xì)胞晚巨幼紅細(xì)胞332．幼稚紅細(xì)胞的異常形態(tài)

（2）紅細(xì)胞巨幼樣變（類巨幼紅細(xì)胞）：為幼稚紅細(xì)胞的不典型巨幼紅細(xì)胞樣變化，多見于早幼、中幼階段。其體積稍大，核圓或畸形，染色質(zhì)濃集，粗而不勻，胞質(zhì)量豐富，有時受色可呈假顆粒狀或泡沫樣。常見于白血病、腫瘤等患者，尤其在化療后更常見。2．幼稚紅細(xì)胞的異常形態(tài)（2）紅細(xì)胞巨34酯酶的細(xì)胞化學(xué)染色方法很多，若根據(jù)作用時的pH、底物等不同可將常用的酯酶染色法分為兩大類，即特異性酯酶（SE）染色法和非特異性酯酶（NSE）染色法。（2）紅細(xì)胞系約占骨髓有核細(xì)胞的1/5（20％），以晚幼紅細(xì)胞為主，中幼紅細(xì)胞次之，早幼紅細(xì)胞＜5％，原始紅細(xì)胞＜1％，無巨幼紅細(xì)胞。4％，多為Ⅰ型細(xì)胞，鐵粒細(xì)小、色淡。涂抹細(xì)胞多時，支持急性淋巴細(xì)胞性白血?。辉谌旧珪r盡可能保持細(xì)胞的生前結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分和酶的活性；（三）蘇丹黑B（SB）染色正常單核細(xì)胞和原始單核及幼稚單核細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，其他血細(xì)胞則呈陰性或弱陽性反應(yīng)。實在困難時應(yīng)作形態(tài)學(xué)描述、攝像記錄、動態(tài)觀察或用有關(guān)針對細(xì)胞系統(tǒng)表面標(biāo)志的單克隆抗體檢測進(jìn)行區(qū)別。（2）在某些疾病中，血象相似，骨髓象顯著不同2．幫助診斷某些代謝障礙性疾病一般情況下，應(yīng)使用骨髓穿刺術(shù)抽取骨髓液作涂片檢查，在骨髓穿刺不成功（“干抽”）的情況下，或者必須靠骨髓活檢來明確診斷時，可使用骨髓環(huán)鉆術(shù)。過氧化物酶染色的臨床應(yīng)用5．10g/L甲基綠水溶液復(fù)染5min。3．觀察成熟紅細(xì)胞有無形態(tài)異常。骨髓單核-巨噬細(xì)胞豐富，常可吞噬一些異常脂類、原蟲。（1）巨幼紅細(xì)胞：它是胚胎早期的幼稚紅細(xì)胞，出生后僅見于葉酸、維生素B12缺乏的巨幼細(xì)胞性貧血或某些血液病時。聯(lián)苯胺反應(yīng)，顯示過氧化物酶；2．細(xì)胞化學(xué)的顯示(1)因此NAP活性反應(yīng)主要出現(xiàn)于中性粒細(xì)胞成熟階段，其他細(xì)胞皆為陰性。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法血液病治療過程中，也常通過骨髓檢查來評價療效或判斷預(yù)后。7ml，混合染色6min。2．幼稚紅細(xì)胞的異常形態(tài)

（3）巨型原始紅細(xì)胞：胞體直徑30～60μm。見于急性造血機(jī)能停滯，是由于某種因子阻斷了原始紅細(xì)胞向下發(fā)育所致，其形態(tài)結(jié)構(gòu)大體與原始紅細(xì)胞相似。酯酶的細(xì)胞化學(xué)染色方法很多，若根據(jù)作用時的pH、底物等不同可352．幼稚紅細(xì)胞的異常形態(tài)

（4）空泡型紅細(xì)胞：早幼、中幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)3～20個直徑小于lμm的小空泡。蘇丹黑、糖原染色均呈陰性。見于氯霉素或酒精中毒的患者。

（5）異常成熟紅細(xì)胞：請參見第四章第八節(jié)。2．幼稚紅細(xì)胞的異常形態(tài)（4）空泡型紅細(xì)胞36五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（三）粒細(xì)胞系

髓系干細(xì)胞在粒-單集落刺激因子（GM-CSF）及白細(xì)胞介素-3（IL-3）等影響下，分化發(fā)育成為粒-單系祖細(xì)胞，然后分化為粒系祖細(xì)胞，再進(jìn)一步分化發(fā)育成為原始、早幼粒細(xì)胞，又經(jīng)過中幼、晚幼、桿狀、分葉階段而成熟。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（三）粒細(xì)胞系371．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)

（1）原始粒細(xì)胞：胞體直徑10～18μm，圓或橢圓形。核大而圓，約占細(xì)胞體積的4/5以上，偏位或居中，染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀，均勻平坦如一層薄紗，核膜不明顯，有2～5個淡藍(lán)色清晰小核仁。胞質(zhì)量少，呈水彩藍(lán)色，一般無顆粒。原始粒細(xì)胞過氧化物酶染色早期陰性，后期可見陽性顆粒。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)（1）原始粒細(xì)胞：38原始粒細(xì)胞原始粒細(xì)胞39實在困難時應(yīng)作形態(tài)學(xué)描述、攝像記錄、動態(tài)觀察或用有關(guān)針對細(xì)胞系統(tǒng)表面標(biāo)志的單克隆抗體檢測進(jìn)行區(qū)別。參考值7～35個，須在油鏡下觀察證實。弱陽性者呈少量稀疏細(xì)小的藍(lán)色顆粒。一、骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗的臨床應(yīng)用此現(xiàn)象也可見于慢粒、紅白血病及一些骨髓增殖性疾病的化療之后。觀察骨髓涂片，一般應(yīng)先用低倍鏡觀察全片，了解基本情況。骨髓單核-巨噬細(xì)胞豐富，?？赏淌梢恍┊惓Ｖ悺⒃x。（1）在幾種病癥中，骨髓象相似，血象顯著不同2．流水沖洗10～15s，晾干。在適宜的造血微環(huán)境中，造血細(xì)胞在各種成分的調(diào)控下得以增殖、分化、發(fā)育和成熟。（2）粒細(xì)胞分葉過多和巨幼變：是維生素B12或葉酸缺乏導(dǎo)致的核酸代謝障礙在粒細(xì)胞中的反映，常見中幼、晚幼、桿狀核粒細(xì)胞出現(xiàn)胞體及胞核變大，并呈幼稚樣變化，如核腫脹、疏松，胞質(zhì)中顆粒減少等，而成熟粒細(xì)胞分葉過多（6～10葉）。（二）改良Gomori鈣-鈷法最簡單的是粗略估量，按染色反應(yīng)的強(qiáng)弱、受色的深淺，人為地劃分為–、+、++、+++、++++五個等級。在惡性貧血和巨核細(xì)胞白血病時，可見多核現(xiàn)象。5．穿刺部位的差異骨髓造血組織分布不均，且某些病變也可限于局部，因此穿刺部位的不同，其結(jié)果可有顯著差異，所以對一些疑難病例最好是多部位穿刺。NAP染色可用于鑒別診斷(2)特異性酯酶又稱氯乙酸萘酯酶或粒細(xì)胞酯酶，主要分布在骨髓粒細(xì)胞系統(tǒng)中。細(xì)胞中的過氧化物酶分解過氧化氫，產(chǎn)生新生態(tài)氧，碘化鉀在新生態(tài)氧的氧化作用下生成碘，碘與煌焦油藍(lán)形成藍(lán)綠色復(fù)合物，定位于胞質(zhì)中。胞質(zhì)量少，呈水彩藍(lán)色，一般無顆粒。一般而言，急性淋巴細(xì)胞性白血病時退化細(xì)胞的百分率較高，單核細(xì)胞白血病時則較低。非特異性酯酶又稱單核細(xì)胞酯酶。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)

