劉士東主任講解腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展

劉士東

主任醫(yī)師

中國人民解放軍316醫(yī)院

一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制二、腫瘤分子診斷內(nèi)容三、腫瘤治療的分子監(jiān)控四、腫瘤的免疫監(jiān)控腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制

腫瘤自身原因

外因內(nèi)因無限增殖轉(zhuǎn)移空間資源

免疫監(jiān)控

攘外

安內(nèi)同流和污視而不見

腫瘤免疫監(jiān)控失活功能喪失腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展LimitlessreplicativepotentialTissueinvasion&metastasisSustainedangiogenesisInsensitivitytoanti-growthsignalsSelf-sufficiencyingrowthsignalsEvadingapoptosis一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展Self-sufficiencyingrowthsignalsAutocrineloopsOver-expressionofreceptorReceptorisalways‘on’Downstreamsignals一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展ExternaltriggersIntracellulartriggersDeathreceptorsCaspasesSensors(8,9)Executioners(3)Evadingapoptosis一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展Insensitivitytoantigrowthsignals一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展SustainedangiogenesisVEGFFGF1/2ThrombospondinThalidomideAvastin一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展Tissueinvasionandmetastases一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展LimitlessreproductivepotentialHayflickhypothesisLimitednumberofdoublingsTelomeremaintenanceTelomeraseNotalltumorcellshavethispotentialTumorstemcells(1)免疫監(jiān)視系統(tǒng)要素

識別力攻擊力組成分工快速反應(yīng)特異反應(yīng)

信息傳遞腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)（1）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)識別特異反應(yīng)抗原遞呈細(xì)胞腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)（1）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)攻擊效應(yīng)細(xì)胞腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)（2）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生證據(jù)體內(nèi)細(xì)胞突變隨時在發(fā)生，但腫瘤不是隨時發(fā)生。免疫缺陷與腫瘤發(fā)生免疫功能與腫瘤發(fā)展腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)（2）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生腫瘤監(jiān)控失常原因識別問題腫瘤自身免疫細(xì)胞隱蔽抗原來源與正常細(xì)胞相同抗原遞呈功能缺失無視腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)（2）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生腫瘤監(jiān)控失常原因殺傷問題腫瘤自身免疫細(xì)胞殺傷免疫細(xì)胞抑制因子功能異常抑制性免疫細(xì)胞腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容診斷預(yù)后評估判定治療效果分子內(nèi)容基因突變基因表達(dá)有無類型位置效應(yīng)有無水平效應(yīng)臨床應(yīng)用檢測技術(shù)PCR基因測序蛋白芯片核酸雜交免疫化學(xué)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容樣本內(nèi)容與遺傳有關(guān)的基因突變檢測技術(shù)PCR基因測序蛋白芯片基因測序免疫化學(xué)血液腫瘤組織血漿DNA變化血漿變中癌基因表達(dá)檢測腫瘤標(biāo)志物的檢測腫瘤細(xì)胞的基因突變腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)腫瘤細(xì)胞的蛋白表達(dá)PCR腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容腫瘤標(biāo)志物的檢測

1978年Herberman在美國國立癌癥研究所召開的人類腫瘤免疫診斷會上提出的。由腫瘤組織和細(xì)胞產(chǎn)生的與腫瘤的形成、發(fā)生相關(guān)的物質(zhì),這些物質(zhì)存在于腫瘤細(xì)胞的胞核、胞質(zhì)、胞膜上或體液中；不存在于正常成人組織而見于胚胎組織,或在腫瘤組織中含量超過正常含量。存在于腫瘤患者的組織、體液和排泄物中，能夠用免疫學(xué)、生物學(xué)及化學(xué)的方法檢測。

