i第九章 維生素類藥物

Theanalysisofvitamins

—Chapter9

維生素類藥物的分析

—第九章TheanalysisofvitaminATheanalysisofvitaminETheanalysisofthiamine(B1)TheanalysisofL-ascorbicacid(C)Thestructuresofothervitamins基本要求

掌握維生素A的結(jié)構(gòu)，主要化學(xué)性質(zhì)、鑒別反應(yīng)及含量測定中的紫外分光光度法了解三氯化銻比色法掌握維生素E的結(jié)構(gòu)、主要化學(xué)性質(zhì)、鑒別反應(yīng)及含量測定中的氣相色譜法了解其他含量測定的方法掌握維生素B1結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、鑒別試驗(yàn)及含量測定方法中的非水滴定法了解其他含量測定方法掌握維生素C結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、鑒別試驗(yàn)及含量測定中的碘量法了解其他含量測定方法了解HPLC在復(fù)方維生素測定中的應(yīng)用

FundamentalrequirementMasteringthestructures,themainchemicalproperties,identificationtestsandtheapplicationofUVspectroscopyinassaysofvitaminA.Understandingthecolorimetricmethodofantimonicchloride.Masteringthestructure,themainchemicalproperties,identificationtestsandtheapplicationofGCinassaysofvitaminE.UnderstandingotherassaysofvitaminE.Masteringthestructure,properties,identificationtestsandthenon-aqueoustitrationofthiamine.Understandingotherassaysofthiamine.Masteringthestructure,properties,identificationtestsandtheiodometrictitrationofL-ascorbicacid.UnderstandingotherassaysofL-ascorbicacid.UnderstandingtheapplicationofHPLCincompoundvitaminsanalysis.TheanalysisofvitaminAStructureandpropertiesStructureThephysicalandchemicalpropertiesIdentificationtestsAssaysUltravioletabsorptionmethod(three-pointgeometriccorrectionmethod)colorimetricmethodofantimonicchloride—Section1StructuresRetinolanditsesters共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯CrystalformREmpiricalformulaMolecularweightMeltingpoint－H（Retinol）

－COCH3(Retinylacetate)－COC15H31(RetinylPalmitate)C20H30OC22H32O2C36H60O2

286.44328.48524.84PaleyellowprismsAmorphismorcrystal

62～64℃57～58℃28～29℃1.Ultravioletabsorption維生素A分子中具有共軛多烯醇側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在325～328nm有強(qiáng)烈最大吸收。2.Easilyoxidation維生素A中有多個不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被氧化，易被紫外光裂解，特別在加熱和金屬離子存在時，更易氧化變質(zhì)，生成無生物活性的環(huán)氧化物維生素A醛及維生素A酸。3.Colorreactionwithantimonicchloride

維生素A在氯仿中能與三氯化銻試劑作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色4.Solubility維生素A能與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶PropertiesIdentificationtests1.Carr-Pricereaction(三氯化銻反應(yīng)）

維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液中，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。

Mechanismofreaction：.↑↓2.Ultravioletabsorptionspectrum

維生素A分子中含有5個共軛雙鍵，其無水乙醇溶液在波長326nm處有最大吸收峰。當(dāng)在鹽酸催化下加熱，則發(fā)生去水反應(yīng)生成脫水維生素A，比維生素A多一個共軛雙鍵，故其最大吸收峰往長波方向移動，同時在350nm～390nm波長之間出現(xiàn)3個最大吸收峰。

維生素A和去水維生素A的紫外吸收光譜1.維生素A2.去水維生素A3.Thin-layerchromatographyBP(1998)鑒別濃縮合成品維生素A（油劑）的各種酯類的方法:

以硅膠G為吸附劑，環(huán)己烷-乙醚（80：20）為流動相，以供試品與標(biāo)準(zhǔn)品的環(huán)己烷溶液點(diǎn)樣，以三氯化銻顯色，比較供試品溶液和對照品溶液所顯藍(lán)色斑點(diǎn)的位置，即可鑒別。

