齊魯醫(yī)學CLBIII八通道殘留農(nóng)藥測定儀使用說明

CL-BIII八通道殘留農(nóng)藥測定儀使用說明上海博納新技術研究所2006年4月2021/9/291農(nóng)殘常識1

有機磷和氨基甲酸酯類殺蟲、殺螨劑的特點。兩類農(nóng)藥的作用機理均為抑制動物體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的活性，破壞神經(jīng)傳導，引起一系列的神經(jīng)中毒癥狀，直至死亡。二者的主要區(qū)別在于：有機磷類殺蟲、殺螨劑對乙酰膽堿酯酶的抑制是不可逆的，而氨基甲酸酯類殺蟲、殺螨劑對乙酰膽堿酯酶的抑制是可逆的。2021/9/292農(nóng)殘常識2

酶抑制率法和酶系酶源：國家標準GB/T5009.199-2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》推薦的酶抑制率法能方便、快速、準確、成本低廉檢測出農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，也同時肯定了乙酰膽堿酯酶作為快速檢測推薦試劑的活性量和具體要求。近年來，我們通過對動物源和植物源的多種丁酰膽堿酯酶、乙酰膽堿酯酶進行檢測實驗和比較研究，發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿酯酶對農(nóng)藥的檢測敏感度和綜合指標優(yōu)于丁酰膽堿酯酶；確定了有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酸有較專一性的抑制作用；分析出在抑制率70%以下，大多數(shù)農(nóng)藥濃度和乙酰膽堿酯酶抑制率呈較好的線性關系，并能實現(xiàn)對單種農(nóng)藥的定量分析；解決了酶的活性和穩(wěn)定性控制等技術2021/9/293農(nóng)殘常識3

什么是間接比色法:由于只有當?shù)孜锱c產(chǎn)物之間，在光學性質(zhì)或其它理化性質(zhì)有顯著差異時，才可能直接用分光光度計法測定，因此對酶活性濃度的監(jiān)測大多是采用間接監(jiān)測法。如對膽堿酯酶的測定：底物（硫代乙酰膽堿）及酶水解產(chǎn)物（硫代膽堿和乙酸）并不具有顏色，不能用分光光度計法測定。所以必須設法在原來反應體系中添加一些試劑，這些試劑必須不與酶作用也不影響酶活性，同時又能與酶反應物迅速作用，產(chǎn)生可以被直接測定的物質(zhì)。這就產(chǎn)生了Ellman的膽堿酯酶測定法即間接連續(xù)監(jiān)測法。目前國內(nèi)大多廠家生產(chǎn)的快速農(nóng)藥測定儀都采用了Ellman的膽堿酯酶測定法即間接比色法。該方法通過監(jiān)測底物（硫代乙酰膽堿），酶水解產(chǎn)物硫代膽堿與添加的二硫代硝基苯甲酸（DTNB）作用立刻生成黃色化合物的反應速度來測定酶活性變化。2021/9/294農(nóng)殘常識4

什么是連續(xù)監(jiān)測法：50年代，Warburg首先用分光光度計測定酶的活性。該方法不需停止酶反應就可測定反應物的變化，容易觀察到反應的整個過程和干擾情況（通過繪制反應曲線）。因此逐步取代了固定時間法成為目前測酶活性的主要方法。該方法是利用連續(xù)對反應過程進行高靈敏度檢測，并通過繪制整個酶反應曲線避開延滯期和非線性反應期，只在線性反應期測定最大反應初速度。由于儀器的高精密度，連續(xù)監(jiān)測法能在很短時間，甚至在1分鐘反應時間內(nèi)就能準確測定出活性的抑制率。2021/9/295技術指標CL-BIII八通道殘留農(nóng)藥測定儀的技術指標：?測量波長：410nm?通道數(shù)：8?檢測用樣品器皿：10mm比色皿?光電流漂移：<0.5%

(3min)?

暗電流漂移：<0.5%

(3min)?抑制率顯示范圍：0-100%

?

抑制率測量范圍：10-100%?

農(nóng)藥檢測：（用甲胺磷農(nóng)藥標樣測試）?抑制率示值誤差：±10%?抑制率重復性誤差：5%2021/9/296第一部分試劑配制第二部分聯(lián)機使用第三部分單機使用第四部分相關技巧與常識目錄2021/9/297第一部分

試劑配制

2021/9/2981、試劑的配制提取液：把提取液甲乙粉末倒入大玻璃瓶中，并加入510ml蒸餾水溶解。酶試劑：用移液槍取3.1ml提取液，加入酶試劑瓶中。顯色劑：用移液槍取20ml提取液，加入顯色劑瓶，溶解后倒入棕色瓶中。底物：用移液槍取3.1ml蒸餾水，加入底物瓶中。2021/9/2992、試劑的保存及注意事項返回目錄1、本試劑適用的國家標準為：GB/T5009.199-2003。2、未配制的試劑，要保存在0℃以下的冷凍箱里。