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容腫瘤標(biāo)志物的檢測理想的TM

特異性高，對腫瘤與非腫瘤鑒別的準(zhǔn)確性可100%。

敏感性高，能在極早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的存在，不漏診。

在體液中的濃度應(yīng)與瘤體大小、臨床分期密切相關(guān)，并可據(jù)此判斷預(yù)后。

半衰期短，可根據(jù)其水平的升降監(jiān)測治療效果及腫瘤是否復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。

檢測方法靈敏可靠，操作簡便，價格低廉。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容腫瘤標(biāo)志物的檢測腫瘤標(biāo)志物的測定：包括測定血液、尿液中蛋白質(zhì)（包括多肽）、脂類，糖類、核酸物質(zhì)。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容蛋白組學(xué)：引領(lǐng)21世紀(jì)生物科學(xué)1、蛋白檢測蛋白組學(xué)代表著對有機(jī)生物、器官和細(xì)胞器中所有蛋白的特性、分子量、結(jié)構(gòu)和生物化療、細(xì)胞功能加以明確同時了解這些特性在空間、時間或不同生理狀態(tài)下的變化腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容蛋白組學(xué)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容蛋白組學(xué)在分子水平上描述蛋白和DNA的特性是理清基因功能的關(guān)鍵基因組學(xué)蛋白組學(xué)DNAmRNAt-RNAt-RNAt-RNAt-RNA核糖體()蛋白CHOPO4()翻譯后修飾XX具有活性的蛋白腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容2、蛋白組學(xué)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容蛋白組學(xué)表面增強(qiáng)激光解吸離子化(SELDI)化學(xué)表面–蛋白表達(dá)譜:疏水性H50–C9鏈H4–C16鏈陽離子WCX2-羧酸鹽金屬離子親和層析金屬螯合物(Cu,Ni,Zn,Ga,Mn,…)常態(tài)NP20–SiO2陰離子SAX2–4O

銨鹽PS-10orPS-20蛋白耦合抗體–抗原受體–配體DNA–蛋白生物表面–蛋白相互作用檢測:腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容2、蛋白組學(xué)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容蛋白組學(xué)通過比較蛋白圖譜可以容易地找出標(biāo)志物SELDI技術(shù)比2DPAGE速度快，可重復(fù)性高這一技術(shù)用以發(fā)現(xiàn)多種疾病的生物標(biāo)志物，如卵巢癌、乳腺癌、前列腺和膀胱癌腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容2、蛋白組學(xué)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容蛋白組學(xué)FDA于2009年9月11日批準(zhǔn)了OVA1試驗(yàn)

首個FDA獲準(zhǔn)的基于蛋白水平的體外診斷多因素指數(shù)檢測首個FDA獲準(zhǔn)的用于卵巢癌術(shù)前和術(shù)后的預(yù)后檢測在血標(biāo)本中檢測5個蛋白

SELDI技術(shù)篩選出β2-微球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、載脂蛋白A1、甲狀腺素運(yùn)載蛋白CA125預(yù)測良惡性可能腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容蛋白組學(xué)將生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)從實(shí)驗(yàn)室開拓到臨床應(yīng)用中基于一項(xiàng)前瞻性雙盲的臨床研究，納入27個機(jī)構(gòu)共516例患者269例患者只根據(jù)手術(shù)前信息進(jìn)行評估247例患者根據(jù)手術(shù)前信息和OVA1結(jié)果進(jìn)行評估OVA1檢測能識別出額外的潛在惡性腫瘤患者能夠在盆腔包塊中檢查出是否罹患卵巢癌，并確定是否需要手術(shù)治療，幫助病人和醫(yī)護(hù)人員確定屬于什么類型的手術(shù)，以及應(yīng)該由誰負(fù)責(zé)實(shí)施。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤的分子診斷內(nèi)容2、核酸檢測

