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文檔簡介

實驗七植物總RNA的提取

一、實驗目的

1.

總RNA提取的原理

2.通過本實驗學習用試劑盒從動物魚肝臟組織中提取總RNA的方法。

二、實驗原理RNA是一類極易降解的分子。要獲得完整的RNA必須在提取過程最大限度地抑制內(nèi)源性及外源性RNA酶對RNA的降解作用。通過高強度的變性劑使RNA酶失活，使RNA從細胞中釋放出來時不被降解。細胞裂解后，通過氯仿除去蛋白質(zhì)和細胞碎片等雜質(zhì)，從而得到純化的總RNA。三、實驗儀器、材料與試劑

儀器1.200℃以上烘箱2.低溫離心機3.恒溫水浴鍋4.微量移液器材料1.新鮮動物組織2.氯仿3.異丙醇4.乙醇5.焦碳酸二乙酯（DEPC）6.EP管等（50ml離心管）7.陶瓷研缽、研棒8.一次性手套、（剪刀）等試劑Trizol試劑四、實驗步驟稱取100mg動物肝臟（1g新鮮植物材料），液氮研磨成粉末移入1.5mLEP管（50ml離心管）中。加入1mL

Trizol

（10mlTrizol）試劑，充分混勻。樣品體積不能超過Trizol體積的1/10。室溫（15-30℃）放置5min

（4℃離心，12000g，10min；上清移入新管；18℃放置5min以使核酸復合物分開）。4.加入200μl

（2ml）氯仿，迅速搖動15秒以混勻。15-30℃放置2-3min。4℃（2-8℃

）離心，12000g，15min(10min)。上清移入新管。加入0.5mL（1倍體積）異丙醇，15-30℃

（18℃）放置10min。4℃（2-8℃

）離心，12000g，10min。至少1mL75%酒精洗滌沉淀1次：2-8℃，7500g，5min。簡單空氣干燥一下，約5-10minRNA溶于10-15μLDEPC

水中：Tip吹吸數(shù)

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