小鼠的基本技能操作

山西醫(yī)科大學(xué)晉祠學(xué)院教案No山西醫(yī)科大學(xué)晉祠學(xué)院教案No注解講授內(nèi)容注解小鼠的基本技能操作目的：熟悉常用動(dòng)物的基本知識(shí)掌握小鼠的捉拿、給藥、處死等基本技能操作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，有目的、有計(jì)劃地進(jìn)行人工飼養(yǎng)、繁殖及科學(xué)培育而成的動(dòng)物;供科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)、檢測(cè)等方面使用的實(shí)驗(yàn)對(duì)象和材料。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必需具有明確的生物學(xué)特性和清楚的遺傳背景，并且是在對(duì)其身上攜帶的微生物、寄生蟲嚴(yán)格控制下培育和馴化出來(lái)的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按遺傳學(xué)分類有：（1）近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先，亦稱純系動(dòng)物。（2）封閉群動(dòng)物：以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群，在不從其外部引入新個(gè)體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，封閉群亦稱遠(yuǎn)交群；（3）雜交群：由不同品系或種群之間雜交產(chǎn)生的后代，通常指雜交一代動(dòng)物（F1代）。按微生物控制程度分級(jí)有：一級(jí)，普通動(dòng)物；二級(jí)，清潔級(jí)動(dòng)物；三級(jí)，無(wú)特定病原體動(dòng)物，即SPF動(dòng)物；四級(jí)，無(wú)菌動(dòng)物，即GF動(dòng)物。此外，研究性實(shí)驗(yàn)還經(jīng)常使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（通過(guò)實(shí)驗(yàn)手將新的遺傳物質(zhì)導(dǎo)入到近交系動(dòng)物胚細(xì)胞中，并能穩(wěn)定遺傳，由此獲得的動(dòng)物）為實(shí)驗(yàn)對(duì)象或材料。有時(shí)我們也用一些野生動(dòng)物、家畜、家禽和魚類進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。但由于它們或因遺傳背景不清楚，或因其健康狀況有差異，對(duì)刺激的敏感性不同、機(jī)體反應(yīng)也不一致，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性較差，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性也相對(duì)較差，因此不能被國(guó)際會(huì)議的認(rèn)可，它們只能被稱為實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物不能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等同，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可包括在實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物中，但在不十分嚴(yán)格的情況下，有時(shí)這二名詞又互相通用。一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類和特性（1）蟾蜍與蛙蟾蜍與蛙屬于兩棲綱，無(wú)尾目類，變溫動(dòng)物。易飼養(yǎng)和捕捉，一般是野外捕捉后直接供實(shí)驗(yàn)室使用。也可短期飼養(yǎng)于潮濕地方，幾天可以不食或喂以草和昆蟲等。因蟾蜍和蛙的一些基本的生命活動(dòng)與恒溫動(dòng)物相似，而且離體組織器官所需的生活條件比較簡(jiǎn)單，容易控制和掌握，因此被廣泛用于生理學(xué)科研和教學(xué)中。用蟾蜍(蛙)腓腸肌和坐骨神經(jīng)可觀察外周神經(jīng)及其肌肉的功能，研究興奮性、興奮、興奮的傳導(dǎo)和傳遞、肌肉的收縮等基本生理現(xiàn)象。蟾蜍(蛙)離體心臟可用于研究心臟的生理功能。利用蟾蜍(蛙)的整體實(shí)驗(yàn)可進(jìn)行脊休克、脊髓反射、反射弧、微循環(huán)等研究。