血漿DNA(plasmaDNA)又被稱為循環(huán)DNA(circulatingDNA),是存在于循環(huán)血液中的細(xì)胞外DNA(cell-freeDNA),它可以以DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的形式存在,也可以游離DNA片斷形式存在。由于健康狀態(tài)下少量衰老死亡(壞死或凋亡)細(xì)胞的DNA的釋放,健康人血液中存在一定量的游離DNA。同時,由于健康狀態(tài)下,循環(huán)DNA的生成與清除處于動態(tài)平衡狀態(tài),因此對于健康人而言,血液中循環(huán)DNA的水平能夠維持在一個比較恒定的低水平。循環(huán)DNA能反映人體內(nèi)新陳代謝的狀況,是健康評判的一個重要指標(biāo)。近年來的研究表明,人外周血液中的血漿循環(huán)DNA量和質(zhì)的改變與多種疾病(包括腫瘤、復(fù)合性嚴(yán)重外傷、器官移植、妊娠相關(guān)疾病、感染性疾病、器官衰竭等)關(guān)系密切,因此血漿DNA作為一種無創(chuàng)性檢測指標(biāo),有望成為某些疾病早期診斷、病程監(jiān)測、療效及預(yù)后評估的一種重要的分子標(biāo)志物。

（1）、血漿DNA含量檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（1）、血漿DNA含量檢測血漿DNA濃度檢測研究發(fā)現(xiàn)，正常健康人群循環(huán)系統(tǒng)游離DNA平均約為7ng/ml；腫瘤患者循環(huán)系統(tǒng)游離DNA水平明顯升高，可達(dá)到29ng/ml；術(shù)后游離DNA水平迅速下降至18ng/ml，并隨病情的好轉(zhuǎn)進(jìn)一步下降。這種游離DNA的升高可發(fā)生在腫瘤早期，出現(xiàn)于臨床癥狀發(fā)生之前。由于血清標(biāo)本來源方便和非侵入性等優(yōu)點(diǎn)，因此血液中游離DNA定量檢測可預(yù)測受檢者早期腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，從而采取有針對性的預(yù)防和治療措施。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（1）、血漿DNA含量檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（1）、血漿DNA含量檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容血漿DNA基因檢測①檢測DNA甲基化包括P16基因、MGMT基因、DAPK基因、TMS1基因、RASSF1A基因。②檢測基因突變：K-RAS基因突變、P53基因突變、FHit基因突變。③微衛(wèi)星檢測：MSA-2,3,4,5,12,16檢測（1）、血漿DNA含量檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容血漿RNA檢測

檢測HER2/NEU以及HNrnp-b-1基因，文獻(xiàn)報(bào)道聯(lián)合兩種基因可以發(fā)現(xiàn)100%肺癌患者。（1）、血漿DNA含量檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（2）、基因組檢測

科學(xué)家們預(yù)計(jì)，當(dāng)完成了人類基因組項(xiàng)目之后應(yīng)該能夠發(fā)現(xiàn)一些與人體常見疾病和性狀相關(guān)的遺傳信息。但人類基因組圖譜公布之后大家突然發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)實(shí)與預(yù)期的完全不同，科學(xué)家們居然一無所獲。但我們真的就不能從人類基因組圖譜當(dāng)中發(fā)現(xiàn)一點(diǎn)有價值的東西嗎？腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤的分子診斷內(nèi)容4、基因組檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（2）、基因組檢測Dual-specificityphosphatase6(DUSP6),monocyte-to-macrophagedifferentiationassociatedprotein(MMD),signaltransducerandactivatoroftranscription1(STAT1),v-erb-b2avianerythroblasticleukemiaviraloncogenehomolog3(ERBB3),lymphocyte-specificproteintyrosinekinase(LCK).結(jié)論五個基因指紋與非小細(xì)胞肺癌的無復(fù)發(fā)生存期和總生存期密切相關(guān)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤的分子診斷內(nèi)容4、基因組檢測根據(jù)五個基因指紋RT-PCR檢測的不同結(jié)果，用Kaplan-Meier法分析非小細(xì)胞肺癌患者的生存時間