（2）早幼粒細(xì)胞：胞體直徑12～20μm，圓形或橢圓形，略大于原始粒細(xì)胞。核圓或橢圓，多偏位，染色質(zhì)開始聚集，呈較粗的顆粒網(wǎng)狀，有時可見核仁。胞質(zhì)量增多，染稍淡藍(lán)色，含數(shù)量不等、大小不一、分布不勻的紫紅色嗜天青顆粒（又稱非特異性顆粒），早期較少，晚期較多。近核旁常有一不著色區(qū)，其間無顆粒。過氧化物酶染色呈陽性反應(yīng)。實在困難時應(yīng)作形態(tài)學(xué)描述、攝像記錄、動態(tài)觀察或用有關(guān)針對細(xì)胞40早幼粒細(xì)胞早幼粒細(xì)胞411．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)

（3）中幼粒細(xì)胞：中幼階段胞質(zhì)中開始出現(xiàn)不同的特異性顆粒，即中性、嗜酸性和嗜堿性顆粒，藉此可明確地區(qū)分出中性、嗜酸性和嗜堿性中幼粒細(xì)胞，其中以中性中幼粒細(xì)胞為主。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)（3）中幼粒細(xì)胞：中421．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)

中性中幼粒細(xì)胞：胞體直徑10～18μm，早期者較大。胞核多偏位，略小于早幼粒細(xì)胞，占細(xì)胞體積的2/3～1/2，橢圓形或一側(cè)開始變平。染色質(zhì)粗于早幼階段，呈致密索塊狀，早期尚可見核仁輪廓，晚期核仁消失，核膜明顯。胞質(zhì)染淡紅或淡藍(lán)色，其中充滿細(xì)小、密集的淡紫紅色特異性中性顆粒，早期尚可見個別殘留的嗜天青顆粒。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)中性中幼粒細(xì)胞：431．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)

嗜酸性中幼粒細(xì)胞：胞體直徑15～20μm，胞核與中性中幼粒細(xì)胞相似。胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大、均勻、排列緊密的橘紅色嗜酸性顆粒。早期個別顆粒不成熟，可呈嗜堿性。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)嗜酸性中幼粒細(xì)胞441．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)

嗜堿性中幼粒細(xì)胞：少見。胞體直徑10～15μm。胞核圓或橢圓形，輪廓不清楚，染色質(zhì)較模糊，胞質(zhì)內(nèi)含有數(shù)量不多、分布不均、大小不等的黑紫色嗜堿性顆粒，有的壓在核上，可因染色時溶解或由于脫顆粒而成為小空泡。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)嗜堿性中幼粒細(xì)胞：45中性嗜酸嗜堿中幼粒細(xì)胞中性嗜酸嗜堿中幼粒細(xì)胞461．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)（4）晚幼粒細(xì)胞：

中性晚幼粒細(xì)胞：胞體略小于中幼階段，直徑10～16μm。胞核明顯縮小，通常小于細(xì)胞體積的1/2，一側(cè)凹陷呈腎形、半月形等。染色質(zhì)濃集成塊、緊密深染，無分裂象。胞質(zhì)量多，染粉紅色，充滿淡紫紅色中性顆粒。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)（4）晚幼粒細(xì)胞：471．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)

嗜酸性晚幼粒細(xì)胞：胞體大小及核的形態(tài)與中性晚幼粒細(xì)胞相似，胞質(zhì)內(nèi)充滿嗜酸性顆粒。嗜堿性晚幼粒細(xì)胞：少見。胞體直徑10～15μm。胞核卵圓、半月形，略有凹陷，常因顆粒遮蓋而輪廓不清。胞質(zhì)中及核上可見少量分布不均的嗜堿性顆粒。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)嗜酸性晚幼粒細(xì)胞：48中性嗜酸嗜堿晚幼粒細(xì)胞中性嗜酸嗜堿晚幼粒細(xì)胞492．粒細(xì)胞的異常形態(tài)

（1）白血病性粒細(xì)胞：其常見的特征為：原始粒細(xì)胞大小異常，如小原粒型、大原粒型或大小原?；旌闲?；核形畸變，如凹陷、折疊、腎形、分葉及扭曲等，因分裂異常而呈雙核、母子核、蝶形核等；核仁增大、融合、畸形等；胞核與胞質(zhì)發(fā)育不同步，如胞質(zhì)中顆粒早熟，原始粒細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)較多的嗜天青顆?；駻uer小體，后者是急性非淋巴細(xì)胞白血病診斷標(biāo)志之一。2．粒細(xì)胞的異常形態(tài)（1）白血病性粒細(xì)胞：502．粒細(xì)胞的異常形態(tài)

（2）粒細(xì)胞分葉過多和巨幼變：是維生素B12或葉酸缺乏導(dǎo)致的核酸代謝障礙在粒細(xì)胞中的反映，常見中幼、晚幼、桿狀核粒細(xì)胞出現(xiàn)胞體及胞核變大，并呈幼稚樣變化，如核腫脹、疏松，胞質(zhì)中顆粒減少等，而成熟粒細(xì)胞分葉過多（6～10葉）。此現(xiàn)象也可見于慢粒、紅白血病及一些骨髓增殖性疾病的化療之后。2．粒細(xì)胞的異常形態(tài)（2）粒細(xì)胞分葉過多512．粒細(xì)胞的異常形態(tài)

（3）Pelger-Hu?t畸形：有原發(fā)性和繼發(fā)性兩種。前者中性粒細(xì)胞呈先天性分葉過少現(xiàn)象。成熟粒細(xì)胞核似晚幼階段不分葉，且畸形，如腎形、啞鈴形、蝶形等。桿狀核也粗短。染色質(zhì)細(xì)密，緊縮，濃集成塊或索網(wǎng)狀，深染?；我部缮婕笆人嵝粤＜?xì)胞。此畸形屬家族性粒細(xì)胞異常，為常染色體顯性基因遺傳，一般不影響健康。繼發(fā)性者可見于慢性粒細(xì)胞性白血病、骨髓異常增生綜合征等。2．粒細(xì)胞的異常形態(tài)（3）Pelger-Hu522．粒細(xì)胞的異常形態(tài)

（4）Jordan異常：本病為家族性疾病，特征是粒細(xì)胞及單核細(xì)胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡。也可涉及淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞，但不見于原始階段細(xì)胞。有報告檢出此種異常者伴發(fā)進(jìn)行性肌麻痹癥或魚鱗癬。

（5）粒細(xì)胞毒性變、退行性變(參見第三章第五節(jié))2．粒細(xì)胞的異常形態(tài)（4）Jordan異常：53五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征