USP(24)采用的方法:以硅膠為吸附劑，環(huán)己烷-乙醚（80：20）為流動相，維生素A的氯仿溶液點(diǎn)樣，以磷鉬酸為顯色劑。

AssaysUltravioletabsorptionmethod

(three-pointgeometriccorrectionmethod)紫外分光光度法（三點(diǎn)校正法）Colorimetricmethodofantimonicchloride三氯化銻比色法UltravioletabsorptionmethodPrinciple

Thismethodisbasedonmeasurementofabsorptionofasolutionofretinolinisopropanolat325nm,whereabsorbanceismaximum.ThemethodisapplicabletopharmaceuticalpreparationsandvitaminAconcentratesinwhichvitaminAcontentisrelativelyhighandamountsofsubstancescausingirrelevantabsorptionarerelativelysmallandcanbecorrectedforbytakingadditionalreadingsat310nmand334nm.Caremustbeexercisedinusingthecorrectionsinceitdoesnotapplyforsomepreparations.Iftocopherolispresent(absorptionmaximum,298nm),acorrectionismadeemployingahydrogenationtechniquetodestroyabsorptionduetoretinol.Solutionswithappreciablecarotenoidsarepurifiedbychromatography,butcarotenoidsaregenerallynotaprobleminsamplestowhichthismethodisapplied.目前各國藥典均采用紫外分光光度法（三點(diǎn)校正法）測定維生素A的含量。維生素A在325～328nm波長之間具有最大吸收峰，可用以含量測定，其最大吸收峰的位置隨溶劑不同而異。維生素A醋酸酯維生素A醇溶劑λmax,nmE1%1cm

換算因數(shù)λmax,nm

E1%1cm

換算因數(shù)環(huán)己烷327.515301900326.517551900異丙醇3251600183032518201830本法的測定結(jié)果較能正確的反映出維生素A的真實(shí)生物效價。由于維生素A制劑中含有稀釋用油和維生素A原料中混有其他雜質(zhì)，所以，測得的吸收度不是維生素A所獨(dú)有。為了消出誤差，應(yīng)用校正公式進(jìn)行校正。

Method

如供試品中干擾測定的雜質(zhì)較少，可以直接用溶劑溶解供試品后測定。否則應(yīng)照皂化法測定含量。

原理：

雜質(zhì)的吸收在310～340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大吸收度變小。Theabsorptionofimpuritiesislinearbetween310nmand340nm.Theabsorbancedecreaseswhilethewavelengthincreases.物質(zhì)對光的吸收具有加和性。Theabsorptionhasadditivity.

三點(diǎn)波長的選擇法Threewavelengths

selection第1點(diǎn)：選擇維生素A的最大吸收波長（即λ1）第2點(diǎn)和第3點(diǎn)：在最大吸收波長的兩側(cè)各選一點(diǎn)（λ2和λ3）

等波長差法：在λ1的左右各選一點(diǎn)為λ2和λ3，使λ3-λ1＝λ1-λ2。中國藥典（2000年版）測定維生素A醋酸酯時，規(guī)定λ1＝328nm,λ2＝316nm,λ3＝340nm。

等吸收度法：在λ1的左右各選一點(diǎn)為λ2和λ3，使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1。中國藥典（2000年版）測定維生素A醇時，規(guī)定λ1＝325nm,λ2＝310nm,λ3＝334nm。

Theabsorptionofimpurities對維生素A的測定有影響的雜質(zhì)：維生素A2和維生素A3(dehydroretinolandanhydroretinol)：維生素A2在345～350nm波長范圍內(nèi)有吸收。維生素A的氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸。維生素A在光照下產(chǎn)生的無生物活性的聚合物鯨醇。維生素A的的異構(gòu)體。合成時產(chǎn)生的中間體。

這些雜質(zhì)在310～340nm波長范圍內(nèi)有吸收，因此，在測定維生素A的含量時，必須考慮這些雜質(zhì)的干擾。三點(diǎn)校正法可以消除這些雜質(zhì)的影響。

