環(huán)氧化酶-2、血管內(nèi)皮生長因子c在胃癌組織中的表達(dá)及其與淋巴管生成、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

環(huán)氧化酶-2、血管內(nèi)皮生長因子c在胃癌組織中的表達(dá)及其與淋巴管生成、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是癌癥的主要傳播形式，也是影響術(shù)后復(fù)發(fā)和五年生存率的主要原因之一。本研究采用免疫組織化學(xué)SABC法對胃癌組織COX-2、VEGF-C、VEGFR-3的表達(dá)、淋巴管密度進(jìn)行檢測，并結(jié)合完整的臨床及隨訪資料，分析它們之間的相互關(guān)系及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的關(guān)系。1材料和方法1.1病例選擇及分期51例胃癌及15例癌旁組織石蠟標(biāo)本來自于中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院1998年4月～1999年3月接受胃大部切除術(shù)的患者。男女之比為2.6:1，年齡29～80歲，平均54.9歲。其中，早期8例，進(jìn)展期43例。病理分級：高分化9例，中分化8例，低分化34例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，血行轉(zhuǎn)移5例。TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期12例，Ⅲ期14例，Ⅳ期16例。臨床隨訪63～74個月，患者生存時間為3～74個月，中位生存時間35個月。1.2試劑COX-2、VEGF-C、VEGFR-3多克隆抗體及SABC檢測試劑盒和DAB顯色液均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。1.3明書所示步驟操作免疫組化SABC法，按照SABC檢測試劑盒說明書所示步驟操作。PBS代替一抗作為陰性對照，用已知COX-2陽性前列腺增生組織切片和VEGFR-3陽性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織切片作為陽性對照。1.4vegfr-3標(biāo)記的淋巴管判定COX-2、VEGF-C的判定以胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為顯色，以陽性細(xì)胞>10%為陽性，≤10%為陰性。VEGFR-3標(biāo)記的淋巴管判定標(biāo)準(zhǔn)染色為棕黃色的內(nèi)皮細(xì)胞形成的條狀、隙狀結(jié)構(gòu)及有管腔者。在40×光鏡下確定3個著色密集的區(qū)域（熱點），200×光鏡下分別計數(shù)淋巴管個數(shù)，取其均值為淋巴管密度。1.5統(tǒng)計方法采用t檢驗，卡方檢驗，Spearman秩相關(guān)分析、Kaplan-Meier生存曲線，使用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析。2結(jié)果2.1cox-2和vegf-c表達(dá)51例胃癌組織COX-2和VEGF-C表達(dá)的陽性表達(dá)率分別為62.8%(32/51）和60.7%(31/51),COX-2和VEGF-C的陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，均位于癌細(xì)胞胞漿內(nèi)（圖1），腫瘤間質(zhì)及癌旁組織未檢出COX-2和VEGF-C表達(dá)。VEGFR-3陽性產(chǎn)物表達(dá)于腫瘤間質(zhì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中（圖2），淋巴管分布腫瘤周邊多于間質(zhì)。2.2vegf-c表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性表1經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，COX-2表達(dá)與胃癌臨床分期（r=0.34,P<0.05）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（r=-0.58,P<0.01）呈正相關(guān)，與分化程度（r=-0.57,P<0.01）呈負(fù)相關(guān)。VEGF-C表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=0.46,P<0.05），與臨床分期，分化程度無關(guān)（均P>0.05）。COX-2與VEGF-C表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.74,P<0.01）。但與患者性別、年齡、組織類型、血行轉(zhuǎn)移無關(guān)（均P>0.05）。2.3化療程度的相關(guān)表達(dá)51例胃癌組織淋巴管密度范圍為3.33～18.65個，平均9.92±3.36個。淋巴管密度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（r=0.70,P<0.01）、臨床分期（r=0.40,P=0.01）、COX-2(r=0.69,P<0.01）、VEGF-C(r=0.45,P<0.01）表達(dá)正相關(guān)，與分化程度負(fù)相關(guān)（r=-0.42,P<0.05），與組織類型、血行轉(zhuǎn)移無關(guān)（均P>0.05）。2.4兩組生存情況對比經(jīng)Kaplan-Meier生存曲線分析，COX-2表達(dá)與生存率負(fù)相關(guān)，COX-2陽性表達(dá)組患者5年生存率15.6%，陰性表達(dá)患者為36.8%,log-rank檢驗兩組生存曲線差異有非常顯著性意義（P<0.05）。而VEGF-C表達(dá)與5年生存率無關(guān)（P>0.05）。3血管內(nèi)皮生長因子與腫瘤中vegf-c表達(dá)關(guān)系的研究環(huán)氧化酶（cyclooxygenase,COX）是花生四烯酸合成前列腺素（PGs）的限速酶，在哺乳動物中COX同功酶有2種，即COX-1和COX-2。COX-2被認(rèn)為是“誘導(dǎo)性酶”，它與肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究表明：胃癌組織中COX-2的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織，COX-2表達(dá)與臨床分期、淋巴管密度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與病理分化程度負(fù)相關(guān)，提示COX-2可能是胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的重要調(diào)控因子，它的表達(dá)與胃癌的生物學(xué)行為、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前為止，胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機制尚不清楚。血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C）屬于血管內(nèi)皮生長因子家族，其受體之一VEGFR-3較特異的表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上。VEGF-C與受體VEGFR-3結(jié)合后通過MEK/ERK和PI3/激酶/Akt途經(jīng)促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增生。Yonemura等在胃癌研究中發(fā)現(xiàn)，腫瘤內(nèi)淋巴管密度與VEGF-CmRNA、胃癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)浸潤有關(guān)。在前列腺癌和惡性間皮瘤的研究也發(fā)現(xiàn)：VEGF-C表達(dá)上調(diào)促進(jìn)腫瘤的淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。最近Su等的研究表明，COX-2可能通過EP1和HER-2/Neu受體途徑上調(diào)VEGF-C的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)肺腺癌的淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。我們研究結(jié)果顯示：胃癌組織COX-2表達(dá)與VEGF-C、淋巴管密度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示：COX-2與VEGF-C及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在某種內(nèi)在的聯(lián)系。我們推測：COX-2表達(dá)上調(diào)可能促使癌細(xì)胞VEGF-C分泌增加，VEGF-C通過作用于內(nèi)皮細(xì)胞上的受體VEGFR-3，促進(jìn)淋巴管生成，淋巴管數(shù)目的增多使癌細(xì)胞接觸淋巴管的機會增多，從而促進(jìn)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。有關(guān)COX-2、VEGF-C表達(dá)與腫瘤預(yù)后關(guān)系的研究報道不多。已有資料顯示：VEGF-C表達(dá)上調(diào)在宮頸癌和乳腺癌能降低患者生存時間和生存率。COX-2表達(dá)是否與胃癌的預(yù)后有關(guān)尚不明