安捷倫液相基本操作課件

安捷倫液相的基本操作安捷倫液相基本操作目錄一.色譜基礎(chǔ)知識(shí)二.Agilent液相色譜儀基本操作三.常見(jiàn)色譜故障安捷倫液相基本操作一.色譜基礎(chǔ)知識(shí)安捷倫液相基本操作1.色譜法的分離原理溶于流動(dòng)相(mobilephase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(stationaryphase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。安捷倫液相基本操作2.HPLC的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)①高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。②高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)。③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。安捷倫液相基本操作④高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)。⑤應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。安捷倫液相基本操作二.Agilent液相色譜儀基本操作安捷倫液相基本操作流動(dòng)相瓶排氣閥電源開(kāi)關(guān)二元泵自動(dòng)進(jìn)樣器柱溫箱檢測(cè)器安捷倫液相基本操作進(jìn)入工作站安捷倫液相基本操作主界面安捷倫液相基本操作編輯完整方法儀器方法設(shè)置方法信息儀器/采集數(shù)據(jù)分析運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表安捷倫液相基本操作儀器方法設(shè)置安捷倫液相基本操作儀器方法設(shè)置安捷倫液相基本操作儀器方法設(shè)置安捷倫液相基本操作儀器方法設(shè)置安捷倫液相基本操作單次樣品：樣品命名工作站使用安捷倫液相基本操作序列樣品：命名與序列表設(shè)置工作站使用安捷倫液相基本操作打開(kāi)儀器1脫機(jī)安捷倫液相基本操作數(shù)據(jù)文件夾序列樣品數(shù)據(jù)單次樣品數(shù)據(jù)色譜圖樣品數(shù)據(jù)色譜圖編輯色譜峰數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析安捷倫液相基本操作數(shù)據(jù)分析調(diào)節(jié)積分參數(shù)安捷倫液相基本操作數(shù)據(jù)分析報(bào)告→打印報(bào)告安捷倫液相基本操作三.常見(jiàn)色譜故障安捷倫液相基本操作常見(jiàn)色譜故障----基線噪音可能原因:a、檢測(cè)池臟

b、檢測(cè)池?zé)裟芰肯陆?/p>

c、由泵引起的脈沖

d、檢測(cè)器上的溫度效應(yīng)

e、檢測(cè)其中有氣泡通過(guò)安捷倫液相基本操作常見(jiàn)色譜故障----基線漂移可能原因:a、梯度洗脫所用溶劑有吸收

b、流動(dòng)相臟

c、色譜柱沒(méi)有用流動(dòng)相平衡

d、系統(tǒng)中污染物溢出

e、實(shí)驗(yàn)溫度不穩(wěn)定安捷倫液相基本操作常見(jiàn)色譜故障----拖尾峰

可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷

b、進(jìn)樣體積過(guò)大

c、柱外擴(kuò)散效應(yīng)

d、堿性基質(zhì)與硅羥基作用

e、重金屬反應(yīng)

常見(jiàn)色譜故障----前伸峰可能原因：a、色譜柱過(guò)載

b、進(jìn)樣體積過(guò)大

c、大峰之前有未徹底分離

的小峰

安捷倫液相基本操作常見(jiàn)色譜故障----負(fù)峰

可能原因：a、樣品吸收比流動(dòng)相吸收小

b、溶解樣品的溶劑通過(guò)色譜柱平衡被破壞

c、示差檢測(cè)器中最常見(jiàn)，溶質(zhì)的折光指數(shù)小于溶劑的折光指數(shù)。安捷倫液相基本操作常見(jiàn)色譜故障----鬼峰常見(jiàn)原因是流動(dòng)相臟，尤其是水相。要求使用超純水，最多兩天就換常見(jiàn)色譜故障----雙峰可能原因：a、柱頭塌陷或柱床運(yùn)動(dòng)

b、柱前濾芯堵塞

c、組分共流出

d、樣品量過(guò)大

f、進(jìn)樣器的進(jìn)樣流路存在分叉流路

安捷倫液相基本操作常見(jiàn)色譜故障----峰擴(kuò)展可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷

b、進(jìn)樣體積過(guò)大

c、流動(dòng)相粘度大安捷倫液相基本操作

常見(jiàn)色譜故障----壓力過(guò)高可能原因：a、色譜柱進(jìn)樣口過(guò)濾芯被污染

b、沖洗閥過(guò)濾芯被污染

c、色譜柱被污染

d、連接管路的毛細(xì)管堵塞

e、進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子上凹槽被堵塞

f、進(jìn)樣針或針座被阻塞常見(jiàn)色譜故障----壓力過(guò)低可能原因：a、溶劑進(jìn)樣口過(guò)濾芯堵塞

b、連接管路泄漏

c、溶劑或流速改變

d、主動(dòng)閥失靈、四元比例閥失靈