HIV抗體檢測與質(zhì)量控制

HIV抗體檢測與質(zhì)量控制滋病毒（人類免疫缺陷病毒）艾滋病毒（即人類免疫缺陷病毒）是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，它具有極強(qiáng)的迅速變異能力，這一特征不僅使人體的免疫系統(tǒng)難以抵御其侵害，而且給特效治療藥物和預(yù)防用疫苗的研制帶來困難。艾滋病毒直接侵犯人體的免疫系統(tǒng)，破壞人體的細(xì)胞免疫和體液免疫。它主要存在于感染者和病人的體液（如血液、精液、陰道分泌物、乳汁等）及多種器官中，它可通過含HIV的體液交換或器官移植而傳播。病毒現(xiàn)狀

在世界范圍內(nèi)導(dǎo)致了近1200萬人的死亡，超過3000萬人受到感染。在感染后會整合入宿主細(xì)胞的基因組中，而抗病毒治療并不能把病毒根除。在2004年底，全球有約四千萬被感染并與人類免疫缺陷病毒共同生存的人，流行狀況最為嚴(yán)重的仍是撒哈拉以南非洲。1986年7月25日，世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布公報，國際病毒分類委員會會議決定，把艾滋病病毒改稱為人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）簡稱HIV。病毒特點

HIV病毒主要攻擊人體的輔助T淋巴細(xì)胞系統(tǒng)；一旦侵入機(jī)體細(xì)胞，病毒會和細(xì)胞整合在一起終生難以消除；病毒基因變化多樣；廣泛存在于感染者的血液、精液、陰道分泌物、唾液、尿液、乳汁、腦脊液、有神經(jīng)癥狀的腦組織液，其中以血液、精液、陰道分泌物中濃度最高；對外界環(huán)境的抵抗力較弱，對乙肝病毒有效的消毒方法對艾滋病病毒消毒也有效；感染者潛伏期長、死亡率高；艾滋病病毒的基因組比已知任何一種病毒基因都復(fù)雜。

體外生存

人類免疫缺陷病毒在人體外生存能力極差，不耐高溫，抵抗力較低，離開人體不易生存，常溫下只可生存數(shù)小時至數(shù)天。HIV對熱敏感。在56℃條件下30分鐘即失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活性。滅活方法

國際衛(wèi)生組織推薦對艾滋病病毒滅活加熱100℃持續(xù)20分鐘，效果較理想。

病毒形態(tài)人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。

致病機(jī)制HIV選擇性的侵犯帶有CD4分子，主要有T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等。傳播途徑

HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、唾液、尿液、陰道分泌液、眼淚、乳汁等分離得HIV。性接觸傳播血液傳播

母嬰傳播

疾病診斷HIV抗體篩查試驗ELISA試驗化學(xué)發(fā)光法快速檢測補(bǔ)充試驗抗體確證試驗：免疫印跡試劑（WB）和條帶免疫試驗（RIBA）核酸試驗：核酸定性和核酸定量試驗

HIV抗體檢測目的HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群。HIV抗體篩查樣品

血清/血漿/全血濾紙干血斑口腔黏膜滲出液尿液篩查試劑

國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)有效期內(nèi)酶聯(lián)免疫試劑應(yīng)批批檢合格選擇敏感性和特異性高的試劑篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA）：采用發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果快速檢測（RT）及其它檢測試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）HIV抗體檢測試劑（第三代）：檢測HIV-1/2抗體HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑（第四代）：可同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體用酶標(biāo)儀測定結(jié)果有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）測定的重復(fù)性差1.加樣本及試劑量不準(zhǔn)2.加樣過快，孔間發(fā)生污染3.加錯樣本4.加樣本和試劑時，加在孔壁上部非包被區(qū)5.溫育時間、洗板、顯色時間不一致6.酶標(biāo)儀濾光片問題ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）白板（陽性對照不顯色）1.漏加酶結(jié)合物2.洗液配制問題，量筒不干凈含酶抑制物3.漏加顯色劑A或B4.終止液當(dāng)顯色劑使用全部板孔都有顯色1.洗板不干凈2.加底物的吸頭被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于儀器或加樣頭造成的交叉污染ELISA測定中的干擾因素內(nèi)源性干擾因素外源性干擾因素內(nèi)源性干擾因素

人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗體、自身抗體、溶菌酶、磷脂、藥物小分子等外源性干擾因素常常是由于血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長、凝集不全、反復(fù)凍融等分析ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果時，需綜合考慮試劑因素、操作因素和標(biāo)本因素等。ELISA法結(jié)果判斷臨界值概念:將檢測的陽性和（或）陰性對照的OD值代入計算公式計算出來的判斷陽性和陰性結(jié)果的界值判斷標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)本OD值與臨界值的比值大于等于1(S/CO≥1)為陽性注意:不同廠家、不同方法臨界值計算公式不同酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）優(yōu)點：準(zhǔn)確性高、價格低廉、判斷結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)客觀、結(jié)果便于記錄和保存用途：流行病學(xué)監(jiān)測及臨床大量標(biāo)本的檢測化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗采用發(fā)光或熒光底物既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體酶或熒光標(biāo)記的HIV抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物用發(fā)光儀或熒光儀測定結(jié)果（1）免疫滲濾試驗：斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗以硝酸纖維膜為載體HIV抗原點狀固定在膜上加待檢樣品陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點有效試驗的質(zhì)控點必須顯色快速檢測（RT）及其它檢測試驗斑點免疫膠體金快速診斷試驗（2）免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體HIV抗原線狀固定在膜上待檢樣品（血液、唾液或尿液）沿著固相載體遷移陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶有效試驗的質(zhì)控帶必須顯色第四代快速試劑（SD）：可區(qū)分抗原抗體的檢測全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果快速檢測（RT）及其它檢測試驗病人條質(zhì)控條快速檢測（RT）及其它檢測試驗優(yōu)點:快速單份標(biāo)本檢測不需額外試劑或設(shè)備操作簡便缺點:肉眼判斷較主觀價格較貴結(jié)果不易保存（建議拍照保存）HIV篩查試劑的選擇檢測目的實驗設(shè)施條件價格其他：檢測數(shù)量、標(biāo)本用量、復(fù)檢問題、習(xí)慣等等試劑-1有反應(yīng)

無反應(yīng)

試劑1雙份或雙孔檢測或兩種試劑*均有反應(yīng)

一有反應(yīng),一無反應(yīng)

均無反應(yīng)補(bǔ)充實驗報告HIV抗體陰性

圖2使用抗體檢測試劑的檢測流程*兩種試劑可以是原有試劑加另一種試劑，也可以是兩種不同試劑。臨床診斷相關(guān)的檢測策略使用抗體檢測試劑的篩查檢測流程HIV抗體篩查結(jié)果的意義及處理陰性：真陰性未感染HIV病毒假陰性注意窗口期陽性：真陽性感染HIV病毒假陽性非特異性反應(yīng)操作失誤處理：篩查試驗無反應(yīng)報告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測均無反應(yīng)報告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗”；報告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報告。補(bǔ)充試驗

是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體或者核酸確定艾滋病病毒感染的檢測方法。

補(bǔ)充試驗包括抗體確證試驗[免疫印跡試驗、條帶/線性免疫試驗，特定條件下的替代檢測（三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗），免疫層析和核酸檢測試驗（核酸定性檢測和核酸定量檢測試驗）HIV抗體確證試驗確證試驗的試