測定法

第一法（適用于維生素A醋酸酯）方法

計(jì)算法關(guān)于換算因數(shù)

A值的選擇法

第二法（適用于維生素A醇）

測定方法計(jì)算法A值的選用法

Method取維生素A醋酸酯，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml中含有9～15單位的溶液。在300、316、328、340、360nm五個波長處分別測定吸收值，確定最大吸收波長（應(yīng)為328nm）。計(jì)算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸收度的比值。

第一法但式中的A值有兩種可能，一是直接采用328nm波長下測得的吸收度值，即A328；另一種可能是采用吸收度校正公式計(jì)算出的校正值，即A328（校正）。求效價（IU/g）

效價系指每克供試品中所含維生素A的國際單位數(shù)（IU/g）。IU/g=E1%1cm×1900,式中1900為維生素A醋酸酯在環(huán)己烷溶液中的換算因數(shù)。

E1%1cm=

AC·L

求E1%1cm：用A=E1%1cm·C·L公式求得

（式一）Calculation第一法求維生素A醋酸酯膠丸為標(biāo)示量的百分含量：

標(biāo)示量%=

A×D×1900×W

W×100×L×標(biāo)示量

×100%

A為直接測得的A328或校正后的A328

D為供試品的稀釋倍數(shù)；1900為換算因數(shù)；W為膠丸的平均內(nèi)容物重量；W為稱取的內(nèi)容物重量；L為比色池厚度（cm）；

第一法

Conversionfactor

換算因數(shù)的定義為每1個E1%1cm數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r。即：

換算因數(shù)=

效價（IU/g）

E1%1cm（λmax）

維生素A的含量是用生物效價[國際單位（IU/g）]表示。維生素A的國際單位規(guī)定如下：1IU=0.344μg維生素A醋酸酯1IU=0.300μg維生素A醇因此，1g維生素A醋酸酯相當(dāng)于的國際單位數(shù)為：

1×106μg

0.344μg/IU

=2907000IU1g維生素醇相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為：

1×106μg

0.300μg/IU

=3330000IU

第一法

TheselectionofA將五個波長處吸收度比值（即Ai/A328）分別與中國藥典（2000年版）規(guī)定的吸收度比值相減，即得到五個差值。判斷每個差值是否超過規(guī)定的±0.02。

波長(nm)測得吸收度

吸收度比值兩個比值的差值

藥典規(guī)定值計(jì)算值（規(guī)定±0.02）

300A00.555A0/A2

316A10.907A1/A2

328A21.000A2/A2

340A30.811A3/A2

360A40.299A4/A2

第一法如果最大吸收波長在326～329nm之間，并計(jì)算得到的五個波長下的差值，均不超過±0.02時，則不用校正公式計(jì)算吸收度，而直接用在328nm波長處測得的吸收度A328代入（式一）求出E1%1cm。

如果最大吸收波長在326～329nm之間，但計(jì)算得到的波長下的差值，有一個或幾個超過±0.02，這時，應(yīng)按下面的方法判斷：

若A328（校正）－A328

A328×100%所得的數(shù)值在±3%，則仍不用校正公式計(jì)算吸收度，而直接用A328代入公式中求出E1%1cm；

判斷法第一法若A328（校正）－A328

A328×100%

所得的數(shù)值在－15%～－3%之間，則需用校正公式算吸收度，即用A328（校正）代入公式中求出E1%1cm；若A328（校正）－A328

×100%所得的數(shù)值小于－15%或大于＋3%，則不能用本法測定，而采用后面的第2法（皂化法）測定含量。A328第一法

如果最大吸收波長不在326～329nm之間，則不能用本法，而應(yīng)采用后面的第2法（皂化法）測定含量。用第2法測定

用A328（校正）計(jì)算

用A328計(jì)算

用第2法計(jì)算

第一校正法的公式為：

A328（校正）=3.52（2A328－A316－A340）

第一法±0.02－15%～－3%＋3%

用紫外分光光度法（三點(diǎn)校正法）測定維生素A醋酸酯膠丸含量時：取內(nèi)容物39.1mg，加環(huán)己烷溶解并稀釋至100ml，在下列波長下測定吸收度為：300nm：0.390；316nm：0.607；328nm：0.671；340nm：0.550；360nm：0.224。已知膠丸內(nèi)容物平均重量為0.08736g、膠丸標(biāo)示量為3000IU/丸。試求：標(biāo)示量%=？

