紫外分光光度法測(cè)定靈芝孢子粉多糖含量的方案

紫外分光光度法測(cè)定靈芝孢子粉多糖含量的方案實(shí)驗(yàn)參與人員：實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的時(shí)間：一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康慕㈧`芝孢子粉多糖的含量測(cè)定的方法。二、 操作步驟對(duì)照品溶液的配制：取無(wú)水葡萄糖約10mg，精密稱定，置于10ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，加甲醇定容，制得對(duì)照品貯備溶液。藥材取樣量（mg）稀釋的體積（niD濃度(rng-mL)無(wú)水葡萄糖10.0001101.0000測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：加顯色劑的空白溶液：精密稱取苯酚約0.5g，用100ml蒸餾水定容。對(duì)照品溶液：密量取對(duì)照品溶液0.5ml于10ml刻度試管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至刻度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min即的。測(cè)定：在可見(jiàn)光區(qū)200-700nm內(nèi)對(duì)三份溶液進(jìn)行掃描，確定顯色劑是否影響吸光度，確定對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)。照紫外-可見(jiàn)分光光度法（2010版藥典附錄VA）測(cè)定,待測(cè)定對(duì)照品溶液的吸收光譜中顯示，無(wú)水葡萄糖在與苯酚、濃硫酸顯色后，在480-510nm處有明顯紫外吸收，Amax=492nm，故確定測(cè)定紫外吸收的測(cè)定波長(zhǎng)為492nm。全波長(zhǎng)掃描結(jié)果見(jiàn)圖1。圖1:空白、顯色劑、無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液顯色后的全波長(zhǎng)掃描光譜供試品溶液的制備方法考察取靈芝孢子粉粉末（過(guò)四號(hào)篩）0.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加水90ml，加入回流3h,放冷，搖勻，精密量取50ml，加入乙醇150ml，搖勻，4°C放置12h，取出，離心，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉(zhuǎn)移至150ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對(duì)照品溶液0.10ml，0.15ml，0.20ml，0.25ml，0.3ml分別置于試管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至刻度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，以蒸餾水為空白對(duì)照，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定各溶液吸光度。以對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。表1標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果樣品編號(hào)取用童（mL）吸光度11.00205421.53.407932.006K842J3.823753.03.9S7S含量（皿Q含量（皿QQ)槌芒或方法學(xué)考察5.1精密度試驗(yàn)取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下1.5mL無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液制備的樣品，在最大吸收波長(zhǎng)處連續(xù)測(cè)定吸光度6次，求出RSD。表2精密度考察樣品編號(hào)吸光度典平均吸光度ASDRSD%19.40970.4018000571.4220405630.40114039835039336040265.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取藥材0.5g，精密稱定，按供試品制備方法制備溶液，精密量取該供試品溶液0.5ml，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至亥U度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，在反應(yīng)后10min，15min，25min，35min，45min，60min，在最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,求RSD值。

表3穩(wěn)定性考察編號(hào)時(shí)間間隔min吸光度A平均吸光度ASDRSD%153.50220_497300046J).942153.4982,259.49544菜3.50065459.48916603.49&45.3重復(fù)性試驗(yàn)取一份藥材約0.5g精密稱定，分別精密量取6份供試品溶液0.5ml,供試品制備方法制備溶液，在最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，按測(cè)定數(shù)據(jù)求出多糖含量，并求算平均含量和RSD。表4重豆性考察樣品編號(hào)取樣童g吸光度A含量mg平均含量mg520SDRSD%1頊190.50125.193.343.7720.50230-50935.253050200.50535.2243.50233.50895.25弓0.5025tJi.49785166 '9.5023Qi.49765.165.4加樣回收率試驗(yàn)精密稱取同一批號(hào)的樣品約0.25g共6份，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液2.5ml，按照供試品制備方法制備溶液，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，依法顯色，測(cè)定吸光度，按測(cè)定數(shù)據(jù)求出各自的多糖含量，并得到回收率及RSD。表$加樣回收率考察編號(hào)取樣量當(dāng)原有童mg加入JZL里mg吸光度Amg加樣回收率*平均加樣回收率％SDRSD%1025342.5952.5{).502251946103.954101.171.S61.S42025672.5932.5{).503252022100193025S62.59S2.50.50645^265101.144025442.5742.5{).5OS752439102.795025552.5922.50.50125.1S7199.356025672.5992.5{).50235.1?5399.5S樣品溶液的制備取靈芝孢子粉粉末(過(guò)四號(hào)篩)0.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加水90ml，加入回流3h，放冷，搖勻，精密量取50ml，加入乙醇150ml，搖勻，4°C放置12h，取出，離心，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉(zhuǎn)移至150ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液。測(cè)定分別精密吸取0.5ml樣品溶液至試管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至刻度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，以蒸餾水為空白對(duì)照，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中含多糖的含量，計(jì)算其含量，即得。表6不同產(chǎn)地靈芝抱子粉樣品的多糖含重藥材批次--■rnj□取用童S取樣體積〔mL)吸光度A舍重mg多糖總含量(3o)平均含量(%)SDRSD%大豐1JJ.50270l5O9.63306.1?1241243.310.0820.5O2SQi.509.63426.1?12430.50263l5O0.63406.1?1J24吉林長(zhǎng)春1S.50160l5O9.49495.141.031.023.31DJj20.5013Qi.509.49025.131.0230L5O190L5O0.49245.121J2亳州1S.5014.0l5O0.56935.701.141.149.919.1420.5016Qi.500.57095/11.14.3S.50120l5O0.56S95.701.14山東濟(jì)寧1OJ5O3O0.590.86337.931.591.590.9103120.50290.50JJ.S6O47.911.5839.5O2S0.59t>.S66S7.961.59山東春江19.50160.59JJ.5O535.221.041.049.910.332OJ5O2O0.590.50575.221.9439.50240.590.50535.221.34金寨10.5O2S0.5009919S.901.781.780.013.JJ520.50320.500.9929S.911.7830.50300.50095213.911.78霍山一品堂19.50150250364511.332