Overallsurvivalandrelapse-freesurvivalareshownforthe101patientswithNSCLC(PanelAandPanelB,respectively)andforthe59patientswithstageIorIIdisease(PanelCandPanelD,respectively).Overallsurvivalisalsoshownfortheindependentcohortof60patients(PanelE),forthe42patientsinthiscohortwhohadstageIorIIdisease(PanelF),andforthe86patientsdescribedinanindependentsetofpublishedNSCLCmicroarraydata10(PanelG).腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容4、基因組檢測70個預(yù)后相關(guān)基因表達(dá)譜監(jiān)督分析van′tVeeretal.,Nature415,p.530-536,200270個與預(yù)后顯著相關(guān)的基因腫瘤標(biāo)本腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展細(xì)胞增殖血管新生與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附局部侵犯進(jìn)入血管內(nèi)、存活、外滲細(xì)胞增殖與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附未知功能的基因

(25)70個預(yù)后相關(guān)基因與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)各個方面均有關(guān)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容4、基因組檢測良好預(yù)后組患者沒有一例復(fù)發(fā)MammaPrint:良好預(yù)后組 (n=23)不良預(yù)后組 (n=144)StraverMetal,BritCancerResTreat2009如何評估乳腺癌患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)傳統(tǒng)病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)OncotypeDX基因組學(xué)時代的新工具…年齡腫瘤大小淋巴結(jié)狀態(tài)ER/PR

HER2腫瘤分期輔助化療

基于電腦模式細(xì)胞增殖Ki-67STK15SurvivinCyclinB1MYBL2雌激素ERPRBcl2SCUBE2細(xì)胞侵潤Stromelysin3CathepsinL2HER2GRB7HER2BAG1GSTM1參考基因Beta-actinGAPDHRPLPOGUSTFRCCD68Paiketal,NEJM2004;351:2817-2616個腫瘤基因和5個參考基因構(gòu)成了OncotypeDX基因組，根據(jù)這些基因的表達(dá)情況計(jì)算復(fù)發(fā)指數(shù)：OncotypeDX21-基因復(fù)發(fā)指數(shù)腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（2）、基因組檢測

低復(fù)發(fā)指數(shù)（RS）與最小化療獲益相關(guān)； 高復(fù)發(fā)指數(shù)（RS）與較好的化療獲益相關(guān)。

OncotypeDX復(fù)發(fā)指數(shù)提供了簡潔、定量的個體預(yù)后信息，是具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、與患者年齡、腫瘤大小和腫瘤分期分級無關(guān)的獨(dú)立指標(biāo)。OncotypeDX腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（3）、microRNA檢測非編碼-RNA：曾經(jīng)被認(rèn)為是毫無意義的「多余物」tRNArRNAsnRNAtmRNARnasePRNAvRNAsgRNAsMRPRNASRPRNAs端粒酶RNA轉(zhuǎn)錄/染色體結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)因子轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子蛋白功能調(diào)節(jié)因子RNA/蛋白定位調(diào)節(jié)因子RNA轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)RNA

miRNAsiRNA

piRNA

反義

RNA編碼蛋白的mRNA非編碼RNA轉(zhuǎn)錄核仁小RNAs管家

RNAs非編碼-RNA在復(fù)雜的基因組學(xué)中起重要作用

microRNA（miRNA）是長度在18～25個核苷酸左右的內(nèi)源性非編碼小分子RNA。miRNA在進(jìn)化上高度保守，具有轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控功能。它由基因組DNA編碼，在RNA聚合酶II的作用下被轉(zhuǎn)錄。這些小分子通過RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNA-inducedsilencingcomplex,RISC）靶向到達(dá)mRNA，進(jìn)而行使阻遏翻譯或引導(dǎo)酶切的功能。最近有研究表明，miRNA具有多種生物學(xué)功能，如調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育、分化、增殖、凋亡等。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容MiRNA生物合成基本過程MiRNA調(diào)控基因表達(dá)兩種機(jī)制ChoWC.MicroRNAs:potentialbiomarkersforcancerdiagnosis,prognosisandtargetsfortherapy.IntJBiochemCellBiol2010.Cho

WC.OncomiRs:thediscoveryandprogressofmicroRNAsincancers.MolCancer2007;6:60.腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷BRCA1andBRCA2arehumangenesthatbelongtoaclassofgenesknownastumorsuppressors.