蟾蜍還可用于生殖生理、藥理學(xué)、胚胎發(fā)育、免疫學(xué)等的研究。(2)家兔哺乳綱，嚙齒目，兔科。家兔品種很多，常用的有①青紫蘭兔：體質(zhì)強(qiáng)壯，適應(yīng)性強(qiáng)，易于飼養(yǎng)，生長(zhǎng)快；②中國(guó)本地兔(白家兔)：抵抗力不如青紫蘭兔；③新西蘭白兔是近年引進(jìn)的大型優(yōu)良品種，成熟體重可達(dá)4?4.5kg；④大耳白兔：耳朵長(zhǎng)而大，血管清晰，皮膚白色，但抵抗力較差；家兔性情溫順，灌胃、取血方便；由于兔耳緣靜脈淺表，易暴露，是靜脈給藥的最佳部位；兔的減壓神經(jīng)在頸部與迷走神經(jīng)、交感神經(jīng)分開(kāi)而單獨(dú)成為一束，常用于心血管反射活動(dòng)、呼吸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)、泌尿功能調(diào)節(jié)的研究；兔的消化道運(yùn)動(dòng)活躍，典型可用于消化道運(yùn)動(dòng)及平滑肌特性的研究。兔的大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)機(jī)能定位已具有一定的雛形，因此兔也常用于大腦皮層功能定位和去大腦僵直、神經(jīng)放電活動(dòng)等實(shí)驗(yàn)。此外，家兔還用于免疫學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、生殖生理學(xué)、眼科以及臨床疾病的研究。(3)小白鼠哺乳綱，嚙齒目，鼠科。體型較小，成熟早，繁殖力強(qiáng)，小鼠性情溫順，易于捕捉，操作方便。小鼠實(shí)驗(yàn)研究資料豐富、參考對(duì)比性強(qiáng)；其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性、可靠性和重復(fù)性高，被廣泛用于各類科研實(shí)驗(yàn)中，如用于生理學(xué)小腦功能障礙等實(shí)驗(yàn)；藥理學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)以及臨床疾病的實(shí)驗(yàn)研究。大白鼠哺乳綱，嚙齒目，鼠科。性情不如小白鼠溫順，受驚嚇或捕捉方法粗暴時(shí)，表現(xiàn)兇暴，易咬人。但具有小白鼠其它優(yōu)點(diǎn)，因此也用途廣泛。大鼠離體器官可進(jìn)行大鼠離體靜態(tài)肺順應(yīng)性實(shí)驗(yàn)；整體可用于胃酸分泌、胃排空、垂體、腎上腺系統(tǒng)的研究。大鼠還用于生殖生理、胚胎學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、腫瘤學(xué)以及遺傳學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究。大鼠大腦各部的生理功能立體定位已相當(dāng)成熟和標(biāo)準(zhǔn)化，是研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)的極好材料。豚鼠哺乳綱，嚙齒目，豚鼠科，又稱荷蘭豬。豚鼠耳蝸管發(fā)達(dá)，聽(tīng)覺(jué)靈敏，在生理學(xué)上，用于耳蝸微音器電位的實(shí)驗(yàn)，也用于臨床聽(tīng)力的實(shí)驗(yàn)研究。除此之外，還用于離體心臟及腸、子宮平滑肌實(shí)驗(yàn)，其乳頭肌和心房肌常用于心肌細(xì)胞電生理特性及動(dòng)作電位的實(shí)驗(yàn)，也用于傳染病、變態(tài)反應(yīng)、維生素C缺乏等實(shí)驗(yàn)研究。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇原則1、盡量選擇與人體結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝及疾病特征相似的動(dòng)物2、選用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的解剖、生理特點(diǎn)應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、根據(jù)人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)同一刺激的反應(yīng)差異，選用具有明顯反應(yīng)

