臨床微生物學檢驗：實驗七 腸道桿菌的檢驗（二）

實驗七腸道桿菌的檢驗（二）目的要求：1熟悉腸道桿菌的分離鑒定程序及臨床意義；2掌握腸道桿菌的生化反應特點和數(shù)值鑒定方法；3掌握鑒定腸道桿菌的生化反應試驗和血清學試驗的操作方法和結果分析實驗內(nèi)容（第二次實驗）：1.細菌選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)后菌落形態(tài)觀察；2.培養(yǎng)物涂片革蘭染色顯微鏡觀察細菌形態(tài)和染色性；3.培養(yǎng)物氧化酶試驗；4.KIA、MIU接種（2人一套）；5.微量生化管接種（2人一組，小組作）。腸道細菌（主要為桿菌）的分離鑒定程序介紹

糞便標本

直接分離

SS瓊脂平板或EMB平板副溶血性弧菌選擇培養(yǎng)基挑選無色小菌落

雙糖鐵培養(yǎng)基進一步生化反應血清學試驗菌落形態(tài)生化反應

藥敏試驗結果報告1.選擇培養(yǎng)基上細菌形態(tài)、菌落觀察Mac瓊脂平板/麥康凱瓊脂平板SS瓊脂平板

營養(yǎng)成分(蛋白胨/Nacl)；成分：抑雜菌劑（膽鹽/煌綠/結晶紫)

；

乳糖（初步區(qū)分致病菌非致病菌）；酸堿指示劑（如中性紅，酸為紅色堿為無色）

革蘭染色鏡檢觀察細菌的形態(tài)、染色性和排列細菌名稱生長狀況良好否菌落顏色其它菌落特征革蘭染色鏡檢結果Mac平板大腸埃希菌良好粉紅圓形光滑濕潤菌落G-b，散在排列變形桿菌良好無色圓/光/濕，遷徙生長G-b，散在排列，兩端鈍圓，多形性SS平板痢疾桿菌無色無色圓形光滑濕潤菌落G-b，散在排列乙型副傷寒桿菌無色無色圓形光滑濕潤菌落G-b，散在排列2氧化酶試驗（濾紙法，p30）【原理】某些細菌可產(chǎn)生氧化酶（或稱細胞色素氧化酶），是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。作氧化酶試驗時，此酶首先使細胞色素C氧化，然后氧化型細胞色素C再使鹽酸二甲基對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應?！痉椒ā咳“咨珴崈魹V紙沾取菌落。加1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴，陽性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深。如用鹽酸四甲基對苯二胺為藍色

[結果]腸桿菌科陰性；弧菌科、非發(fā)酵菌陽性（個別除外）、奈瑟菌屬均陽性。3KIA、MIU接種（下次看結果）

1套/2人

4微量生化管接種（下次看結果）

1套/2人（每套不同11種）KIA試驗（克氏雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗）：下層接種針穿刺接種，上層劃線接種MIU試驗（動力/靛基質(zhì)/尿素酶試驗）：穿刺接種微量生化管（1套/2人）：砂輪劃一圈安瓿瓶瓶頸折開，接種針接種菌種：大腸埃希菌、變形桿菌；乙型副傷寒沙門菌、痢疾桿菌菌KIA試驗（p31）1.原理：KIA瓊脂中含有葡萄糖、乳糖、硫酸亞鐵及酚紅指示劑（酸為黃色，堿為紅色）。乳糖濃度是葡萄糖的10倍，分解糖可產(chǎn)酸，使酚紅指示劑變色；鐵鹽可與硫化氫反應，生成黑色沉淀。2.培養(yǎng)基：克氏雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基。3.方法：可疑菌落先穿刺再斜面劃線接種，35℃培養(yǎng)18～24h觀察結果。4.結果：堿性（K），酸性（A）。產(chǎn)氣+/不產(chǎn)氣-，H2S試驗常見細菌KIA結果（乳糖/葡萄糖/氣體/H2S大腸桿菌AA+-痢疾桿菌KA--傷寒桿菌KA-+/-甲型副傷寒桿菌KA+-/+乙型副傷寒桿菌KA++變形桿菌KA++MIU試驗(p32)1.原理：將半固體觀察動力、靛基質(zhì)試驗和尿素酶試驗綜合到一起的復合試驗。2.培養(yǎng)基：MIU培養(yǎng)基，含尿素（分解產(chǎn)氨為堿性）、蛋白胨（色氨酸分解產(chǎn)生吲哚），指示劑為酚紅（酸為黃，堿為紅）。3.方法：將可疑菌穿刺接種到MIU培養(yǎng)基內(nèi)，35℃培養(yǎng)18～24h觀察結果,先觀察動力和脲酶反應，再滴加吲哚試劑。常見細菌MIU結果（動力/靛基質(zhì)/尿素酶）大腸桿菌++-痢疾桿菌-+/--傷寒桿菌+--甲型副傷寒桿菌+--乙型副傷寒桿菌+--變形桿菌（普通；奇異）