Innormalcells,BRCA1andBRCA2helpensurethestabilityofthecell’sgeneticmaterial(DNA)andhelppreventuncontrolledcellgrowth.Mutationofthesegeneshasbeenlinkedtothedevelopmentofhereditarybreastandovariancancer.

ThenamesBRCA1andBRCA2standforbreastcancersusceptibilitygene1andbreastcancersusceptibilitygene2,respectively.

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷Clonedin1995(Woosteret

al.)Mappedtochromosome13q12-1310,254kb(3,418aa)27exonsClonedin1995(Woosteretal.)Mappedtochromosome13q12-1310,254kb(3,418aa)27exons腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷ScreeningforBreastCancerMonthlybreastself-examClinicalbreastexamevery6months>25AnnualMammogram>25,Bi-annual>50Discuss+/-ofprophylacticmastectomywithMDScreeningforOvarianCancerAtleastannualrectovaginalpelvicexamCA125andtransvaginalultrasoundProphylacticbilateraloophorectomybyage35腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷乳腺癌基因檢測的意義

降低風(fēng)險(xiǎn)，安全更放心

保乳手術(shù)的術(shù)式選擇：BRCA突變攜帶者乳腺癌復(fù)發(fā)或?qū)?cè)乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)可高達(dá)70%-80%，因此基因突變攜帶者不宜做保乳手術(shù)，還是以乳腺切除術(shù)為好。某些婦女可預(yù)防切除另一側(cè)乳腺。

關(guān)心自己，更關(guān)愛家人

遺傳性乳腺癌并非不可預(yù)知，關(guān)鍵在于加強(qiáng)監(jiān)測、早期診斷、早期治療。如果檢出BRCA突變，可盡早采取有效的防治措施，降低癌癥危險(xiǎn)度，保障健康人生，同時，可以告知家族成員接受BRCA檢測，了解自身癌癥風(fēng)險(xiǎn)。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容（4）腫瘤分子遺傳學(xué)診斷乳腺癌遺傳檢測適宜人群(如果有以下因素，強(qiáng)烈建議接受乳腺癌BRCA檢查)

一個或多個直系親屬有乳腺癌史，如母親或姐妹

家族成員里有早發(fā)乳腺癌患者，發(fā)病年齡早于40歲

家族成員里兩代以上出現(xiàn)乳腺癌患者

家族成員有雙側(cè)乳腺癌患者

家族成員里有卵巢癌患者

家族成員有男性成員乳腺癌患者

一個或多個家族成員攜帶BRCA基因突變，即遺傳檢測陽性腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容9種預(yù)防癌癥的生活方式

1、盯住你的身體質(zhì)量指數(shù)BMI：亞洲人最好將身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）控制在18.5至22.9之間。BMI計(jì)算方式為《體重（公斤）》÷《身高（公尺）平方》。

2、每天流汗30分鐘：這是最經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的防癌方法。運(yùn)動可以調(diào)整血液中睪固酮與雌激素，保護(hù)女性對抗與荷爾蒙相關(guān)的癌癥。