（四）巨核細(xì)胞系

巨核系祖細(xì)胞經(jīng)巨核細(xì)胞集落刺激因子（Meg-CSF）和血小板生成素（thrombopoietin,TPO）的刺激分化發(fā)育，形成成熟巨核細(xì)胞，并產(chǎn)生血小板。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征（四）巨核細(xì)胞54陽性反應(yīng)為胞質(zhì)出現(xiàn)紅色顆粒、紅色團(tuán)塊或彌漫紅色，胞核染綠色。如轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞、戈謝細(xì)胞、尼曼-匹克細(xì)胞、R-S（Reed-Sternberg）細(xì)胞、多核巨細(xì)胞以及紅細(xì)胞有無緡錢狀排列等。3．觀察成熟紅細(xì)胞有無形態(tài)異常。根據(jù)細(xì)胞內(nèi)顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和分布情況，將鐵粒幼紅細(xì)胞分為如下幾型：制備良好的骨髓涂片是進(jìn)行骨髓細(xì)胞檢驗的基礎(chǔ)性工作，絕對不可忽視。（二）改良Pereira碘化鉀法臨床常用的染色方法是過碘酸－堿性復(fù)紅反應(yīng)，即過碘酸－雪夫（periodicacidSchiff’s）反應(yīng)，簡稱PAS反應(yīng)?？梢杂霉接嬎鉔aF抑制率。如轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞、戈謝細(xì)胞、尼曼-匹克細(xì)胞、R-S（Reed-Sternberg）細(xì)胞、多核巨細(xì)胞以及紅細(xì)胞有無緡錢狀排列等。4．骨髓液被稀釋出現(xiàn)此種情況是由于抽取骨髓液時用力過大或穿刺針頭刺入骨髓血竇所致，會造成涂片上骨髓小粒及脂肪滴減少，各階段細(xì)胞比例失調(diào)，中性粒細(xì)胞分葉核＞桿狀核，無或少有巨核細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞等骨髓特有細(xì)胞，一般應(yīng)重新穿刺。（4）Jordan異常：本病為家族性疾病，特征是粒細(xì)胞及單核細(xì)胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡。無血小板生成，細(xì)胞周圍可附有血小板。理解中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶、酯酶、糖原和鐵粒染色的原理和臨床應(yīng)用。2mol/L2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇液骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗對于白血病特別是非白血性白血病、再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血及多發(fā)性骨髓瘤等的診斷有決定性意義。急性淋巴細(xì)胞白血病時POX呈陰性反應(yīng)，F(xiàn)AB分型規(guī)定原始和幼稚細(xì)胞陽性率＜3％。（2）原始粒細(xì)胞與早幼粒細(xì)胞；中性非特異性酯酶染色法由于底物不同又可分為α-醋酸萘酯酶染色法、醋酸萘酚AS酯酶染色法及醋酸萘酚AS-D酯酶染色法三種。2．淋巴細(xì)胞的異常形態(tài)細(xì)胞凋亡與許多臨床疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。（六）骨髓象檢驗中應(yīng)注意的問題染深藍(lán)色或粉藍(lán)色，核周出現(xiàn)少許嗜天青顆粒。1．巨核細(xì)胞系的正常形態(tài)

（1）原始巨核細(xì)胞：胞體直徑15～30μm，呈不規(guī)則圓形。胞核較大，染暗紫紅色，圓或橢圓，常有凹陷或折疊。染色質(zhì)粗粒狀，有聚集緊密感，可見2～3個不規(guī)則的核仁，不清晰，有凹陷感。胞質(zhì)量少，邊緣不規(guī)則，常有小突起，染深藍(lán)色，周邊濃染，不含顆粒。陽性反應(yīng)為胞質(zhì)出現(xiàn)紅色顆粒、紅色團(tuán)塊或彌漫紅色，胞核染綠色。55原始巨核細(xì)胞原始巨核細(xì)胞561．巨核細(xì)胞系的正常形態(tài)

（2）幼稚巨核細(xì)胞：胞體直徑30～50μm。核呈腎形或不規(guī)則形，染色質(zhì)呈粗顆?；蛐K狀，核仁可有可無。胞質(zhì)量增多，外形不規(guī)則，可有偽足。染深藍(lán)色或粉藍(lán)色，核周出現(xiàn)少許嗜天青顆粒。1．巨核細(xì)胞系的正常形態(tài)（2）幼稚巨核細(xì)胞57幼稚巨核細(xì)胞幼稚巨核細(xì)胞581．巨核細(xì)胞系的正常形態(tài)

（3）顆粒型巨核細(xì)胞：胞體直徑40～70μm，有時可達(dá)100μm，外形多不規(guī)則。核形不規(guī)則或分葉，染色質(zhì)粗糙緊密，呈索條狀或塊狀，不見核仁。胞質(zhì)豐富，染粉紅色或淡藍(lán)色，如充滿細(xì)小紫紅色顆粒則呈濃厚的紫紅色或淡紅色。無血小板生成，細(xì)胞周圍可附有血小板。1．巨核細(xì)胞系的正常形態(tài)（3）顆粒型巨核細(xì)59顆粒巨核細(xì)胞顆粒巨核細(xì)胞601．巨核細(xì)胞系的正常形態(tài)

（4）產(chǎn)生血小板型巨核細(xì)胞：為完全成熟的巨核細(xì)胞，胞體直徑40～100μm，有時可達(dá)100μm以上。細(xì)胞質(zhì)局部或全部形成血小板雛形，胞質(zhì)邊緣不完整，可有偽足伸出，周圍已有血小板脫落，待胞質(zhì)完全脫落后只剩核時則稱裸核型巨核細(xì)胞。1．巨核細(xì)胞系的正常形態(tài)（4）產(chǎn)生血小板型61產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞622．巨核細(xì)胞的異常形態(tài)

（1）小型巨核細(xì)胞：胞體直徑10～20μm，甚至更小，多為一個核，較大型者可有兩個或多個核，染色質(zhì)因高度深染?？床磺褰Y(jié)構(gòu)，偶見1~2個小核仁。核周圍有少量或中等量的不規(guī)則胞質(zhì)，常有偽足樣突起。胞質(zhì)內(nèi)顆粒豐富或顆粒過少甚至缺失，因而染粉色、藍(lán)色或藍(lán)粉色，周圍?？梢娧“濉Ｐ【藓思?xì)胞常見于慢性粒細(xì)胞性白血病、巨核細(xì)胞白血病、骨髓增生異常綜合征等。2．巨核細(xì)胞的異常形態(tài)（1）小型巨核細(xì)胞：632．巨核細(xì)胞的異常形態(tài)

（2）巨核細(xì)胞分葉過多和巨大變化：在缺乏維生素B12或葉酸時，巨核細(xì)胞呈巨大、幼稚、多葉等變化。在惡性貧血和巨核細(xì)胞白血病時，可見多核現(xiàn)象。

（3）變性巨核細(xì)胞：多見于幼稚階段巨核細(xì)胞。胞體大，胞質(zhì)豐富，染藍(lán)色，呈玻璃樣變，顆粒少或無顆粒，可見空泡，核中也可見空泡。常見于特發(fā)性血小板減少性紫癜患者的骨髓涂片中。

（4）異常血小板。2．巨核細(xì)胞的異常形態(tài)（2）巨核細(xì)胞分葉過64考考你

各階段幼稚血細(xì)胞都有自己的特征，你能找出下列細(xì)胞的分界線嗎？（1）中幼紅細(xì)胞與晚幼紅細(xì)胞；（2）原始粒細(xì)胞與早幼粒細(xì)胞；（3）早幼粒細(xì)胞與中幼粒細(xì)胞；（4）幼稚巨核細(xì)胞與顆粒型巨核細(xì)胞；（5）顆粒型巨核細(xì)胞與產(chǎn)血小板型巨核細(xì)胞?？伎寄愀麟A段幼稚血細(xì)胞都有自己的特征，你能找出下列細(xì)胞65五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（五）單核細(xì)胞系

單核細(xì)胞來自粒-單核系祖細(xì)胞。粒-單核系祖細(xì)胞在巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）的作用下，分化為單核系祖細(xì)胞，繼而進(jìn)一步分化發(fā)育，經(jīng)過原始、幼稚階段，3～4次分裂增殖后而成熟。單核細(xì)胞非終末細(xì)胞，進(jìn)入組織或體腔后，發(fā)育成巨噬細(xì)胞。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色形態(tài)學(xué)特征（五）單核細(xì)胞系661．單核細(xì)胞系的正常形態(tài)

