不同日糧試羊瘤胃消化代謝參數(shù)及多氮濃度的測定

不同日糧試羊瘤胃消化代謝參數(shù)及多氮濃度的測定

腫瘤胃生態(tài)是研究反芻動物飼料營養(yǎng)價(jià)值的重要手段之一。主要指標(biāo)是腫瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)，包括腫瘤胃內(nèi)ph值、腫瘤引起的脂肪酸（vf）的摩爾組成、氮、氨基酸和微生物區(qū)域。這些參數(shù)能反映與飼糧利用效率關(guān)系密切的瘤胃發(fā)酵模式，故可作為評價(jià)飼料營養(yǎng)價(jià)值的有效指標(biāo)。血漿尿素氮（PUN）是飼糧蛋白質(zhì)代謝的產(chǎn)物，也可作為研究家畜蛋白質(zhì)沉積和限制性氨基酸的指標(biāo)。本試驗(yàn)用4只安裝瘤胃瘺管的雜種羯羊，比較了采食以玉米秸與苜蓿為粗料和以小麥秸與苜蓿為粗料的兩種等消化能、等氮全日糧顆粒料試羊的瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)（pH值、NH3-N和尿素氮）和PUN的變化。1材料和方法1.1常規(guī)免疫并口服驅(qū)蟲藥試羊?yàn)?歲左右，平均體重24kg的健康羯羊。試驗(yàn)開始前，進(jìn)行常規(guī)免疫并口服驅(qū)蟲藥；2周后進(jìn)行瘤胃瘺管安裝手術(shù)，待試羊體況完全恢復(fù)后開始試驗(yàn)。1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用2×3交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。將4只試羊分兩組（每組2只），在3期試驗(yàn)中交替接受2個(gè)飼糧處理。每期預(yù)試期10d，正試期9d。1.3日糧組成及營養(yǎng)水平日糧參照內(nèi)蒙古毛用羯羊維持需要量的1.5倍配制，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。將粉碎的原料按配方比例充分混合后，壓制成直徑5mm、長約15mm的硬顆粒飼料，風(fēng)干備用。1.4喂食和營養(yǎng)管理試驗(yàn)開始前1個(gè)月，對羊馴食使其適應(yīng)顆粒飼料。試驗(yàn)期中，試羊在消化代謝籠中單籠飼養(yǎng)，每日于8∶00和17∶00等量投喂，自由飲水。1.5樣品采集和處理1.5.1瘤液ph值的測定在每期試驗(yàn)結(jié)束的前1d，分別在8∶00（飼喂前），9∶00,10∶00,1200,14∶00,16∶00各采集瘤胃液50mL，立即測定其pH值，然后用4層紗布過濾，收集于塑料瓶，并按瘤胃液體積的1%加入飽和HgCl2溶液（使酶滅活），密封后放入冰箱（-20℃）備測定。采樣結(jié)束后，將瘤胃液解凍，取10mL于3000r/min離心10min，取上清液用于測定瘤胃液中的NH3-N及尿素氮。1.5.2含肝素鈉的00采血在每期試驗(yàn)結(jié)一天，分別于8∶00時(shí)（采食前）和12∶00（采食后4h）時(shí)，從試羊的頸靜脈采血10mL，置于含肝素鈉的離心管中。立即將血樣在2000r/min離心15min，分離出血漿，用于測定PUN。1.6瘤獸藥nh3-n濃度瘤胃液pH值用雷磁PHS-2F型數(shù)字pH計(jì)測定；瘤胃液NH3-N濃度按馮宗慈和高民（1993）改進(jìn)法測定；瘤胃液及血漿中尿素氮采用二乙?！勘壬y定（試劑盒由南京建成生物工程研究所提供）。1.7數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)按2×3交叉試驗(yàn)的方差分析方法（Lucas法）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果與討論2.1日糧對瘤液ph的影響瘤胃液pH值是反映瘤胃發(fā)酵水平的綜合性指標(biāo)。一般來說，瘤胃內(nèi)pH值隨采食而呈周期性變化，變化范圍為5.5～7.5，變化趨勢與幅度取決于飼料特性（組成、加工方式等）、飼喂方法和飼喂后時(shí)間，通常在飼喂后2～6h達(dá)最低值。