3、喝綠茶或咖啡：綠茶含有兒茶素及維生素A、C等抗氧化劑因此有防癌功效，咖啡也可以降低某些癌癥發(fā)生率。

4、新鮮蔬果：建議青少年及成年人，應(yīng)每天攝食9份蔬果。蔬菜類1份約為生重100公克，水果類約為150公克。

5、跳開脂肪誘惑：美國國家科學(xué)院報(bào)告指出，所有飲食構(gòu)成要素中，脂肪與癌癥關(guān)系最強(qiáng)烈，特別是乳癌、大腸癌。

6、多吃雞、魚，少量吃豬；戒煙、戒酒、戒檳榔

7、少鹽、不喝含糖飲料：每天攝取的鹽不超過6公克，少喝含糖分飲料，喝白開水最理想，天然果汁每天不超過150㏄，并且不吃發(fā)霉的谷類及豆類。

8、保持輕松的情緒減少壓力：心情郁卒容易誘發(fā)癌癥，許多罹癌的人回顧發(fā)病前兩、三年，常是身心處于壓力的狀態(tài)。

9、喂母乳：建議母親至少喂6個月母乳。研究指出，喝母乳的寶寶將來罹患血癌風(fēng)險(xiǎn)比較低，媽媽則可得到降低乳癌風(fēng)險(xiǎn)的好處。

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控1、靶向治療

隨著人類基因組學(xué)、藥物基因組學(xué)及腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷深入和發(fā)展，腫瘤治療性藥物的開發(fā)從傳統(tǒng)的廣譜藥向特異性更強(qiáng)的靶向藥發(fā)展。與此同時，傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)治療、同病同治也正逐漸向個體化治療轉(zhuǎn)變。個體化治療已經(jīng)成為腫瘤臨床治療的發(fā)展方向和最有效的手段。大量的臨床研究和試驗(yàn)結(jié)果表明：特異腫瘤分子標(biāo)志物（靶標(biāo)）是識別患者個體差異的重要依據(jù)，實(shí)現(xiàn)對這些腫瘤靶標(biāo)的檢測是個體化治療的前提和基礎(chǔ)。對癌癥患者檢測相關(guān)基因的表達(dá)狀態(tài)，已成為靶向治療藥物治療腫瘤的必要前提。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控1、靶向治療腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細(xì)胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控

臨床試驗(yàn)表明易瑞沙和特羅凱僅對10-30%的NSCLC病人有顯著療效。研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變與NSCLC靶向治療的療效具有相關(guān)性，絕大多數(shù)攜帶EGFR基因突變的病人療效顯著。

突變可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對TKI的敏感性，并且可作為TKI治療的有效預(yù)測指標(biāo)。因此，檢測EGFR基因突變對于指導(dǎo)NSCLC病人臨床用藥具有重要的參考價值。

《2010年NCCN非小細(xì)胞肺癌臨床實(shí)踐指南》明確指出：當(dāng)K-ras基因如果發(fā)生了突變，則不建議病人使用特羅凱（Tarceva/厄洛替尼/Erlotinib）進(jìn)行分子靶向治療。因此在應(yīng)用靶向肺癌治療之前進(jìn)行EGFR、K-RAS基因突變檢測十分必要腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR18基因外顯子核苷酸序列檢測圖譜腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR基因19外顯子核苷酸序列檢測圖譜腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR基因20外顯子核苷酸序列檢測圖譜腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR基因21外顯子核苷酸序列檢測圖譜腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細(xì)胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測棘皮動物微管相關(guān)蛋白樣4（EML4）編碼蛋白N-末端部分融合至間變淋巴瘤激酶(ALK)的細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，重排為EML4-ALK，導(dǎo)致異常酪氨酸激酶表達(dá)。2007年Soda首次在非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后標(biāo)本中檢測到EML4-ALK重排融合。此后，美國、日本、韓國及中國香港均有報(bào)道，但在未經(jīng)選擇的NSCLC中，EML4-ALK陽性檢出率較低，約1.5-6.7%。初步的分組研究表明,在滿足：1、EGFR陰性，2、不吸煙或少吸煙，3、肺腺癌的條件中,EML4-ALK融合基因陽性率相對較高，可達(dá)到13%-23%。