（1）原始單核細(xì)胞：胞體直徑15～20μm，呈圓形或不規(guī)則形。核大，圓或不規(guī)則形，扭曲折疊，染色質(zhì)纖細(xì)疏松似網(wǎng)，染淡紫紅色，核膜不明顯，有1～3個圓形或橢圓、甚至不規(guī)則的核仁。胞質(zhì)量較其它原始細(xì)胞豐富，染不透明的藍(lán)色或灰藍(lán)色，無顆粒，偶見鈍偽足。1．單核細(xì)胞系的正常形態(tài)（1）原始單核細(xì)胞：671．單核細(xì)胞系的正常形態(tài)

（2）幼稚單核細(xì)胞：胞體直徑15～25μm，圓形或不規(guī)則形。核大，多不規(guī)則，可呈凹陷、切跡或折疊狀。染色質(zhì)略粗于原始階段，核仁不清晰或消失。胞質(zhì)量多，染灰藍(lán)色，近核處出現(xiàn)細(xì)小的紫紅色嗜天青顆粒。1．單核細(xì)胞系的正常形態(tài)（2）幼稚單核細(xì)胞：681．淋巴細(xì)胞的正常形態(tài)在適宜的造血微環(huán)境中，造血細(xì)胞在各種成分的調(diào)控下得以增殖、分化、發(fā)育和成熟。3．加染色應(yīng)用液蓋滿片膜，染色2～5min，棄去染液，晾干。3．觀察非造血細(xì)胞及異常細(xì)胞物理法有凍結(jié)干燥和火焰固定等，化學(xué)法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和乙酸固定等方法。Ⅱ型幼稚紅細(xì)胞質(zhì)中含3～5個小鐵粒。（3）漿細(xì)胞：胞體直徑8～15μm，橢圓形或不規(guī)則形。（一）四甲基聯(lián)苯胺法不同的涂片，不同的染色方法，細(xì)胞受色深淺、染色質(zhì)清晰程度等有所不同。4．無其他異常細(xì)胞和寄生蟲。血液病治療過程中，也常通過骨髓檢查來評價療效或判斷預(yù)后。核形不規(guī)則或分葉，染色質(zhì)粗糙緊密，呈索條狀或塊狀，不見核仁。（1）肯定性診斷：某些具有特異性細(xì)胞學(xué)變化的疾病，其臨床表現(xiàn)與細(xì)胞學(xué)特征均典型時可作肯定性診斷。2．判斷骨髓增生程度骨髓涂片中有核細(xì)胞的多少，可大致反映骨髓造血的增生程度。嗜酸性粒細(xì)胞顆粒本身不著色，而顆粒間的胞質(zhì)呈紅色。同時注意有無各種異常分裂現(xiàn)象。2．2g/L核固紅核形不規(guī)則或分葉，染色質(zhì)粗糙緊密，呈索條狀或塊狀，不見核仁。1．粒細(xì)胞系的正常形態(tài)二、造血干（祖）細(xì)胞的分化與調(diào)控原始單核細(xì)胞和幼稚單核細(xì)胞1．淋巴細(xì)胞的正常形態(tài)原始單核細(xì)胞和幼稚單核細(xì)胞692．單核細(xì)胞的異常形態(tài)（1）白血病性單核細(xì)胞：白血病時單核細(xì)胞可有胞核胞質(zhì)發(fā)育不同步現(xiàn)象，核形異常，呈筆架狀、桿狀、分葉狀等。胞質(zhì)出現(xiàn)Auer小體等病理性形態(tài)變化。

（2）毒性和退行性變：單核細(xì)胞核腫脹，染色質(zhì)松散，胞質(zhì)嗜酸性變，出現(xiàn)空泡、毒性顆粒等。2．單核細(xì)胞的異常形態(tài)（1）白血病性單核細(xì)胞：白血病時單核細(xì)702．單核細(xì)胞的異常形態(tài)（3）激活型單核細(xì)胞：單核細(xì)胞在炎癥刺激特別是某些毒性強(qiáng)的急性或慢性刺激時，出現(xiàn)增生，胞體變大，直徑達(dá)20～30μm，核形多樣化，胞質(zhì)豐富，常有多個偽足。有時可見空泡或吞噬異物，可能是單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞過渡的形態(tài)。2．單核細(xì)胞的異常形態(tài)（3）激活型單核細(xì)胞：單核細(xì)胞在炎癥刺71五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征（六）淋巴細(xì)胞系

本系由淋巴系干細(xì)胞進(jìn)一步分化而來，過氧化物酶染色陰性。在光學(xué)顯微鏡下，僅能區(qū)別原始、幼稚、成熟階段，而不能區(qū)別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征（六）淋巴細(xì)胞系

721．淋巴細(xì)胞的正常形態(tài)（1）原始淋巴細(xì)胞：胞體直徑10～18μm，圓或橢圓形。胞核較大，占整個細(xì)胞的大部分，居中或偏位，多為圓形或橢圓形，有時可見淺切跡，染色質(zhì)呈顆粒狀，但比原始粒細(xì)胞粗，在核仁及核膜周圍聚集使核膜清楚，有清晰的淡藍(lán)色小核仁，多為1～2個，有凹陷感。胞質(zhì)量少，呈透明藍(lán)色，環(huán)核淡染區(qū)明顯，無顆粒。1．淋巴細(xì)胞的正常形態(tài)（1）原始淋巴細(xì)胞：胞體直徑10～1873原始淋巴細(xì)胞原始淋巴細(xì)胞741．淋巴細(xì)胞的正常形態(tài)（2）幼稚淋巴細(xì)胞：胞體直徑10～16μm。胞核圓形或橢圓形，居中或偏位，染色質(zhì)較原始淋巴細(xì)胞略粗糙，排列較緊密，核膜明顯，核仁模糊或消失。胞質(zhì)量略增多，呈淡藍(lán)色，偶見少許圓形粗大的暗紫紅色嗜天青顆粒，一般不超過10顆。1．淋巴細(xì)胞的正常形態(tài)（2）幼稚淋巴細(xì)胞：胞體直徑10～1675幼稚淋巴細(xì)胞幼稚淋巴細(xì)胞762．淋巴細(xì)胞的異常形態(tài)

（1）白血病性淋巴細(xì)胞：急性淋巴細(xì)胞性白血病時，原始淋巴細(xì)胞或幼稚淋巴細(xì)胞變化很大，有大型、小型和混合型等類型，核有凹陷、切跡或不規(guī)則形。染色質(zhì)豐富，呈粗顆粒狀，致密濃染。核仁異常，胞質(zhì)量少，可有空泡。慢性淋巴細(xì)胞性白血病的淋巴細(xì)胞核多有切跡，核濃縮緊密，染深紫黑色，胞質(zhì)量極少。

（2）異型淋巴細(xì)胞：常見于病毒感染時。其形態(tài)特征請參見第十七章第三節(jié)。2．淋巴細(xì)胞的異常形態(tài)（1）白血病性淋巴細(xì)胞：急性淋77五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征（七）漿細(xì)胞系

漿細(xì)胞是高度分化的淋巴細(xì)胞，是由B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來。各期漿細(xì)胞過氧化物酶染色均為陰性。五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征（七）漿細(xì)胞系781．漿細(xì)胞的正常形態(tài)

（1）原始漿細(xì)胞：胞體直徑14～18μm，橢圓或圓形。核大，占細(xì)胞的2/3以上，圓形，常偏于一側(cè)或略偏，染色質(zhì)較粗疏，呈顆粒網(wǎng)狀，核仁2～5個。胞質(zhì)量較多，染深藍(lán)或灰藍(lán)色，有渾濁感，有不明顯的核旁淡染現(xiàn)象，無顆粒。1．漿細(xì)胞的正常形態(tài)（1）原始漿細(xì)胞：胞體直徑14～79原始漿細(xì)胞原始漿細(xì)胞801．漿細(xì)胞的正常形態(tài)