的動(dòng)物；4、根據(jù)生物醫(yī)學(xué)研究必須達(dá)到的精確度，選用結(jié)構(gòu)功能簡(jiǎn)單又能反映研究指標(biāo)的動(dòng)物；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的注意事項(xiàng)由于動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)存在個(gè)體差異,在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，還應(yīng)注意動(dòng)物的年齡、體重、性別、生理狀態(tài)、健康狀況及其品系、等級(jí)等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的注意事項(xiàng)由于動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)存在個(gè)體差異,在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，還應(yīng)注意動(dòng)物的年齡、體重、性別、生理狀態(tài)、健康狀況及其品系、等級(jí)等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響6、選用與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、技術(shù)條件、實(shí)驗(yàn)方法等相適應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物;7、在不影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c結(jié)果的前提下，選擇最易獲得、最經(jīng)濟(jì)、便于操作管理的動(dòng)物；三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別鑒別實(shí)驗(yàn)常用的動(dòng)物中，較大的動(dòng)物（如家兔、貓、犬等）可以從生殖器分辨其性別，而較小的動(dòng)物（如小白鼠、大白鼠、豚鼠等）的性別鑒別，通常以肛門與生殖孔之間的距離來(lái)判斷，距離近者為雌性，距離遠(yuǎn)者為雄性。四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)方法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，常用的編號(hào)標(biāo)記有染色法、掛牌法、烙印法等3種方法。染色法染色法是用有色化學(xué)試劑在動(dòng)物身體明顯處如被毛、四肢等不同部位處進(jìn)行涂染或用不同顏色來(lái)區(qū)別各組動(dòng)物，是實(shí)驗(yàn)中最常用、最容易掌握的方法。使用的編號(hào)標(biāo)記液有如下幾種：3%-5%的苦味酸溶液（涂染黃色），2%硝酸銀溶液（涂染咖啡色），0.5%中性紅或品紅溶液（涂染紅色）。編號(hào)原則是先左后右，從前到后。一般把涂在左前腿上的記為1號(hào)，左側(cè)腹部記為2號(hào)，左后腿記為3號(hào)，頭頂部記為4號(hào)，腰背部記為5號(hào)，尾基部記為6號(hào),右前腿上的記為7號(hào)，右側(cè)腰部記為8號(hào)，右后腿記為9號(hào)。若動(dòng)物編號(hào)超過(guò)10或更大數(shù)字，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個(gè)位數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)，這種交互使用可編到99號(hào)。例如把紅色記為十位數(shù)，黃色記為個(gè)位數(shù)，那么，右后腿黃色，頭頂紅色，則表示是49號(hào)，其余類推。掛牌法

掛牌法是將標(biāo)有編號(hào)的金屬制號(hào)碼牌固定在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的耳部皮膚上，大動(dòng)物可掛在頸上或籠箱上。烙印法烙印法是用刺數(shù)鉗在動(dòng)物無(wú)體毛或明顯部位(如耳、面鼻部和四肢等部位)刺上編號(hào)，然后用棉簽蘸著溶有乙醇的黑墨汁在編號(hào)上涂抹。烙印前，最好對(duì)烙印部位預(yù)先用75%乙醇消毒，以免造成皮膚局部感染。五、小鼠的捉拿、給藥方法及處死1、捉拿：可采取雙手法和單手法兩種形式。雙手法：右手提起鼠尾，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后方輕拉，小白鼠則將前肢固定于粗糙面上。此時(shí)迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠頸背部皮膚(圖1),并以小指與手掌尺側(cè)夾持其尾根部，固定于手中。