EML4-ALK陽性者的某些特征與EGFR突變者相似，但前者不能從EGFR-TKI靶向治療中獲益，因而對這部分患者的治療策略需要轉(zhuǎn)變。在剛剛落幕的第46屆ASCO年會上，Bang等報(bào)告了Crizotinib（PF02341006）治療晚期NSCLC的臨床試驗(yàn)結(jié)果，針對ALK基因的小分子抑制劑Crizotinib在Ⅰ期臨床試驗(yàn)中就顯示出良好療效。研究者認(rèn)為，對于攜帶EML4-ALK融合基因的MSCLC患者，Crizotinib治療的緩解率高，且安全性良好。目前，Crizotinib相關(guān)的多項(xiàng)臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中，我們期待分子靶向治療的又一新成員早日面世。

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細(xì)胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測非小細(xì)胞肺癌臨床腫瘤分子研究的最新結(jié)果，表明EML4-ALK是對NSCLC基因變異分步檢測的進(jìn)一步豐富和完善，根據(jù)針對非小細(xì)胞肺癌所開展的靶向治療EGFR、K-RAS檢測項(xiàng)目，結(jié)合EML4-ALK融合基因分子檢測，對擬行TKI治療的患者，可以首先檢測KRAS突變狀態(tài)，排除陽性后對KRAS陰性者進(jìn)行EGFR突變檢測；若EGFR突變陽性，選擇TKI治療，陰性則繼續(xù)行EML4-ALK檢測；若EML4-ALK陽性者，可嘗試針對ALK的靶向治療。本中心希望在非小細(xì)胞肺癌人群分子分型不斷完善的基礎(chǔ)上，具備不同分子特征的患者得以接受最個體化的治療。

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控K-RAS、BRAF基因突變檢測不能應(yīng)用靶向藥物EGFR檢測突變無突變突變應(yīng)用靶向藥物Eml4-ALK基因檢測無突變陰性陽性靶向ALK分子治療腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細(xì)胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控大腸癌靶向治療敏感性基因檢測

針對晚期結(jié)直腸癌的分子靶向藥物貝伐單抗、西妥昔單抗、帕尼單抗已被批準(zhǔn)用于臨床，比傳統(tǒng)藥物更有效，且副作用更小，有效地延長了轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者的生存期。2007年及2008年多項(xiàng)Ⅲ期臨床研究的回顧性分析顯示，西妥昔單抗或帕尼單抗無論單藥或聯(lián)合化療僅對K－RAS基因野生型的結(jié)直腸癌患者有效。K－RAS基因成為第一個結(jié)直腸癌靶向治療的重要分子標(biāo)志物。

2008年10月，K－RAS基因檢測被寫入最新版(2008年第3版)《美國國立癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)(NCCN)結(jié)直腸癌臨床實(shí)踐指南》。新指南傳遞給廣大醫(yī)師和患者兩條重要的信息:一是所有轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者都應(yīng)檢測K－RAS基因狀態(tài)；二是只有K－RAS野生型患者才建議接受EGFR抑制劑，如西妥昔單抗和帕尼單抗(包括單藥或與化療聯(lián)合)治療。

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控大腸癌靶向治療敏感性基因檢測

目前在歐美等發(fā)達(dá)國家，K-RAS基因檢測已經(jīng)成為大腸癌患者治療前必做的常規(guī)檢查，是目前醫(yī)生了解大腸癌患者癌基因狀況最直接、最有效的方法，并且成為能否報(bào)銷相關(guān)抗EGFR治療費(fèi)用的依據(jù)。

K-RAS基因檢測可以篩選出對抗EGFR(表皮生長因子受體)靶向藥物治療有效的大腸癌患者，實(shí)現(xiàn)腫瘤病人的個體化治療，從而達(dá)到良好的預(yù)后。早期檢測K-RAS還可以通過該基因的狀態(tài)了解到病人的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，為將來選擇最佳治療做好準(zhǔn)備。