第一法Exercises

Method精密稱取一定量供試品，加氫氧化鉀乙醇溶液后煮沸回流，得到皂化液。經(jīng)乙醚提取、洗滌、濾過、濃縮和干燥等處理，最后用異丙醇溶解殘?jiān)⑾♂尦擅?ml中含維生素A為9～15單位的溶液。在300、310、325、334nm四個波長處測定吸收度，并確定最大吸收波長（應(yīng)為325nm）。

第二法

公式中的A值，可能是325nm波長下測得的吸收度A325，也可能是用校正公式計(jì)算出的吸收度校正值A(chǔ)325（校正）。E1%1cm=

AC·L

求E1%1cm：用A=E1%1cm·C·L公式求得

（式一）求效價（IU/g）

求維生素A醇膠丸的標(biāo)示量百分含量：

IU/g=E1%1cm×1820標(biāo)示量%=

A×D×1820×WW×100×L×標(biāo)示量

×100%

第二法Calculation

TheselectionofA

如果最大吸收波長在323～327nm之間，而且A300/A325的比值小于或等于0.73，按下法判斷：1.若A325（校正）－A325

A325×100%所得的數(shù)值在±3%，則仍不用校正公式計(jì)算吸收度，而直接用A325代入（式一）中求出E1%1cm；

2.若所得的數(shù)值超過±3%，則需用校正公式計(jì)算吸收度，即用A325（校正）代入式中求E1%1cm。3.如果最大吸收波長不在323～327nm之間或A300/A325的

比值，大于0.73時，表示供試品中雜質(zhì)含量過高，應(yīng)采用色譜法將未皂化部分純化后再進(jìn)行測定。第二法校正公式：A325（校正）=6.815A325－2.555A310－4.260A334

第二法Explanation

維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法（即代數(shù)法）推導(dǎo)出來的；維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或6/7定位法）推導(dǎo)出來的。在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時，除其中一點(diǎn)在最大吸收波長處測定外，其余兩點(diǎn)均在最大吸峰的兩側(cè)上升或下降陡部的波長處進(jìn)行測定。儀器波長的準(zhǔn)確度，會影響測定，故在測定前務(wù)必要校正波長。中國藥典收載的維生素A膠丸、維生素AD滴劑、維生素AD膠丸等均采用本法測定含量。

第二法Colorimetricmethod

TheassayisbasedonthemeasurementoftheunstablebluecolorresultingfromreactionofvitaminAandantimonychlorideinnon-aqueouschloroform.Withincertainlimits,absorbanceat620nmisafunctionofvitaminAconcentration.Principle

Somecriticalpointsofthemethodare:freedomfrommoisture(withSbCl3reagent);subduedlightconditions;andremovalofcarotenoidsinthefinalextractbeforecolorimetry,orcorrectionforthem.原理：維生素A與三氯化銻的無水氯仿溶液作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色，在618～620nm波長處有最大吸收，符合Beer定律。

1.顏色穩(wěn)定性:產(chǎn)生的藍(lán)色不穩(wěn)定，要求操作迅速，一般規(guī)定加入三氯化銻后應(yīng)在5～10s內(nèi)測定。2.無水:反應(yīng)介質(zhì)需無水，否則使三氯化銻水解產(chǎn)生SbOCl而使溶液混濁，影響比色。3.溫度:溫度對呈色影響很大，樣品測定時的溫度與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時溫度相差應(yīng)在±1℃以內(nèi)。4.專屬性:本反應(yīng)并非維生素A專屬，在相同條件下，某些有關(guān)物質(zhì)均與三氯化銻顯藍(lán)色，干擾測定，使結(jié)果偏高。三氯化銻試劑有強(qiáng)的腐蝕性，易損壞皮膚和儀器。