（2）幼稚漿細(xì)胞：胞體直徑12～16μm，橢圓或圓形。核占細(xì)胞的1/2以上，偏于一側(cè)或略偏，圓或橢圓形，染色質(zhì)開始聚集，核仁模糊或消失。胞質(zhì)染深藍(lán)色或呈嗜多色性，有渾濁感，可見半圓形核旁淡染區(qū)，稱初漿區(qū)，有時可含有空泡或少數(shù)嗜天青顆粒。1．漿細(xì)胞的正常形態(tài)（2）幼稚漿細(xì)胞：胞體直徑12～1681幼稚漿細(xì)胞幼稚漿細(xì)胞821．漿細(xì)胞的正常形態(tài)

（3）漿細(xì)胞：胞體直徑8～15μm，橢圓形或不規(guī)則形。核小，占細(xì)胞的1/3以下，圓或橢圓形，明顯偏位，核的長軸與胞體長軸相垂直。染色質(zhì)緊密成塊，似龜背或車輪狀，核膜清楚。胞質(zhì)量豐富，染深藍(lán)、灰藍(lán)或紅藍(lán)相混色，有泡沫感，核旁淡染區(qū)明顯。漿細(xì)胞多成片增殖于血管壁周圍，正常骨髓中有少量，慢性炎癥時易見到。1．漿細(xì)胞的正常形態(tài)（3）漿細(xì)胞：胞體直徑8～15μm，83漿細(xì)胞漿細(xì)胞842．漿細(xì)胞的異常形態(tài)

在病理情況下，漿細(xì)胞可出現(xiàn)異常形態(tài)，如火焰細(xì)胞、拉塞爾（Russell）小體、莫特（Mott）細(xì)胞、晶狀體及大小異常等，常見于多發(fā)性骨髓瘤，也可見于反應(yīng)性漿細(xì)胞增生及漿細(xì)胞白血病等。2．漿細(xì)胞的異常形態(tài)在病理情況下，漿細(xì)胞85異常漿細(xì)胞異常漿細(xì)胞86五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征（八）其他細(xì)胞及有關(guān)成分1．網(wǎng)狀細(xì)胞2．內(nèi)皮細(xì)胞3．吞噬細(xì)胞4．組織嗜堿細(xì)胞5．成骨細(xì)胞6．破骨細(xì)胞7．脂肪細(xì)胞8．各種退化的細(xì)胞成分9．幼紅細(xì)胞造血島五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征（八）其他細(xì)胞及有關(guān)成87第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色及臨床應(yīng)用一、過氧化物酶染色二、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色三、鐵粒染色四、糖原染色五、酯酶染色第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色及臨床應(yīng)用一、過氧化物酶染色88非缺鐵性貧血，如巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等，鐵粒幼紅細(xì)胞增多，但仍以Ⅰ、Ⅱ型為主。胞質(zhì)中及核上可見少量分布不均的嗜堿性顆粒。1．細(xì)胞外鐵先用低倍鏡觀察涂片，特別是涂片尾部和髓粒附近，注意翠藍(lán)色顆粒，再用高倍和油鏡觀察有無染成深藍(lán)色的鐵顆粒，按下列5級標(biāo)準(zhǔn)判斷：五、血細(xì)胞瑞特-吉姆薩染色

形態(tài)學(xué)特征染深藍(lán)色或粉藍(lán)色，核周出現(xiàn)少許嗜天青顆粒。涂抹細(xì)胞多時，支持急性淋巴細(xì)胞性白血??；6．觀察有無血液寄生蟲對疑有血液寄生蟲的患者，應(yīng)集中注意力，仔細(xì)尋找。各細(xì)胞系的原始細(xì)胞雖有不同特征，但也有很多相似之處，有時難以鑒別?；蛉堪|(zhì)染成均勻灰色，無顆粒。（++）有較多的鐵粒和小珠。（六）骨髓象檢驗中應(yīng)注意的問題（1）小型巨核細(xì)胞：胞體直徑10～20μm，甚至更小，多為一個核，較大型者可有兩個或多個核，染色質(zhì)因高度深染常看不清結(jié)構(gòu)，偶見1~2個小核仁。胞質(zhì)量多，染粉紅色，充滿淡紫紅色中性顆粒。胞核圓或橢圓形，輪廓不清楚，染色質(zhì)較模糊，胞質(zhì)內(nèi)含有數(shù)量不多、分布不均、大小不等的黑紫色嗜堿性顆粒，有的壓在核上，可因染色時溶解或由于脫顆粒而成為小空泡。5ml，涂抹使其蓋滿膜面，固定lmin，再加稀過氧化氫液0.早幼粒細(xì)胞出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng)，酶活性不隨細(xì)胞分化成熟而增強(qiáng)，分化好的原始粒細(xì)胞呈弱陽性反應(yīng)。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法細(xì)胞正常發(fā)育演變有一定的規(guī)律性，如表15-2所示。1．紅細(xì)胞系的正常形態(tài)（5）網(wǎng)織紅細(xì)胞：見第四章第五節(jié)。血細(xì)胞化學(xué)染色

血細(xì)胞化學(xué)染色是以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)，對血細(xì)胞內(nèi)各化學(xué)成分、代謝產(chǎn)物作定位、定性、半定量和定量觀察的方法。血細(xì)胞化學(xué)染色可用于研究血細(xì)胞的生理、病理，為血液病的診斷和鑒別診斷，判斷療效及觀察預(yù)后，提供重要依據(jù)。非缺鐵性貧血，如巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等89血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求

血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是：原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)；在染色時盡可能保持細(xì)胞的生前結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分和酶的活性；反應(yīng)產(chǎn)物在顯微鏡下具有一定的穩(wěn)定性，成為不移位的有色沉淀。血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求血細(xì)胞化學(xué)染色的90血細(xì)胞化學(xué)染色

血細(xì)胞化學(xué)染色可以顯示的細(xì)胞成分包括：蛋白質(zhì)（包括一些酶類和氨基酸等）、核酸（包括RNA、DNA）、糖原、脂類等。

進(jìn)行血細(xì)胞化學(xué)染色，要經(jīng)過固定、顯示（染色）和對有關(guān)成分進(jìn)行定性或定量分析三個階段。血細(xì)胞化學(xué)染色血細(xì)胞化學(xué)染色可以顯示的細(xì)胞成911．固定

固定的目的是將細(xì)胞的生前結(jié)構(gòu)和化學(xué)物質(zhì)保存下來。固定的方法有物理法和化學(xué)法。物理法有凍結(jié)干燥和火焰固定等，化學(xué)法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和乙酸固定等方法?；瘜W(xué)固定法在細(xì)胞化學(xué)染色中應(yīng)用較廣。1．固定固定的目的是將細(xì)胞的生前結(jié)構(gòu)和化922．細(xì)胞化學(xué)的顯示(1)

常用的顯示手段有：金屬沉淀法，如顯示維生素C或磷酸酶等；偶氮偶聯(lián)法，如顯示氨基酸、磷酸酶、非特異性酯酶、SH基等；堿性復(fù)紅反應(yīng)（Schiff醛反應(yīng)），如顯示糖原、DNA等；聯(lián)苯胺反應(yīng)，顯示過氧化物酶；普魯士藍(lán)反應(yīng)，顯示三價鐵等。2．細(xì)胞化學(xué)的顯示(1)常用的顯示手段有932．細(xì)胞化學(xué)的顯示(2)