單手法：小白鼠置于籠蓋上，先用左手食指與拇指抓住鼠尾,手掌尺側(cè)及小指夾住尾根部，然后用左手拇指與食指捏住頸部皮膚。西二:』攔山采応2、給藥方法西二:』攔山采応注意事項(xiàng)1、捉拿固定某一動(dòng)物之前，要對(duì)該動(dòng)物的習(xí)性有一定的了解。2、捉拿固定動(dòng)物時(shí)須小心謹(jǐn)慎，大膽果斷，但切不可粗暴3、捉拿動(dòng)物過(guò)程中要以規(guī)范性的方法抓取和固定動(dòng)物，要避免因動(dòng)作粗暴而造成動(dòng)物的損傷。例如家兔這樣的動(dòng)物，不能采用抓雙耳或抓提腹部的錯(cuò)誤捉拿方法。4、抓取大鼠或小鼠尾部時(shí)動(dòng)作要輕，防止拉斷鼠尾。不可提起動(dòng)物玩耍!提起動(dòng)物后，應(yīng)迅速放在粗糙臺(tái)面上。5、注意事項(xiàng)1、捉拿固定某一動(dòng)物之前，要對(duì)該動(dòng)物的習(xí)性有一定的了解。2、捉拿固定動(dòng)物時(shí)須小心謹(jǐn)慎，大膽果斷，但切不可粗暴3、捉拿動(dòng)物過(guò)程中要以規(guī)范性的方法抓取和固定動(dòng)物，要避免因動(dòng)作粗暴而造成動(dòng)物的損傷。例如家兔這樣的動(dòng)物，不能采用抓雙耳或抓提腹部的錯(cuò)誤捉拿方法。4、抓取大鼠或小鼠尾部時(shí)動(dòng)作要輕，防止拉斷鼠尾。不可提起動(dòng)物玩耍!提起動(dòng)物后，應(yīng)迅速放在粗糙臺(tái)面上。5、捉拿動(dòng)物過(guò)程中應(yīng)防止被動(dòng)物咬傷，若不慎被動(dòng)物咬傷、抓傷。應(yīng)及時(shí)用碘酒、乙醇消毒，隨后到有關(guān)醫(yī)療機(jī)構(gòu)診治成年動(dòng)物插管深度一般是：小鼠3cm，大鼠5cm，家兔15cm，犬20cm。(2)、皮下注射(ih)：皮下注射是將藥物注射于皮膚與肌肉之間。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮下注射一般應(yīng)由兩人操作，熟練者也可一人完成。由助手將動(dòng)物固定,術(shù)者用左手捏起皮膚，形成皮膚皺褶，右手持注射器刺入皺褶皮下，將針頭輕輕左右擺動(dòng)，如擺動(dòng)容易，表示確已刺入皮下，再輕輕抽吸注射器，確定沒(méi)有刺入血管后，將藥物注入。拔出針頭后應(yīng)輕輕按壓針刺部位，以防藥液漏出，并可促進(jìn)藥物吸收。。注藥量一般為0.1?0.2ml/10g。、肌肉注射(im)：—人抓住小鼠頭部皮膚和尾巴，另一人持連4號(hào)針頭的注射器，將針頭刺入后腿外側(cè)肌肉。注射量一般不超過(guò)0.1?0.2ml/只。、靜脈注射(iv)：尾靜脈注射主要用于大鼠和小鼠。鼠尾靜脈有3根，兩側(cè)及背側(cè)各1根，左、右兩側(cè)尾靜脈較易固定，應(yīng)優(yōu)先選擇。注射時(shí),先將鼠固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，露出尾部組織，用45?50°C溫水浸泡鼠尾1?2min或用75%乙醇溶液反復(fù)擦拭，以達(dá)到消毒、擴(kuò)張血管和軟化表皮角質(zhì)的目的。選擇尾靜脈下1/3處，用細(xì)針頭沿血管方向平行、向心端進(jìn)針。注意藥液推入靜脈時(shí)是否通暢,若阻力較大，注射部位皮下發(fā)白，表示針頭未刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)換部位重新注射；若推入藥液順利無(wú)阻，則表明己刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)把針頭和鼠尾固定好，不要晃動(dòng)，緩緩將藥液推入，注射完畢，用棉球在注射部位輕輕揉壓，使血液及藥液不致回流而漏。常用注射量為0.1?0.2ml/10g。(5)、腹腔注射(ip)★使用注射器和吸取藥液時(shí)的注意事項(xiàng)：注射器必須洗凈，針頭要尖銳、通氣，大小合適。一般小鼠皮下、腹腔、肌肉注射用5.5-6號(hào)針頭，靜脈注射用4.5號(hào)或5★使用注射器和吸取藥液時(shí)的注意事項(xiàng)：注射器必須洗凈，針頭要尖銳、通氣，大小合適。一般小鼠皮下、腹腔、肌肉注射用5.5-6號(hào)針頭，靜脈注射用4.5號(hào)或5號(hào)針頭，口服灌胃用16號(hào)針頭;大鼠所用的針頭均大1號(hào)，灌胃用靜脈切開(kāi)針;家兔與大鼠所用針頭可相同。將針頭的口用手指堵住,輕輕抽拉針?biāo)?，檢查針頭與針筒是否有漏氣現(xiàn)象。先計(jì)算需用藥量，再吸取藥液。注射前需排除氣泡(針口向上)，調(diào)整