白芷香豆素的鎮(zhèn)痛機制

白芷香豆素的鎮(zhèn)痛機制

《白臉》最早寫在《神農(nóng)本草經(jīng)》中。它具有加熱和收斂、益氣、通風解粘液、益氣、解膿等功效。用于治療感冒頭痛、目嚨痛、鼻干痛、牙齒疼痛、傷口疼痛等。特別是陽明經(jīng)頭痛有明顯的鎮(zhèn)痛效果。白臉色的有效成分包括白臉色的香豆素和白臉色的作用。聶紅等人發(fā)現(xiàn)，白臉色的總發(fā)芽具有一定的鎮(zhèn)痛作用，但對于具有一定抗炎作用的白臉色，經(jīng)過硫處理，白臉色的含量顯著降低。香豆素類成分的含量遠高于其他成分的含量，達到1%。本研究組結(jié)果表明，白睡蓮具有良好的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，疼痛持續(xù)時間長，耐用性和成績性容易增加。因此，我們必須進一步澄清疼痛的產(chǎn)生機制，為中醫(yī)鎮(zhèn)痛劑的開發(fā)奠定良好的基礎。1材料和方法1.1材料表面1動物昆明種小鼠,體質(zhì)量18～22g,雌雄各半,合格證號:醫(yī)動管字10-5107,由長春高新醫(yī)學動物實驗研究中心提供.2實驗用白砂糖的制備白芷香豆素(CoumarinofAngelicaedahuricae,CAD)由北華大學藥學院藥理教研室配制.實驗用白芷購自吉林市江城大藥房,經(jīng)鑒定為傘形科植物杭白芷的干燥根.將白芷粉碎成粗粉,浸泡65%乙醇中,按文獻方法提取.鹽酸嗎啡注射液,沈陽第一制藥廠,批號:051108;鹽酸納洛酮,益橋(湖南)制藥有限公司,批號:20060203;冰醋酸,沈陽市東興試劑廠,批號:20060525.3hhs1-ni小鼠熱板儀,成都泰盟生物技術有限公司;電熱恒溫水浴鍋HH·S1-Ni,北京長安科學儀器廠生產(chǎn);微量移液器,法國Glison公司生產(chǎn);80-1離心機,上海手術器械廠生產(chǎn);723分光光度儀,上海第三分析儀器廠生產(chǎn).1.2方法1.2.1各組小鼠痛行為測定預選55℃熱板實驗痛閾合格的雌性小鼠50只,隨機分為5組,對照組腹腔注射生理鹽水0.1mL/10g,CAD組腹腔注射CAD60mg/kg,CAD+納洛酮組腹腔注射CAD60mg/kg后30min腹腔注射納洛酮5mg/kg,嗎啡組腹腔注射嗎啡10mg/kg,嗎啡+納洛酮組腹腔注射嗎啡10mg/kg后30min腹腔注射納洛酮5mg/kg,熱板法測定給藥后30,60,90,120,180,240min小鼠痛閾值.1.2.2cad的鎮(zhèn)痛作用預選55℃熱板實驗痛閾合格的雌性小鼠30只,隨機分為3組,對照組腹腔注射生理鹽水0.1mL/10g,CAD組腹腔注射CAD60mg/kg,CAD+利血平組腹腔注射利血平4mg/kg后4h腹腔注射CAD60mg/kg,熱板法測定給藥后30,60,90,120,180,240min小鼠痛閾值.觀察CAD的鎮(zhèn)痛作用與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的關系.1.2.3血清no含量檢測昆明種小鼠60只,雌雄各半,體質(zhì)量18～22g,隨機分為6組,分別為陰性對照組(生理鹽水0.1mL·10g)、嗎啡組(10mg/kg)、CAD低劑量組(30mg/kg)、CAD中劑量組(60mg/kg)、CAD高劑量組(120mg/kg),每天分別腹腔注射,連續(xù)4d(嗎啡組除外),末次給藥后(1.5h后陽性組腹腔注射嗎啡10mg/kg),每只鼠右后足跖皮下注射2.5%甲醛溶液20μL,2h后將小鼠快速斷頭取血,分離血清,-20℃冰箱保存.采用硝酸還原酶法測定血清中NO的含量,具體步驟參照NO檢測試劑盒使用說明書進行.1.3處理數(shù)據(jù)實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(ˉx±s)(xˉ±s)表示,兩組間差異比較采用t檢驗,多組間差異比較采用方差分析.2結(jié)果2.1cad的鎮(zhèn)痛作用與對照組比較,CAD(60mg/kg)一次性給小鼠腹腔注射,30min即顯現(xiàn)出鎮(zhèn)痛作用,90～120min作用達到最強(P<0.001),可持續(xù)到240min以上.同劑量CAD腹腔注射0.5h后,腹腔注射納洛酮(5mg/kg)可以使CAD的鎮(zhèn)痛作用明顯減弱,僅在30～60min期間有作用,說明納洛酮可以部分拮抗CAD的鎮(zhèn)痛作用.而嗎啡的鎮(zhèn)痛作用完全被納洛酮拮抗(見表1).2.2利血平-cad與cad的聯(lián)用與對照組比較,利血平(4mg/kg)與CAD(60mg/kg)合用,明顯減弱其鎮(zhèn)痛作用,說明利血平可以部分拮抗CAD的鎮(zhèn)痛作用(見表2).2.3各組小鼠血清中no、no含量的比較與對照組比較,CAD(60mg/kg)連續(xù)4d腹腔注射給藥,CAD中、高劑量組均使小鼠血清中NO的含量下降,并且呈現(xiàn)明顯的劑量效應關系.而嗎啡組小鼠血清中NO的含量明顯上升(見圖1).3利血平對cad的鎮(zhèn)痛作用納洛酮是阿片受體拮抗藥,可以阻斷嗎啡與μ,δ,κ型阿片受體結(jié)合,完全拮抗嗎啡的鎮(zhèn)痛作用.本實驗利用納洛酮觀察CAD鎮(zhèn)痛作用與阿片受體的關系.結(jié)果顯示納洛酮可以部分阻斷CAD的鎮(zhèn)痛作用.提示CAD的鎮(zhèn)痛作用可能與阿片受體之間存在一定的關系.文獻報道腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與痛和鎮(zhèn)痛有關.去甲腎上腺素能神經(jīng)末梢興奮時可釋放遞質(zhì)NE,與疼痛有密切關系,利血平屬抗去甲腎上腺素能神經(jīng)末梢藥,它主要抑制囊泡膜對遞質(zhì)NE的主動攝取過程,從而使囊泡內(nèi)貯存的遞質(zhì)逐漸減少,甚至耗竭,當神經(jīng)沖動到達交感神經(jīng)末梢時,就沒有足夠的NE被釋放,由于利血平能對抗CAD的鎮(zhèn)痛作用,說明CAD的鎮(zhèn)痛作用可能依賴于腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì).目前,已有大量證據(jù)表明NO在中樞及外周的不同痛覺調(diào)制中起重要作用.有文獻報道,利用福爾馬林致痛動物模型,腹腔或脊髓蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)注射NOS抑制劑L-NAME對第一期反應無明顯影響,但顯著抑制第二期反應,起到明顯的鎮(zhèn)痛作用.而預先給予大鼠L-Arg可以明顯對抗L-NAME的作用,提示NO參與了外周和脊髓水平的痛覺調(diào)制過程,NO具有明顯的痛敏效應.本研究