（保質(zhì)期可達1年）3、配制好的酶和底物試劑，要保存在4℃的冷藏箱內(nèi)。（保質(zhì)期為一周）4、配制好的提取液常溫下可以長期保存。5、配制好的顯色劑需避光保存；常溫或冷藏，可以

保存1年。2021/9/2910第二部分

聯(lián)機使用

2021/9/2911第一步儀器連接2021/9/29121、連接電源將儀器的電源接頭和數(shù)據(jù)信號線接好。如圖：2021/9/29132、連接電腦把數(shù)據(jù)信號線（串口線）接入電腦主機背后的COM口（串口）上，然后把數(shù)據(jù)信號線與儀器聯(lián)接起來，這樣就完成了儀器與電腦的硬件連接。2021/9/2914第二步軟件安裝2021/9/2915安裝“農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測軟件”把“農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測軟件”光盤放入電腦光驅(qū)中，等自動讀取或在光盤目錄下找到并雙擊“setup”后，按提示點擊“下一步”安裝。安裝完成以后，桌面上會出現(xiàn)“食品質(zhì)量安全檢測平臺”的圖標。安裝完成桌面上出現(xiàn)的圖標2021/9/2916第三步儀器設置2021/9/2917儀器設置打開儀器電源，按儀器“確認”鍵2次，然后按1次“設置”鍵，再按“確定”鍵，選擇“受控”后再按1次“確定”鍵。出現(xiàn)“現(xiàn)正處于受控工作模式”即可。打開檢測軟件，檢測軟件的用戶名默認為“管理員”，密碼是“111111”。檢測軟件登陸設置為受控狀態(tài)2021/9/2918調(diào)0/100注：以上是一個檢測窗口的步驟，其他七個窗口都是如此。

等待10-15秒

按“確定”

放入黑塊

等待10-15秒

按“確定”

拿出黑塊

按“”鍵按“”鍵按“”鍵

按“”鍵2021/9/2919第四步空白對照2021/9/2920空白對照

用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中

用小移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中

用小移液槍取0.1ml底物加入試管中

迅速搖勻并倒入比色皿

放入比色池

按“開始對照分析”鍵

等待對照結束

用大移液槍抽取2.5ml提取液放入試管中2021/9/2921裝入對照

按“裝入對照分析”鍵選擇所需對照選擇需要裝入對照的通道號（在通道號碼前√）

按“讀取”鍵完成裝入工作

注：對照結束后，對照曲線會自動保存.（標準對照庫中已有30種蔬菜的對照，在做這30種蔬菜時，請參照這些對照。）

2021/9/2922裝入標準對照庫

按“裝入對照分析”鍵選擇所需的空白對照和相應的樣品修正值選擇需要裝入對照的通道號（在通道號碼前√）

按“讀取”鍵完成裝入工作

2021/9/2923第五步樣品檢測2021/9/2924用天平稱取1克果蔬剪成2cm見方

放入燒杯中，用大移液槍抽取5ml提取液加入到燒杯中

靜置15分鐘（或震蕩1分鐘）

用大移液槍從燒杯中抽取2.5ml浸泡液移至空試管中

用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中

用小移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中靜置15分鐘

用小移液槍取0.1ml底物加入試管中

迅速搖勻并倒入比色皿

放入比色池

按“開始樣品分析”鍵

等待檢測結果

2021/9/2925第六步保存檢測結果2021/9/2926保存檢測結果樣品結束后，系統(tǒng)自動彈出“檢測結果”對話框

選擇該通道所測蔬菜名

填寫（選擇）檢測單位

按“退出”鍵

填寫（選擇）被檢單位和生產(chǎn)單位

按“保存”鍵，保存檢測結果2021/9/2927備注“統(tǒng)計分析”中的“農(nóng)殘檢測數(shù)據(jù)查詢統(tǒng)計”對話框有所有保存過的檢測數(shù)據(jù)，在該對話框中有“開始日期“、“結束日期”、“果蔬品種”、“被檢單位”等九項選項，對這些選項進行組合選擇后，再按“查詢”鍵，就可以將您需要的信息從所有的數(shù)據(jù)中篩選出來。另外，“農(nóng)殘檢測數(shù)據(jù)查詢統(tǒng)計”對話框中還有“統(tǒng)計分析”和“轉(zhuǎn)存”等功能，當選擇出需要的檢測數(shù)據(jù)后，就可以按“統(tǒng)計分析”鍵或者“轉(zhuǎn)存”鍵，對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析或制成相應報表。如果需要打印單項檢測結果，則點選該結果后，按“打印當前記錄”鍵，瀏覽打印效果，再按打印鍵后打印。2021/9/2928檢測結果上傳打開“設置”項下的“系統(tǒng)選項”

在“系統(tǒng)選項”中在“注冊ID號”處填入ID號及ID密碼

通過右半邊的條件選擇，查詢出需要上傳的數(shù)據(jù)點擊“發(fā)送”下的“發(fā)送查詢的數(shù)據(jù)”