pH值影響瘤胃纖維分解菌的活性，Hoover和Stocks(1991）發(fā)現(xiàn)纖維素和干物質(zhì)消化的最適pH值為6.5，適于纖維消化的pH范圍較窄，當(dāng)pH值降至5.5或升至7.5均會顯著降低纖維消化率。日糧精粗比是影響瘤胃液pH值的主要因素，除此之外，還與日糧組成及營養(yǎng)水平有關(guān)。通過合理配制日糧，可以緩解添加高比例精料時(shí)瘤胃內(nèi)pH值的下降。本試驗(yàn)A處理瘤胃液pH值為5.63～6.79，平均值6.07,B處理相應(yīng)為5.68～6.28和5.97，均處于正常生理范圍內(nèi)。兩處理間各時(shí)間點(diǎn)瘤胃液pH及其平均值均無顯著差異，且最小值近似（相差0.05）；但A處理平均值及最大值略高于B處理，但差異不顯著（P>0.05），這可能與A日糧粗飼料比例較高有關(guān)。兩組日糧的瘤胃液pH變化規(guī)律基本相同：晨飼后逐漸降低，喂后4～6h達(dá)到最低值，采食后8h逐漸升高（見圖1）。這種變化趨勢與史清河和韓友文（1999）、Preston和Leng(1987）用全混合日糧所得的結(jié)果一致。2.2瘤液nh3-n的變化綿羊瘤胃適宜的NH3-N濃度變化幅度較大。Preston和Leng(1987）提出，微生物生長對NH3-N濃度耐受的臨界范圍為6.0～30.0mg/dL。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為5.0mg/dL是瘤胃NH3-N開始積累的濃度。NH3-N濃度過低，會限制微生物合成蛋白質(zhì)和分解纖維素的效率，但濃度高到超過微生物利用能力時(shí)會造成氮的浪費(fèi)。由圖2可見，本試驗(yàn)從采食前至采食后8h內(nèi)，瘤胃NH3-N變化在6.7～26mg/dL之間，處于上述正常范圍之內(nèi)。各時(shí)間點(diǎn)瘤胃液NH3-N濃度在兩處理間差異不顯著（P>0.05),B處理平均值（16.57mg/dL）高于A處理（14.09mg/dL），但差異不顯著（P>0.05）。B處理瘤胃液NH3-N濃度在采食后1h達(dá)峰值，然后持續(xù)下降。這種變化趨勢與史清河和韓友文（1999）等所獲得的結(jié)果一致。A處理瘤胃液NH3-N濃度在采食后略下降后回升，于采食后2h達(dá)峰值，且峰值低于B處理，可能是玉米秸中易消化碳水化合物（主要為糖）比小麥秸中高之故。A處理的瘤胃液NH3-N濃度的波動幅度較B處理小，這對NH3-N的利用較為有利。2.3瘤液尿素氮b日糧瘤胃液尿素氮主要來自日糧和瘤胃氮素再循環(huán)。瘤胃中脲酶活性很高，故尿素氮濃度一般很低。較低的尿素氮有利于氮的利用，過高會導(dǎo)致血漿及尿中尿素氮升高而造成氮的浪費(fèi)。本試驗(yàn)兩個(gè)處理的瘤胃液尿素氮濃度均較低，平均值分別為0.27mg/dL和0.52mg/dL；由此可認(rèn)為兩日糧的配制均較合理，且A日糧有優(yōu)于B日糧的趨勢（P=0.339）。從動態(tài)變化看，B處理在采食后瘤胃液尿素氮濃度上升，然后緩慢下降，且在2h后趨于平穩(wěn)。這種變化規(guī)律與大多數(shù)研究結(jié)果基本相似。而A處理在采食后瘤胃液尿素氮濃度就逐漸下降，在2h后達(dá)極低值（未測出），然后緩慢上升，在8h后達(dá)到與B組相同的水平。2.4pun周年變化PUN濃度可反映瘤胃內(nèi)氮的利用狀況，也可反映動物蛋白質(zhì)合成代謝的水平，可作為研究動物蛋白質(zhì)沉積和限制性氨基酸的指標(biāo)。PUN過高，會使通過尿損失的氮增多，降低日糧氮的利用率。本試驗(yàn)中，PUN變化范圍為12.59～13.87mg/dL，采食前及采食后4hPUN在兩個(gè)處理間均無顯著差異，同一日糧采食前與采食后4h的PUN濃度間也無顯著差異。王洪榮等（1997）在內(nèi)蒙古敖漢細(xì)毛羊夏秋放牧、冬春補(bǔ)飼混合精料和青干草的條件下，測得育成母羊的PUN周年變化介于10.25～26.55mg/dL，成年母羊在12.35～32.56mg/dL之間。馬呈圖等（1996）測出甘肅高山細(xì)毛羊育成母羊和成年母羊的PUN周年變化分別為11.43～24.69mg/