其他尚有物理學(xué)方法，如脂溶染色顯示脂質(zhì)、熒光顯示、放射自身顯影、偏光顯微鏡、相差顯微鏡等技術(shù)。體外活體染色和細(xì)胞免疫化學(xué)染色亦常用于臨床細(xì)胞學(xué)診斷。2．細(xì)胞化學(xué)的顯示(2)其他尚有物理學(xué)方943．細(xì)胞化學(xué)定性和定量分析(1)

可有幾種方法。最簡單的是粗略估量，按染色反應(yīng)的強(qiáng)弱、受色的深淺，人為地劃分為–、+、++、+++、++++五個等級。也可用百分法反映細(xì)胞陽性率，但不能反映受色的強(qiáng)弱。積分法是常用的半定量法，將上述的等級估量與百分率相結(jié)合進(jìn)行計算，它既能反映細(xì)胞陽性率的高低，又能反映細(xì)胞受色的強(qiáng)弱。3．細(xì)胞化學(xué)定性和定量分析(1)可有幾種方953．細(xì)胞化學(xué)定性和定量分析(2)

最精確的定量手段則是用顯微分光光度計測定單個細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分含量，以細(xì)胞受色反應(yīng)的強(qiáng)弱比色，常用于DNA定量、精氨酸測定和各階段幼稚紅細(xì)胞胞質(zhì)中血紅蛋白定位、定量等。3．細(xì)胞化學(xué)定性和定量分析(2)最精確的96一、過氧化物酶染色

（一）四甲基聯(lián)苯胺法

（二）改良Pereira碘化鉀法

（三）蘇丹黑B（SB）染色一、過氧化物酶染色（一）四甲基聯(lián)苯胺法97（一）四甲基聯(lián)苯胺法

原理

粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的胞質(zhì)中含有過氧化物酶（peroxidase，POX），能催化過氧化氫釋放出新生態(tài)氧，氧化無色的受體四甲基聯(lián)苯胺，使其生成藍(lán)色的四甲基聯(lián)苯胺藍(lán)，后者再與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合，形成呈穩(wěn)定的藍(lán)色顆粒，原位沉淀于細(xì)胞質(zhì)中。（一）四甲基聯(lián)苯胺法原理98（一）四甲基聯(lián)苯胺法試劑1．4.16mmol/LTMB液2．亞硝基鐵氰化鈉飽和液3．稀過氧化氫液（用前配制）4．瑞特染液（一）四甲基聯(lián)苯胺法試劑99（一）四甲基聯(lián)苯胺法操作1．臨用時取4.16mmol/LTMB乙醇液lml加亞硝基鐵氰化鈉飽和液10μl，使之成淡棕黃色液體。2．在新鮮干燥的血片或骨髓片上，加上述混合液0.5ml，涂抹使其蓋滿膜面，固定lmin，再加稀過氧化氫液0.7ml，混合染色6min。3．流水洗去染液，再用瑞特染液作對比復(fù)染10～15min，洗去染液，干后油鏡檢查。（一）四甲基聯(lián)苯胺法操作100（一）四甲基聯(lián)苯胺法結(jié)果

陽性：胞質(zhì)中含藍(lán)綠色顆粒（瑞特染液復(fù)染者呈藍(lán)黑色），強(qiáng)陽性者色深，顆粒粗大緊密；弱陽性者呈少量稀疏細(xì)小的藍(lán)色顆粒。陰性：無藍(lán)色顆粒。（一）四甲基聯(lián)苯胺法結(jié)果101四甲基聯(lián)苯胺法各系細(xì)胞染色表現(xiàn)

（1）粒細(xì)胞系：除早期原始粒細(xì)胞陰性外，晚期原始粒細(xì)胞及以后各階段細(xì)胞均含有不同程度的藍(lán)綠色顆粒，隨粒細(xì)胞的成熟而增多，直至充滿胞質(zhì)。但衰老的中性粒細(xì)胞過氧化物酶的活性降低，反應(yīng)程度減弱，甚至呈陰性反應(yīng)。嗜酸性粒細(xì)胞顆粒更粗大，呈深藍(lán)色。嗜堿性粒細(xì)胞為陰性。四甲基聯(lián)苯胺法各系細(xì)胞染色表現(xiàn)（1）粒細(xì)胞102四甲基聯(lián)苯胺法各系細(xì)胞染色表現(xiàn)

（2）單核細(xì)胞系：除早期原始階段呈陰性反應(yīng)外，其它階段多呈弱陽性反應(yīng)，其顆粒細(xì)小，散在分布，部分細(xì)胞可呈陰性反應(yīng)。

（3）某些網(wǎng)狀細(xì)胞及吞噬細(xì)胞：可呈不同程度的過氧化物酶陽性反應(yīng)。

（4）其他血細(xì)胞過氧化物酶染色皆為陰性。四甲基聯(lián)苯胺法各系細(xì)胞染色表現(xiàn)（2）單核細(xì)胞系：除早期原始103過氧化物酶染色陽性過氧化物酶染色陽性104過氧化物酶染色的臨床應(yīng)用

主要是幫助鑒別急性白血病的類型。急性淋巴細(xì)胞白血病時POX呈陰性反應(yīng)，F(xiàn)AB分型規(guī)定原始和幼稚細(xì)胞陽性率＜3％。急性髓系白血病時呈陽性反應(yīng)，在急性粒細(xì)胞白血病時，其細(xì)胞多呈陽性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病時，多呈弱陽性反應(yīng)。過氧化物酶染色的臨床應(yīng)用主要是幫助鑒別急105（二）改良Pereira碘化鉀法

原理

細(xì)胞中的過氧化物酶分解過氧化氫，產(chǎn)生新生態(tài)氧，碘化鉀在新生態(tài)氧的氧化作用下生成碘，碘與煌焦油藍(lán)形成藍(lán)綠色復(fù)合物，定位于胞質(zhì)中。（二）改良Pereira碘化鉀法原理106（二）改良Pereira碘化鉀法試劑1．固定液2．pH5.5磷酸鹽碘化鉀緩沖液3．10g/L煌焦油藍(lán)水溶液4．過氧化氫液5．染色應(yīng)用液

臨用時取pH5.5磷酸鹽碘化鉀緩沖液5ml，加煌焦油藍(lán)水溶液2～5滴和過氧化氫液1～3滴，混勻后4小時內(nèi)用完。（二）改良Pereira碘化鉀法試劑107（二）改良Pereira碘化鉀法操作1．新鮮血片或骨髓片置于固定液中固定30～60s。2．流水沖洗10～15s，晾干。3．加染色應(yīng)用液蓋滿片膜，染色2～5min，棄去染液，晾干。4．油鏡下觀察。（二）改良Pereira碘化鉀法操作108（二）改良Pereira碘化鉀法

結(jié)果

過氧化物酶染色陽性產(chǎn)物呈藍(lán)綠色顆粒，分布在細(xì)胞漿內(nèi)或蓋在核上。未出現(xiàn)者為陰性反應(yīng)。成熟紅細(xì)胞染均勻淡綠色，有核細(xì)胞的核染紫紅色，胞漿一般為淡紫灰色，各系細(xì)胞核漿受色不一樣，易于區(qū)分。（二）改良Pereira碘化鉀法結(jié)果109（三）蘇丹黑B（SB）染色

蘇丹黑B染色也是一種鑒別細(xì)胞類型的細(xì)胞化學(xué)染色法，其原理為SB是一種脂溶性染料，可溶解于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的中性脂肪、磷脂及類固醇結(jié)構(gòu)中，而使胞質(zhì)中的脂類物質(zhì)呈棕黑色或深黑色顆粒顯示出來，即使是細(xì)胞內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)的脂類也可顯示。

血細(xì)胞SB染色結(jié)果基本與過氧化物酶染色相同，二者臨床意義也相似。（三）蘇丹黑B（SB）染色蘇丹黑B染色也110二、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法（二）改良Gomori鈣-鈷法二、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法111（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法

