顯微技術(shù)作業(yè)課后作業(yè)C

生物電子顯微技術(shù)作業(yè)課后作業(yè)C1.簡述超高壓電子顯微鏡的長處，以及切片與一般超薄切片的不一樣。答：超高壓電鏡不只分辨率高、單色性好，并且電子穿透力強，對資料的損害較小，能夠察看較厚的資料μm)，場深大，成像有立體感，并且不會影響分辨率。主要用于觀察資料、礦物、生物樣品、器件透射電子顯微象及電子衍射圖，對樣品微觀組織、構(gòu)造、缺點等定性、定量剖析?？蓪悠吩诩訜?、拉伸、電子輻照等條件下微觀組織的變化過程進行動向觀察。一般透射電鏡察看樣品時，電子束無法穿過mm以上的切片，所以需將樣品切成50~70nm的薄片才能察看。與光鏡察看的3~7mm切片對照而言，常將透射電鏡的切片稱為超薄切片。用于超高壓電鏡的厚切片制備與一般超薄切片相像，不過有一些特別要求:其切片資料的制備與一般電鏡有所不一樣。樣品塊要相對軟一些，以保護刀口和便于制作連續(xù)切片。覆蓋的支持膜要厚，并噴碳加固，以抗高壓電子轟擊。采納折疊式載網(wǎng)或單縫載網(wǎng)，以防切片零落和阻攔視線。采納淹無法染色，并合適延伸染色時間。包埋前可先進行整體染色。比較透射電鏡與掃描電鏡在察看成效和研究用途上的不一樣它們各自的優(yōu)弊端是什么透射電鏡掃描電鏡察看成效電子顯微鏡是使用電子來展現(xiàn)它能夠直接察看直徑物品的內(nèi)部或表面的顯微鏡。100mm，高50mm，或更大高速的電子的波長比可見光的尺寸的試樣，對試樣的形波長短（波粒二象性），而顯狀沒有任何限制，粗拙表微鏡的分辨率受其使用的波長面也能察看，這便免去了的限制，所以電子顯微鏡的理制備樣品的麻煩，并且能論分辨率（約納米）遠高于光真切察看試樣自己物質(zhì)學(xué)顯微鏡的分辨率（約200納成分不一樣的襯度（背反射米）。分辨率為～，放大倍數(shù)電子象）。分辨率可達為幾萬～幾十萬倍3-10nm,放大倍數(shù)可達10萬倍研究用途用以察看為亞顯微構(gòu)造或超微主假如用來察看物體表構(gòu)造。面超微形態(tài),合適察看固察看樣品容貌、原位剖析樣品態(tài)的生物資料,也能夠觀的晶體構(gòu)造察生物資料斷面或剝蝕面的構(gòu)造（亞細胞形態(tài)），可是需要早先進行切割或蝕刻辦理。有時甚至也可進行細胞化學(xué)標志物的形態(tài)察看。因為擁有很高的分辨率，多以被寬泛用于察看納米資料。長處1.制樣過程對芯片內(nèi)部構(gòu)造影1.擁有很高的分辨率響較小2.制樣方便，制樣周期2.透射電子穿過樣品內(nèi)部，同短，有時能夠作非損壞性樣品內(nèi)部的全部東西發(fā)生互相的剖析作用，進而直接獲取內(nèi)部構(gòu)造3.察看范圍大，倍率變化信息，所以獲取綜合的高分辨大，立體感強，景深大，率結(jié)果察看成效好3.易于調(diào)整，經(jīng)過改變線圈中流過電流的強度，能夠改變磁場強度，達到變化折射率和焦距的目的4.像差較小，且較為簡單除去或校訂5.對電子束流的能量消耗小弊端1.構(gòu)造復(fù)雜，對制作資料的純1.只好在樣品表面掃描，度、元件幾何形狀尺寸的加工信號來自樣品表面，不可以精細度等都要求極高獲取樣品內(nèi)比較深的部2.制樣的技術(shù)難度大，察看點位的狀況的定位難，有時需借用聚焦離2.顯微像一般不包含結(jié)子束刻蝕才能達成構(gòu)信號，不可以劃分單晶、3.剖析周期長多晶、非晶，不可以劃分位4.成本較高錯、層錯、晶界等3.不合適厚度在微米以下的薄膜的剖析需求采納低溫辦理制作電鏡樣品的優(yōu)弊端是什么長處弊端固定形態(tài)和構(gòu)造，且固化構(gòu)造使之易低溫辦理仍舊不可以解決永遠活體，并且于進一步辦理制作過程簡單產(chǎn)生冷凍損害和干燥損2.