實驗六-薄層色譜層析

實驗六薄層色譜層析一、實驗目的1、學習薄層色譜法的原理和方法；2、學會利用薄層色譜分離提純有機化合物的規(guī)范操作；2、掌握比移值的計算方法；3、了解比移值的影響因素。二、實驗原理基本原理：利用混合物中各組分在某一物質中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他親和作用的差異，使混合物的溶液流經該種物質，進行反復的吸附或分配等作用，從而將各組分分開。分類：柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜、

液相色譜薄層色譜(thinlayerchromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進行化學反應時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。依其所采用的薄層材料性質和物理、化學原理的不同，可分為吸附薄層色譜、分配薄層色譜、離子交換薄層色譜和排阻薄層色譜等。吸附薄層色譜采用硅膠、氧化鋁等吸附劑鋪成薄層，將樣品以毛細管點在原點處，用移動的展開劑將溶質解吸，解吸出來的溶質隨著展開劑向前移動，遇到新的吸附劑，溶質又會被吸附，新到的展開劑又會將其解吸，經過多次的解吸-吸附-解吸的過程，溶質就會隨著展開劑移動。吸附力強的溶質隨展開劑移動慢，吸附力弱的溶質隨展開劑移動快，這樣不同的組分在薄層板上就得以分離。一個化合物在吸附劑上移動的距離與展開劑在吸附劑上移動的距離的比值稱為該化合物比移值Rf溶質的最高濃度中心至原點中心的距離溶劑前沿至原點中心的距離溶質的最高濃度中心至原點中心的距離溶劑前沿至原點中心的距離比移值Rf＝薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10×3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。記下原點至主斑點中心及展開劑前沿的距離，計算比移值（Rf）。展開劑是影響色譜分離度的重要因素。一般來說，展開劑的極性越大，對特定化合物的洗脫能力也越大，一般常用展開劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油醚<己烷<甲苯<苯<氯仿<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水<乙酸。三、主要試劑和材料蒽、香草醛、芴酮及其混合物；薄層層析硅膠G；薄玻璃板；環(huán)己烷：乙酸乙酯（5：1或6：1）；0.5%羧甲基纖維鈉(CMC-Na)水溶液；毛細管(內徑小于1mm)A蒽B芴酮C香草醛四、實驗裝置薄層色譜示意圖五、實驗步驟在洗滌干凈的玻板（15×3cm）上均勻地涂上一層吸附劑或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上，晾干或吹干后，置薄層板于盛有展開劑的展開槽內，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將板取出，干燥后噴以顯色劑或在紫外燈下顯色或直接觀察。制板（簡易平鋪法）（1）二塊15×3cm玻片，洗凈，控水取7.5cm×2.5cm載玻片4塊，用去污粉搽洗，再用水淋洗，最后浸入無水乙醇中，取出晾干。取用時手指只可接觸載玻片的邊緣，不能接觸載玻片兩面。（2）調糊：3g硅膠G和8mL0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液在小燒杯中攪勻。在50mL燒杯中，放入約3g硅膠，加入0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液8mL，調成糊狀。（3）鋪層：用牛角匙將此糊狀物傾倒于上述玻璃片上，用食指和拇指拿住玻璃片，做前后、左右振搖擺動，反復數次，使流動的糊狀物均勻地鋪在載玻片上。每組鋪二塊。（4）活化：將已涂好硅膠G的薄層板放置在水平的長玻璃片上，室溫放置0.5h后，移入烘箱，緩慢升溫至110℃，恒溫0.5h。取出稍冷放入干燥器中備用。點樣：（1）畫線——起始線和前沿線

（2）毛細管點樣——斑點大小和斑點間間距。用內徑小于1mm的毛細管取樣品溶液，在距離薄層板底端8~10mm處，垂直地輕輕接觸薄層板，斑點直徑要小于2mm，一塊薄層板可點2個樣品，注意保持一定的距離，但斑點不能太靠邊。展開：展開劑選擇；展開方法——傾斜上行法。取一有蓋的廣口瓶作色譜器，加入展開劑（用環(huán)己烷︰乙酸乙酯=3～5︰1），展開劑高度不要超過5mm，以免淹沒斑點，然后將已點好樣品的薄層板放入色譜器中，蓋緊，等展開劑上升到接近薄層板上沿時，打開蓋子，迅速用鉛筆或小針在前沿作一記號取出，晾干。顯色：直接觀察并量取a、b值，計算比移值。先用肉眼觀察有無可見的斑點，然后放在紫外線分析儀下觀察熒光斑點，并用小針輕輕勾劃斑點的輪廓，最后放入盛有碘片的瓶中進行顯色。樣品：蒽、香草醛、芴酮及其混合物【操作要點及注意事項】

1、調漿時要將硅膠加到CMC-Na中，以免生成太多的團塊,漿液要有一定的流動性，稠度以能沿玻棒成細線性下滴為宜。2、鋪板時一定要鋪勻，特別是邊、角部分，晾干時要放在平整的地方。3、點樣時點要細，直徑不要大于2mm,間隔0.5cm以上，濃度不可過大，以免出現拖尾、混雜現象。4、展開用的燒杯要洗凈烘干，放入板之前，要先加展開劑，蓋上表面皿，讓燒杯內形成一定的蒸氣壓。點樣的一端要浸入展開劑0.5cm以上,但展開劑不可沒過樣品原點。當展開劑上升到距上端0.5－1cm時要及時將板取出，用鉛筆標示出展開劑前沿的位置。5、制板和活化：鋪板厚度0.25-1mm且均勻；晾干；一塊一塊鋪；活化時烘箱要從低溫開始

6、點樣：畫線時不能將板劃破；點樣斑點直徑小于2mm，斑間距1-1.5cm，標準左樣品右；點樣結束干燥后再進行下一步

7、展開：展開劑用環(huán)己烷：乙酸乙酯混合物（5：1或6：1）