當檢測結束后需要發(fā)送數(shù)據(jù)時，打開“統(tǒng)計匯總”中的“農(nóng)殘檢測數(shù)據(jù)查詢統(tǒng)計”

返回目錄2021/9/2929第三部分

單機使用2021/9/2930第一步設置儀器2021/9/29311、連接電源將儀器電源連接好，（如需打印，則要將專用打印機連接到儀器的打印接口上。）如圖：

2021/9/29322、儀器設置

打開儀器開關后，按提示進入儀器操作主界面。按“設置”鍵進入儀器設置功能，在“設置”里可以對“日期”、“打印方式”、“對照查詢”等進行設置。設置完成后再按“設置”鍵退回到主界面。

2021/9/29333、調(diào)0/100

在主界面狀態(tài)下，按0/100鍵，根據(jù)屏幕提示逐一調(diào)1-8通道的100值，最后按“確定”鍵結束。2021/9/2934第二步空白對照2021/9/2935空白對照注：對照的時間默認為3分鐘，如需修改，則先要在“設置”中進行設置。用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中

用小移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中

用小移液槍取0.1ml底物加入試管中

迅速搖勻并倒入比色皿

放入第一通道的比色池

按“對照”鍵，并選擇“新建”

等待對照結束

用大移液槍抽取2.5ml提取液放入試管中2021/9/2936第三步樣品檢測2021/9/2937用天平稱取1克果蔬剪成2cm見方

放入燒杯中，用大移液槍抽取5ml提取液加入到燒杯中

靜置15分鐘

用大移液槍從燒杯中抽取2.5ml浸泡液移至空試管中

用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中

用小移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中靜置15分鐘

用小移液槍取0.1ml底物加入試管中

迅速搖勻并倒入比色皿

放入比色池

按“樣品”鍵

等待檢測結果

注：按“樣品”鍵后，會從1-8通道依次提示是否準備好開始進行檢測，如果該通道不需要進行檢測，則選擇“不用”。

2021/9/2938第四步數(shù)據(jù)打印及退出

2021/9/2939數(shù)據(jù)打印及退出返回目錄按“打印”鍵

按“確定”鍵

用△/▽鍵選擇檢測數(shù)據(jù)的編號

按“打印”鍵進行打印

按“確定”鍵退出打印狀態(tài)

2021/9/2940第四部分

相關技巧與常識2021/9/2941常見問題及相關技巧11.儀器聯(lián)機操作的情況下，在檢測過程中或者開始檢測時，電腦出現(xiàn)“沒有檢測到指定的設備……”，是怎么回事？一般來說出現(xiàn)這種提示說明您的檢測儀與電腦硬件連接出現(xiàn)問題，檢查的步驟如下：第一步、確定檢測軟件的設備設置中相關設置與硬件連接相匹配；第二步、電腦串口通訊故障，檢測方法：重新啟動電腦，確認是否故障依然存在，如果故障依然存在，檢查下一步；第三步、更換一下電腦串口，并在檢測軟件的設備設置中進行相應的改動，或者換一臺電腦，確認故障是否存在，如果故障解決，則表明是電腦本身的問題，否則可進行下一步檢查；第四步、更換RS232485轉(zhuǎn)換器，確認問題是否存在,如果故障解決，則表明為RS232485轉(zhuǎn)換器連接不通。2021/9/2942常見問題及相關技巧22.儀器聯(lián)機操作的情況下，調(diào)100時看不到紅線是怎么回事？首先我們要學會看圖譜，圖譜的橫坐標為時間，縱坐標為投射比，我們所所的調(diào)100準確的所是指將投射比值調(diào)整為100％。圖譜在沒有拖拉的情況下，最高只能顯示到100，如果在調(diào)100的過程中，其投射比值大于100，那樣就看不到紅線了，但圖譜右邊的小白框中有數(shù)字顯示，你只要正常的調(diào)0/100就可以了。另外，對于小白框內(nèi)數(shù)字，顯示的是當前的投射比值。在做對照或調(diào)0/100時，小白框內(nèi)的數(shù)字前有一短紅線，在做樣品時則為短綠線。大家不要把這個短線認為是負號。2021/9/2943常見問題及相關技巧33.如何檢測儀器的重現(xiàn)性？做一空白對照后，做一個雙倍量的樣品，然后一分為二，先后或同時做檢測，即：取2克樣品，加10ml提取液浸泡，然后取5ml檢液，分別加0.2ml的酶、顯色劑，15分鐘后，如果直接加0.2ml底物，然后一分為二在兩個通道中同時做檢測，則是檢查不同通道的重現(xiàn)性；如果15分鐘后先將溶液一分為二，先后加入0.1ml底物做檢測，則是檢查同一通道的重現(xiàn)性。4.如何添加品種名稱？一般來說有兩種添加方法：A.可以在基礎數(shù)據(jù)維護中進行添加。B.在檢