Precaution

TheanalysisofvitaminEThestructureandpropertiesThestructureThephysicalandchemicalpropertiesTheidentificationtestsTestforfreetocopherolAssaysGaschromatographyCeriumetrictitrationHPLC—Section2

Structure

Ithasα,β,γandδfourisomers.Thephysiologicalactionofα-isomeristhestrongestofall.苯并二氫吡喃醇衍生物Properties

Solubility維生素E為微黃色或黃色透明的粘稠液體，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中,不溶于水.Ultravioletabsorption

本品結(jié)構(gòu)中苯環(huán)上有酚羥基，故有紫外吸收，其無水乙醇液在284nm波長下有最大吸收，其吸收系數(shù)為41.0～45.0.Oxidation

在無氧或其他氧化劑存在時，在酸性或堿性溶液中，加熱可水解生成游離生育酚；在有氧或其他氧化劑存在時，則進(jìn)一步氧化成醌型化合物。在堿性條件下加熱，這種氧化作用更易發(fā)生。

IdentificationtestsNitricacidreactionRedoxafterhydrolyzingreaction

UltravioletspectroscopyThin-layerchromatography

Nitricacidreaction

本品約30mg加無水乙醇10ml

溶解

加硝酸2ml

溶液（橙紅色）加熱15min

75℃

Drugs30mg

non-aqueousethanol10ml

Dissolving

nitricacid2ml

Solution（salmon）Heating15min

75℃

水解后氧化反應(yīng)

本品約10mg

醇制KOH試液2ml

煮沸5min

放冷

加水4ml

乙醚10ml

振搖靜置

溶液分層

（取乙醚液2ml）

加2，2′-聯(lián)吡啶

乙醇溶液

三氯化鐵

乙醇溶液

溶液(血紅色)

Redoxafterhydrolyzingreaction

Drugsabout10mgPotassiumhydroxidesolution2ml

Boiling5min

Cooling

Addingwater4ml

ether10ml

Shakingandstanding

ethersolution

Adding2，2′-dipyridine

Ethanolsolution

Ferricchloride

Ethanolsolution

Solution(sanguine)

Preparedbyethanol

Ultravioletspectrum本品的0.01%無水乙醇液在波長284nm處有最大吸收；在波長254nm處有最小吸收，可資鑒別。Thin-layerchromatography

將供試品點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙醚（4：1）為展開劑，展開10～15cm后，取出，于空氣中晾干，噴以濃硫酸，在105℃加熱5min，α-生育酚、α-生育酚醋酸酯、α-生育醌的Rf值分別為0.5、0.7和0.9。Impurities:freetocopherol

利用游離生育酚的還原性，用硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）滴定，以二苯胺為指示劑。中國藥典維生素E其中所含的游離生育酚不得超過2.15%[BP(1998)規(guī)定不得超過1.0%]。Tocopherolistitratedbyceriumsulfate.Theindicatorisdiphenylamine.InChp,vitaminEcontainsnotmorethan2.15percentoffreetocopherol,Assays

GaschromatographyCeriumetrictitrationHigh-performanceliquidchromatographyDeterminationofvitaminAandvitaminEinhumanserumbyRP-HPLC

GaschromatographyConditionsandsystemsuitabilityCarriergas:nitrogen.Stationaryphase:silicone(OV-17).Support:diatomaceousearth,whichiswashedbyacidandthensilanized.Columntemperature:265℃.Detector:flameionizationdetector.Columnefficiencyabove500(vitamineE).Resolution:betweenthepeaksofvitamineEandtheinternalstandardsubstanceismorethan2.校正因子測定

取正三十二烷適量，加正己烷溶解并稀釋成每1ml中含1.0mg的溶液，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取維生素E對照品約20mg，精密稱定，置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10ml。密塞，振搖使溶解，取1～3μl注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。測定方法

取本品約20mg，精密稱定，置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10ml，密塞，振搖使溶解；取1～3μl注入氣相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。