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控大腸癌靶向治療敏感性基因檢測K-ras基因第2外顯子核苷酸序列檢測圖譜K-ras基因第2外顯子核苷酸序列檢測圖譜

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控乳腺癌靶向治療敏感性基因檢測

Her-2屬于表皮生長因子受體酪氨酸激酶家族成員，為原癌基因編碼的具有受體酪氨酸激酶(RTK)活性的跨膜糖蛋白，參與調(diào)控細(xì)胞生長、增殖和分化。25%~30%的乳腺癌為Her-2基因的擴(kuò)增/過度表達(dá)。

赫塞汀是一種人源化的HER-2單克隆抗體，可有效阻礙HER2過度表達(dá)導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞生長。無論是單獨(dú)使用、與標(biāo)準(zhǔn)化療聯(lián)合、還是在標(biāo)準(zhǔn)化療之后使用，赫賽汀均能提高治療反應(yīng)率、無病存活期以及整體存活期，毒副反應(yīng)小，患者耐受性好，較好地保證了HER2陽性乳腺癌婦女的生活質(zhì)量。

腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控乳腺癌靶向治療敏感性基因檢測Her-2擴(kuò)增的患者預(yù)后更差：

Her-2基因是一個重要的臨床預(yù)后指標(biāo)。具有Her-2基因擴(kuò)增的乳腺癌患者無病生存期(DFS)和總生存期(OS)縮短，腫瘤負(fù)荷更大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移幾率高，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高。

指導(dǎo)內(nèi)分泌治療藥物的選擇：

相對于無Her-2基因擴(kuò)增的乳癌患者而言，具有Her-2基因擴(kuò)增的患者應(yīng)用他莫昔芬(TAM)治療后的死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增高。提示具有Her-2基因擴(kuò)增的患者可能不適合應(yīng)用TAM作為內(nèi)分泌治療的選擇。對ER陽性的絕經(jīng)后患者，HER-2陽性者，來曲唑的療效明顯高于TAM。來曲唑?qū)ER-2陽性患者的療效優(yōu)于陰性患者；TAM則相反，對HER-2陰性患者的療效明顯高于陽性患者。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控乳腺癌靶向治療敏感性基因檢測Her-2擴(kuò)增患者輔助化療藥物的選擇：

Her-2擴(kuò)增的乳腺癌患者對CMF化療方案的反應(yīng)性降低；

Her-2擴(kuò)增的患者，對高劑量強(qiáng)度的蒽環(huán)類藥物方案敏感；

Her-2陽性的乳腺癌患者對紫杉醇化療的反應(yīng)性明顯高出HER-2陰性的患者。

篩選靶向治療藥物Hercepetin的使用者：

分子靶向治療藥物Trastuzumab/Herceptin對具有HER-2基因擴(kuò)增的患者具有良好的治療效果，而對于17號染色體非整倍體導(dǎo)致的HER-2基因數(shù)目相應(yīng)的增加及不擴(kuò)增的患者效果不佳。腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控Her2(-)Her2(+)FISH腫瘤臨床分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控甲狀腺癌治療相關(guān)基因檢測甲狀腺癌發(fā)病機(jī)制中，基因突變在甲狀腺癌的發(fā)生過程中占有重要的地位，其中BRAF是甲狀腺癌最常見的分子遺傳學(xué)改變。BRAF基因編碼蛋白是MAPK信號傳導(dǎo)通路RAS→RAF→MEK→ERK中的重要激酶，15外顯子的單個堿基錯義突變（T1799A）導(dǎo)致翻譯蛋白質(zhì)600位密碼子的纈氨酸（Valine）被谷氨酸（Glutamate）替換，成為活化蛋白質(zhì)激酶（BRAFV600E）。BRAF激酶的持續(xù)活化，導(dǎo)致MEK(細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶)持續(xù)磷酸化，MAPK信號傳導(dǎo)通