在保留生物活性的基礎(chǔ)上儲藏生物傷。并且切片太厚，不可以做連續(xù)切片，資料并且簡單破裂。在制作冷凍超薄切片刻，不需經(jīng)化學(xué)藥劑固定、脫水、過渡、聚合等，減少了辦理過程造成的閻像為何要采納臨界點干燥來辦理掃描電鏡樣品哪些資料不用臨界點干燥來辦理也能獲取滿意的圖像答：臨界點干燥就是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)下，液體表面張力除去的特征，戰(zhàn)勝樣品干燥過程中所發(fā)生的變形，保持樣品原狀，達到干燥的目的。其原理是在必定的溫度和壓力下，物質(zhì)的液態(tài)隨和態(tài)界面將會消逝，液態(tài)瞬時轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)，形成非液非固的狀態(tài)，即達來臨界點（）狀態(tài)。在臨界點時，表面張力消逝，分子間的內(nèi)聚力等于零，所以，利用臨界點狀態(tài)對資料進行干燥，資料理論上不會產(chǎn)生縮短和形變，關(guān)于質(zhì)地較軟的資料這類方法是最好的干燥方法。所以說，關(guān)于比較堅硬的資料，實時不使用臨界點干燥法也能夠?qū)崿F(xiàn)較好的圖像察看。查找采納了低溫制樣技術(shù)的研究文件，收集精巧圖片，剖析這些工作的技術(shù)難點和發(fā)布圖片的質(zhì)量。答：技術(shù)難點：1、冰晶冰晶是組織在冷凍固化過程中,因為冷凍遲緩,冷凍時間過長,使細胞質(zhì)和組織空隙內(nèi)未聯(lián)合的水漸漸析出形成解決方法:取材大小、厚薄要適合,過大過厚影響冷凍速度。2、組織擠壓、皺縮。常有于組織構(gòu)造軟硬不一樣的組織，如皮膚。解決方法：將表皮面放在標本的上端,先切較軟的皮下組織,挨次切真皮、表皮,同時用毛筆輕輕睜開,或用抗卷板才能切出完好的切片3、冷凍切片一般不會脫片,偶見于壞死組織或含水量大的組織,如子宮肌瘤粘液變性時。解決方法:第一切片不可以太厚,其次切片固定后用吹風(fēng)機吹干再染色。4、甲狀腺等有腔洞的組織，組織冷凍過頭,使之發(fā)脆就會破裂形成空洞,這時可用手貼在組織上或用嘴向組織哈氣略加溫使其融化即可切出完好的切片。5、組織貼附不平或許有皺褶切片切好后用載玻片貼片刻手不可以發(fā)抖,并且在貼附組織時手要有一個向下伸展的動作。文件一密方元,李鳳山,馬邦磊,錢寧.冷凍切片5min迅速制片染色法.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2009，Oct25.圖1A入口OCT包埋的腮腺混淆瘤冷凍切片B膠片包埋的腮腺混淆瘤冷凍切片圖2腎粗針穿刺小標本,先制成冷凍圖3脂肪組織冷凍切片,脂肪細胞組織構(gòu)造平后做冷凍切片,保持了組織保持完好，細胞界限清楚，染色嬌艷圖4甲狀腺組織,HE染色前未經(jīng)二圖5甲狀腺組織,HE染色前經(jīng)二甲苯脫脂甲苯脫脂辦理,胞核較模糊辦理后，胞核、質(zhì)構(gòu)造清楚、透明我以為這幾張圖片比較好，清楚，甲狀腺組織切片中破裂形成空洞，染色很平均。文件二胥維勇，楊紅，李科，楊群.介紹一種FAAPT冷凍切片迅速固定液.臨床與實驗病理學(xué)雜志.2002Apr;18綱要手術(shù)中冷凍切片的病理診療是依據(jù)冷凍切片組織學(xué)形態(tài)來進行,以確立病變組織的良惡性為目的。制作冷凍切片包含制片、固定、染色三個環(huán)節(jié),在冷凍切片中固定液的選擇是不行忽略的一個要素。我們在工作中經(jīng)頻頻試驗在眾多固定液中選擇FAA液(福爾馬林-醋酸-乙醇),經(jīng)改進配成一種合