Calculation

校正因子（f）=As/ms

Ar/mrAs—內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰高或峰面積Ar—對照品的峰高或峰面積ms

—加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量,mgmr—加入對照品的量,mg

含量（mx）=f×Ax

As′

/ms

Ax—供試品峰高或峰面積As′—內(nèi)標(biāo)物質(zhì)得峰高或峰面積mx—供試品的量，mgms、f—意義同上Ceriumetrictitration(ChP77)由于硫酸鈰溶于酸性水而不溶于醇，游離生育酚溶于醇而不溶于水，因此，在滴定中兩者有析出的可能，使終點(diǎn)不明顯，影響測定結(jié)果。本法僅適用于純度高的維生素E，對于雜質(zhì)較多的供試品采用本法時，由于終點(diǎn)不明顯而使結(jié)果不準(zhǔn)確。本法必須先將維生素E水解成生育酚后才能測定。

CharacteristicsDiscussion

由于硫酸鈰溶于酸性水而不溶于醇，游離生育酚溶于醇而不溶于水，故溶液需有一定量的乙醇，乙醇濃度太高或太低均使硫酸鈰和生育酚析出，使終點(diǎn)不明顯，影響測定結(jié)果。Principle2+CircumfluenceHighperformanceliquid

chromatography(JP13)色譜條件

色譜柱為內(nèi)徑4mm，長15～30cm的不銹鋼柱，填充以粒徑5～10μm的十八烷基鍵合硅膠固定相。流動相為甲醇-水（49:1），紫外檢測器，波長為292nm。生育酚比醋酸生育酚先出峰，且二峰的分離度應(yīng)大于2.6。重現(xiàn)性試驗(yàn)：重復(fù)試驗(yàn)3次，峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.8％。

Principles

Agaseousmobilephaseflowsunderpressurethroughaheatedtubeeithercoatedwithaliquidstationaryphaseorpackedwithliquidstationaryphasecoatedontoasolidsupport.Theanalyteisloadedontotheheadofthecolumnviaaheatedinjectionportwhereitevaporates.Itthencondensesattheheadofthecolumn,whichisatalowertemperature.Theoventemperatureistheneitherheldconstantorprogrammedtorisegradually.Onceonthecolumnseparationofamixtureoccursaccordingtotherelativelengthsoftimespentbyitscomponentsinthestationaryphase.Monitoringofthecolumneffluentcanbecarriedoutwithavarietyofdetectors.

—GC

Apparatus

Agaschromatographconsistsofacarriergassource,aninjectionport,column,detector,andrecordingdevice.

—GC

Applications

1.Theidentificationofsomeunformulateddrugs,particularlywithregardtodetectionofprocessimpurities.2.Limittestsforsolventresiduesandothervolatileimpuritiesindrugsubstances.3.Sometimesusedforquantificationofdrugsinformulations,particularlyifthedruglacksachromophore.4.Measurementofdrugsandtheirmetabolitesinbiologicalfluids.—GCAdvantages

1.Capableofthesamequantitativeaccuracyandprecisionashigh-pressureliquidchromatography(HPLC),particularlywhenusedinconjunctionwithaninternalstandard.2.HasmuchgreaterseparatingpowerthanHPLCwhenusedwithcapillarycolumns.3.Readilyautomated.4.Canbeusedtodeterminecompoundswhichlackchromophores.5.Themobilephasedoesnotvaryanddoesnotrequiredisposaland,evenifheliumisusedasacarriergas,ischeapcomparedtotheorganicsolventsusedinHPLC.—GC

Limitations

1.Onlythermallystableandvolatilecompoundscanbeanalyzed.2.Thesamplemayrequirederivatisationtoconvertittoavolatileform,thusintroducinganextrastepinanalysisand,potentially,interferants.3.Quantitativesampleintroductionismoredifficultbecauseofthesmallvolumesofsampleinjected.4.Aqueoussolutionsandsaltscannotbeinjectedintotheinstrument.—GCTheanalysisofthiamineThestructureandproperties

structure

propertiesTheidentificationtestsAssays

Non-aqueoustitrationSilicotungsticacidgravimetricmethodUltravioletspectroscopyThiochrome-fluorescence—Section3Structure

由氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基連接而成的季銨化合物，噻唑環(huán)上季銨及嘧啶環(huán)上氨基，為兩個堿性基團(tuán)，可與酸成鹽。··Properties

Solubility本品在水中易溶，水溶液顯酸性反應(yīng)；在乙醇中微溶，在乙醚中不溶；

Ultravioletabsorption

本品的12.5μg/ml鹽酸溶液（9→1000），在246nm波長處測定吸收度，吸收系數(shù)為406～436。Oxidation在堿性中，遇氧化劑鐵氰化鉀可被氧化為具有熒光的硫色素，后者溶于正丁醇中顯藍(lán)色熒光。

Reactionwithalkaloidprecipitationreagents分子中含有兩個雜環(huán)（嘧啶和噻唑環(huán)）可與某些生物堿沉淀試劑反應(yīng)生成組分恒定的沉淀。

IdentificationtestsThiochromereaction

維生素B1在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇顯藍(lán)色熒光。

Precipitationreaction維生素B1與碘化汞鉀生成淡黃色沉淀[B]·H2HgI4。維生素B1與碘生成紅色沉淀[B]·HI·I2。維生素B1與硅鎢酸生成白色沉淀[B]2·SiO2(OH)2·12WO3·4H2O。維生素B1與苦酮酸生成扇形白色結(jié)晶。

Assays

Non-aqueoustitration

中國藥典(2000)用本法測定維生素B1原料的含量。

Principle：維生素B1分子中含有兩個堿性的已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán)，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可與高氯酸作用。根據(jù)消耗高氯酸的量即可計(jì)算維生素B1的含量。

Titer：每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于16.86mg的C12H17ClN4OS·HCl。

Silicotungsticacidgravimetricmethod(ChP90)

Principle：

維生素B1在酸性溶液中與硅鎢酸作用產(chǎn)生沉淀，根據(jù)沉淀的重量和供試品的重量即可計(jì)算含量。Titer：

1g沉淀相當(dāng)于0.1939g維生素B1。

取樣量宜在50mg左右，不得少于25mg，否則產(chǎn)生的誤差大。干燥溫度恒定在80℃，以保證生成的沉淀含4分子結(jié)晶水，使換算因數(shù)為0.1939。為了得到易過濾的沉淀，在酸性溶液中進(jìn)行沉淀。酸量不足時，所得沉淀過細(xì)，可通過過濾器造成損失；酸量稍過則無妨礙，因?yàn)榫S生素B1在酸性溶液中穩(wěn)定。硅鎢酸用量與維生素B1的量為8：1。若試劑量太少則結(jié)果偏低；如硅鎢酸不純，則需增加用量。其他因素如沉淀劑加入的快慢、煮沸時間長短及沉淀的洗滌等，也直接影響測定的結(jié)果。

Conditions

Principle

維生素B1分子中具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，故具紫外吸收，在一定波長下測定吸收度即可定量。

Application

中國藥典（2000年版）收載的維生素B1片和維生素B1注射液，均采用本法測定。

Ultravioletspectroscopy

Thiochrome-fluorescence(USP)

原理硫色素反應(yīng)為維生素B1的專屬反應(yīng)，在一定條件下形成的硫色素與維生素B1濃度成正比，可用于維生素B1及制劑的含量測定。

Principle:

Underbasicconditions,reactionwithferricyanide,thiaminecouldbeoxidizedtoformthiochrome,whichpossessesspecificfluorescence(blue,435nm)afterextractedbyisobutylalcohol.

ExtractionConversiontothiochromeSeparationofthio-chromesolutionPreparationofblankMeasurementofthiochrome

Calculation

Procedure:

FluorescencespectrophotometryCertainmolecules,particularlythosewithachromophoreandarigidstructure,canbeexcitedbyUV/visibleradiat