原理

中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的堿性磷酸酶（neutrophilalkalinephosphatase，NAP），在pH9.2～9.8緩沖液中，能水解基質(zhì)液中的磷酸萘酚鈉，釋放出磷酸與萘酚，萘酚再與重氮鹽偶聯(lián)成不溶性有色偶氮染料，沉淀于細(xì)胞質(zhì)中。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法原理112（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法試劑1．固定劑2．丙二醇緩沖液（1）貯備液（0.2mol/L2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇液（2）應(yīng)用液（0.05mol/LpH9.75）3．基質(zhì)液（用前臨時配制）4．10g/L亮綠（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法試劑113（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法操作1．新鮮血片或骨髓片用4℃～10℃的固定劑固定30s。2．蒸餾水洗片。在涂片上滴加新配過濾的基質(zhì)液，在室溫下作用10～15min。3．水洗。10g/L亮綠復(fù)染2min。4．水洗。晾干鏡檢。油鏡觀察。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法操作114（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法

結(jié)果

中性粒細(xì)胞胞核與胞質(zhì)均染成綠色，陽性時出現(xiàn)堿性磷酸酶顆粒，因重氮試劑不同，堿性磷酸酶顆粒呈紅色或紫黑色沉淀。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法結(jié)果115（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法

計分方法

在鏡下計數(shù)100個成熟中性粒細(xì)胞，按胞質(zhì)中沉淀的陽性顆粒的多少，分五級計分。求出每一級計分所占計數(shù)細(xì)胞的百分率，將其百分率乘以該分值，得出該級細(xì)胞的積分，然后將各級細(xì)胞的積分相加，即為總積分值。全部陽性反應(yīng)的百分率相加即為陽性率。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法計分方法116（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法

參考值

成人中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶陽性率平均為37.3%，以弱陽性為主。積分為7～51分。由于各實驗室條件不同（如實驗方法、試劑質(zhì)量和結(jié)果判斷），參考值有很大差別，最好建立自己實驗室的參考值，這里的數(shù)據(jù)僅供參考。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法參考值117（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法

臨床應(yīng)用

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）是成熟粒細(xì)胞S顆粒釋放的一種酶。因此NAP活性反應(yīng)主要出現(xiàn)于中性粒細(xì)胞成熟階段，其他細(xì)胞皆為陰性。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法臨床應(yīng)用118（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法

臨床應(yīng)用NAP活性增高見于細(xì)菌性感染、類白血病反應(yīng)、再生障礙性貧血、某些惡性腫瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病及慢性粒細(xì)胞白血病急性變時。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法臨床應(yīng)用119（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法臨床應(yīng)用NAP活性減低見于慢性粒細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病、綠色瘤、紅白血病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）、病毒感染等。（一）Kaplow偶氮偶聯(lián)法臨床應(yīng)用120NAP染色可用于鑒別診斷(1)1．慢性粒細(xì)胞白血病與中性粒細(xì)胞類白血病反應(yīng)的鑒別前者無繼發(fā)感染時NAP活性明顯下降，積分值常為零。但急性變時常明顯增高。類白血病反應(yīng)時則顯著增高。2．PNH與再生障礙性貧血的鑒別前者NAP活性常降低，后者NAP活性常增高。NAP染色可用于鑒別診斷(1)1．慢性粒細(xì)胞白血病與中性粒細(xì)121NAP染色可用于鑒別診斷(2)3．急性白血病細(xì)胞類型的鑒別急性淋巴細(xì)胞白血病時活性增高，急性粒細(xì)胞白血病時活性降低。4．細(xì)菌與病毒性感染的鑒別化膿性感染時NAP活性明顯增高，急性感染高于慢性感染，球菌感染高于桿菌感染，病毒性或寄生蟲感染時無明顯變化。NAP染色可用于鑒別診斷(2)3．急性白血病細(xì)胞類型的鑒別122堿性磷酸酶染色堿性磷酸酶染色123（二）改良Gomori鈣-鈷法

原理

中性粒細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶在pH9.2～9.8時，將基質(zhì)液中的β-甘油磷酸鈉水解，產(chǎn)生磷酸鈉。磷酸鈉與鈣離子作用生成磷酸鈣，磷酸鈣與鈷離子作用生成磷酸鈷，磷酸鈷與硫化銨反應(yīng)生成黑色的硫化鈷顆粒，沉淀于細(xì)胞胞質(zhì)中。（二）改良Gomori鈣-鈷法原理124（二）改良Gomori鈣-鈷法試劑1．基質(zhì)液(臨用前配制)2．20g/L硝酸鈷水溶液3．20g/L硫化銨（或用前以10ml蒸餾水加硫化銨4滴而成）4．2g/L核固紅染色液（二）改良Gomori鈣-鈷法試劑125（二）改良Gomori鈣-鈷法操作1．取新鮮血片或骨髓片用95％乙醇固定5～10min，待干。2．置37℃基質(zhì)液中溫育4～6h，防止蒸發(fā)。3．水洗，用20g/L硝酸鈷染5min。4．流水洗凈硝酸鈷，再以20g/L硫化銨染5min。5．流水洗凈硫化銨，用2g/L核固紅染液復(fù)染5min。6．流水沖洗，待干，油鏡觀察。（二）改良Gomori鈣-鈷法操作126（二）改良Gomori鈣-鈷法結(jié)果積分判斷（一）4分（++++）全細(xì)胞充滿黑色顆粒，結(jié)成團(tuán)塊，甚至覆蓋于細(xì)胞核上。3分（+++）細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿黑色顆粒，但顆粒之間有空隙；或胞質(zhì)內(nèi)有3/4面積充滿了致密的黑色顆粒沉淀。（二）改良Gomori鈣-鈷法結(jié)果127（二）改良Gomori鈣-鈷法結(jié)果積分判斷（二）2分（++）胞質(zhì)面積的1/2呈黑色或灰黑色顆粒沉淀；或全部胞質(zhì)染成均勻灰色，無顆粒。1分（+）胞質(zhì)面積的1/4呈黑色或灰黑色顆粒沉淀；或全部胞質(zhì)染成均勻淺灰色，無顆粒。0分（－）胞質(zhì)內(nèi)無灰色或黑色沉淀。（二）改良Gomori鈣-鈷法結(jié)果128三、鐵粒染色

人體中的鐵以鐵蛋白的形式存在。鐵蛋白的聚合體稱含鐵血黃素。用普魯士藍(lán)反應(yīng)可顯示鐵的存在，稱為鐵粒染色。骨髓中含有一定量的鐵粒，稱細(xì)胞外鐵；紅細(xì)胞胞質(zhì)中含有鐵粒，稱為細(xì)胞內(nèi)鐵。胞質(zhì)中含有鐵粒的中、晚幼紅細(xì)胞，稱為鐵粒幼紅細(xì)胞；含鐵粒的成熟紅細(xì)胞，稱為鐵粒紅細(xì)胞。三、鐵粒染色人體中的鐵以鐵蛋白的形式存129三、鐵粒染色

原理

含鐵血黃素中的鐵離子在鹽酸環(huán)境中與低鐵氰化鉀作用，成為藍(lán)色的低鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。三、鐵粒染色原理130三、鐵粒染色

試劑1．酸性低鐵氰化鉀2．2g/L核固紅三、鐵粒染色試劑131三、鐵粒染色

操作1．選髓粒豐富的骨髓片，用甲醇固定10min。水洗，待干。2．用新配制的酸性低鐵氰化鉀染液染色30min。若室溫過低可置于墊濕濾紙的大培養(yǎng)皿中，覆蓋后放37℃環(huán)境。3．用流水充分沖洗至少5min后，用核固紅染液復(fù)染5～10min。4．流水沖洗，干后鏡檢。三、鐵粒染色操作132三、鐵粒染色

