江南卷柏提取物石油醚提取工藝研究

江南卷柏提取物石油醚提取工藝研究

江南柏樹是柏樹科植物江南睡蓮的干燥全草。它具有清熱涼血的功效，廣泛用于臨床應(yīng)用。以其為原料制成的江南卷柏片又名白云山紫癜清,對特發(fā)性血小板減少性紫癜療效顯著。研究表明江南卷柏抗腫瘤、抗病毒的有效成分主要為黃酮類化合物,且以穗花杉雙黃酮為主。由于該藥材醇提液中含有大量葉綠素等脂溶性雜質(zhì),影響了大孔樹脂的純化工藝,致使總黃酮的回收率與純度降低。故本實(shí)驗(yàn)選擇石油醚為脫脂溶劑,采用正交試驗(yàn)優(yōu)選醇提物干膏的脫脂工藝,為江南卷柏的資源開發(fā)與利用提供參考。1高效液相色譜法BP-211D型1/10萬電子分析天平(德國Sartorius公司),P680系列高效液相色譜儀(美國戴安公司)。穗花杉雙黃酮對照品(自制,經(jīng)HPLC測定純度>99.0%),江南卷柏醇提物干膏(自制,經(jīng)UV測定總黃酮純度>17.42%),試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1黃酮穗花素的含量測定2.1.1流動相乙腈-水梯度洗脫反應(yīng)DiamonsilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),檢測波長330nm,流速1mL·min-1,進(jìn)樣量10μL,流動相乙腈(A)-水(B)梯度洗脫(0~5min,25%A;5~12min,25%~35%A;12~17min,35%~45%A;17~25min,45%~50%A;25~40min,50%~55%A;40~45min,55%~70%A;45~50min,70%~100%A;50~55min,100%A;55~60min,100%~25%A),柱溫30℃。2.1.2對照溶液的制備精密稱取減壓干燥至恒重的穗花杉雙黃酮對照品,加甲醇超聲溶解并定容至10mL量瓶中,得120mg·L-1對照品溶液。2.1.3精密度測試取對照品溶液,按2.1.1項(xiàng)下方法連續(xù)進(jìn)樣5次,計(jì)算穗花杉雙黃酮峰面積的RSD1.6%,表明儀器精密度良好。2.1.4方法標(biāo)準(zhǔn)曲線精密移取穗花杉雙黃酮對照品溶液2.0,4.0,6.0,8.0,10.0μL,按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測定,以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),得回歸方程Y=29.477X-0.709(r=0.9999),線性范圍0.24~1.20μg。2.1.5試驗(yàn)溶液的制備稱取醇提物干膏1.0g,加一定量石油醚回流提取,過濾。取殘?jiān)?.1g,加甲醇溶解并定容至100mL量瓶中,即得。2.1.6溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液適量,分別在0,2,4,6,8h按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測定,結(jié)果穗花杉雙黃酮峰面積的RSD0.9%,表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.1.7重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果精密稱取醇提物干膏5份,每份1.0g,按2.1.5項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測定,結(jié)果穗花杉雙黃酮峰面積的RSD3.1%,表明本方法重復(fù)性良好。2.1.8加樣回收試驗(yàn)精密稱取醇提物干膏6份,每份1.0g,各精密加入穗花杉雙黃酮對照品適量,按2.1.5項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測定,計(jì)算回收率,見表1,表明該方法準(zhǔn)確可靠。2.2浸膏得率測定取殘?jiān)靡迅稍镏梁阒氐恼舭l(fā)皿中,水浴蒸干,置烘箱內(nèi)105℃干燥3h,取出置干燥器內(nèi),冷卻30min,迅速精密稱定質(zhì)量,計(jì)算浸膏得率。2.3正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選擇石油醚用量、提取時間和提取次數(shù)為考察因素,每個因素取3個水平,以穗花杉雙黃酮提取量和浸膏得率為指標(biāo),稱取江南卷柏醇提物干膏1.0g,共9份,采用正交試驗(yàn)優(yōu)化脫脂工藝,試驗(yàn)安排及結(jié)果見表2,方差分析見表3。結(jié)果表明各因素對脫脂工藝的影響順序?yàn)锳>B>C。方差分析表明因素A對脫脂效果影響較大,其他因素則均無顯著性影響。綜合生產(chǎn)成本等考慮,確定最佳脫脂工藝為A1B1C1,即加6倍量石油醚回流提取2次,每次1h。2.4提取劑為雙黃酮的提取材料及浸膏最佳工藝條件的驗(yàn)證稱取江南卷柏醇提物干膏1.0g,共3份,按優(yōu)選的脫脂工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),結(jié)果殘?jiān)牖ㄉ茧p黃酮提取量分別為72.74,72.68,72.90mg,浸膏得率分別為10.98%,11.03%,11.12%,表明該脫脂工藝穩(wěn)定可行。3及采用hplc測定方法預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)直接以石油醚回流提取江南卷柏原藥材,溶劑用量較大,脫脂效果較差,故本文將藥材以乙醇回流提取制得干膏后再進(jìn)行脫脂,縮小了體積,節(jié)省了石油醚用量,脫脂效果明顯。江南卷柏總黃酮主要含穗花杉雙黃酮,質(zhì)量分?jǐn)?shù)>80%,故選擇穗花