結(jié)果1．細(xì)胞外鐵先用低倍鏡觀察涂片，特別是涂片尾部和髓粒附近，注意翠藍(lán)色顆粒，再用高倍和油鏡觀察有無染成深藍(lán)色的鐵顆粒，按下列5級標(biāo)準(zhǔn)判斷：三、鐵粒染色結(jié)果133三、鐵粒染色

結(jié)果

（－）全片無細(xì)胞外藍(lán)色顆粒。

（＋）有少數(shù)藍(lán)色顆粒，或偶見藍(lán)色圓形小鐵珠，珠粒似嗜酸性顆粒大小。

（++）有較多的鐵粒和小珠。

（+++）有許多鐵粒、小珠和許多藍(lán)色小塊。

（++++）有極多的鐵粒、小珠和許多藍(lán)色小塊，密集成堆。三、鐵粒染色結(jié)果134三、鐵粒染色

結(jié)果2．細(xì)胞內(nèi)鐵油鏡下計數(shù)100個中、晚幼紅細(xì)胞，計算胞質(zhì)中含有藍(lán)色顆粒的細(xì)胞（鐵粒幼紅細(xì)胞）的百分率。根據(jù)細(xì)胞內(nèi)顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和分布情況，將鐵粒幼紅細(xì)胞分為如下幾型：三、鐵粒染色結(jié)果135三、鐵粒染色

結(jié)果Ⅰ型幼稚紅細(xì)胞質(zhì)中僅含1～2個小鐵粒。Ⅱ型幼稚紅細(xì)胞質(zhì)中含3～5個小鐵粒。Ⅲ型含6～10個小鐵粒或1～4個粗大顆粒。Ⅳ型含10個以上小鐵粒或5個以上粗大鐵粒。Ⅴ型（環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞）含鐵粒6粒以上（包括6粒），其中2/3以上的鐵粒分布在核周，其圍繞范圍占核周的1/2以上。此為診斷鐵粒幼紅細(xì)胞性貧血的重要依據(jù)。三、鐵粒染色結(jié)果136三、鐵粒染色

參考值

細(xì)胞外鐵+～++，多為++。

鐵粒幼紅細(xì)胞百分率12％～44％，平均21.4％，以Ⅰ型為主，僅見少數(shù)Ⅱ型，不見Ⅲ型、Ⅳ型及環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞。所見鐵粒細(xì)小淺染，呈散在分布。三、鐵粒染色參考值137三、鐵粒染色

鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血

細(xì)胞外鐵：反映骨髓中貯鐵量。缺鐵性貧血時細(xì)胞外鐵顯著減少，甚至為陰性。非缺鐵性貧血如溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血時細(xì)胞外鐵正?；蛟黾印Ｈ?、鐵粒染色鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血138三、鐵粒染色

鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血

細(xì)胞內(nèi)鐵（鐵粒幼紅細(xì)胞）：反映骨髓中可利用的鐵量。缺鐵性貧血時鐵粒幼紅細(xì)胞明顯減少，只占0～28％，平均3.4％，多為Ⅰ型細(xì)胞，鐵粒細(xì)小、色淡。非缺鐵性貧血，如巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等，鐵粒幼紅細(xì)胞增多，但仍以Ⅰ、Ⅱ型為主。三、鐵粒染色鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血139三、鐵粒染色

診斷鐵粒幼細(xì)胞性貧血

鐵粒幼細(xì)胞性貧血時，出現(xiàn)較多的環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞，可占幼稚紅細(xì)胞的15％以上（正常人為0），細(xì)胞外鐵也顯著增多。鐵粒染色是診斷鐵粒幼細(xì)胞性貧血的重要方法三、鐵粒染色診斷鐵粒幼細(xì)胞性貧血140鐵粒幼紅細(xì)胞鐵粒幼紅細(xì)胞141環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞142細(xì)胞外鐵細(xì)胞外鐵143四、糖原染色

糖原是糖在體內(nèi)的重要貯存形式，是細(xì)胞代謝時的能量來源，它在細(xì)胞內(nèi)增多反映細(xì)胞生命力旺盛。臨床常用的染色方法是過碘酸－堿性復(fù)紅反應(yīng)，即過碘酸－雪夫（periodicacidSchiff’s）反應(yīng)，簡稱PAS反應(yīng)。四、糖原染色糖原是糖在體內(nèi)的重要貯存形式144四、糖原染色

原理

過碘酸氧化糖原中的1,2-乙二醇基，產(chǎn)生醛基，醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紅色的化合物，定位于胞質(zhì)中，紅色的深淺與細(xì)胞內(nèi)參與反應(yīng)的1,2-乙二醇基的量成正比。四、糖原染色原理145四、糖原染色

試劑1．10g/L過碘酸2．Schiff液3．20g/L甲基綠染色液四、糖原染色試劑146四、糖原染色

操作1．新鮮血片或骨髓片用95％乙醇固定10min，水洗，待干。2．10g/L過碘酸氧化20min(冬天置37℃水浴)。3．水洗3～5分鐘，洗掉多余的過碘酸，晾干。4．Schiff液室溫下染色30～60min。5．自來水沖洗5分鐘，再用蒸餾水沖洗。6．用20g/L甲基綠復(fù)染10～20分鐘。7．流水沖洗，干后鏡檢。四、糖原染色操作147四、糖原染色

操作8．唾液淀粉酶對照片處理法：在已固定過的涂片上蓋滿正常人新鮮唾液，在37℃中保溫30min，水洗，再按照上述步驟2～7進(jìn)行。四、糖原染色操作148四、糖原染色

結(jié)果

陽性反應(yīng)為胞質(zhì)出現(xiàn)紅色顆粒、紅色團(tuán)塊或彌漫紅色，胞核染綠色。四、糖原染色結(jié)果149四、糖原染色

正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

（1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：原始粒細(xì)胞為陰性。早幼粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，隨細(xì)胞逐漸成熟陽性反應(yīng)增強(qiáng)，多呈均勻細(xì)小紅色顆粒。嗜酸性粒細(xì)胞顆粒本身不著色，而顆粒間的胞質(zhì)呈紅色。嗜堿性粒細(xì)胞為陽性反應(yīng)，其表現(xiàn)為大小不一的紫紅色顆粒。四、糖原染色正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)150中性粒細(xì)胞糖原染色中性粒細(xì)胞糖原染色151四、糖原染色正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

（2）紅細(xì)胞系統(tǒng)：幼稚紅細(xì)胞和紅細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。

（3）單核細(xì)胞：僅有少數(shù)細(xì)小彌漫性分布的陽性顆粒。

（4）淋巴細(xì)胞：大多數(shù)淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)，少數(shù)淋巴細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)（多為“＋”）。四、糖原染色正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)152淋巴細(xì)胞糖原染色淋巴細(xì)胞糖原染色153四、糖原染色正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

（5）巨核細(xì)胞和血小板：均為陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色顆粒狀，有時為紅色小塊狀。

（6）其它細(xì)胞：漿細(xì)胞多為陰性反應(yīng)，少數(shù)為陽性反應(yīng)。巨噬細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)。四、糖原染色正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)154巨核細(xì)胞糖原染色巨核細(xì)胞糖原染色155五、酯酶染色

酯酶（esterases）是一種水解酶類，催化酯水解，生成相應(yīng)的酸和醇。酯酶的細(xì)胞化學(xué)染色方法很多，若根據(jù)作用時的pH、底物等不同可將常用的酯酶染色法分為兩大類，即特異性酯酶（SE）染色法和非特異性酯酶（NSE）染色法。五、酯酶染色酯酶（esterases）156（一）特異性酯酶染色