鳳仙透骨草對防風(fēng)中兩種活性物質(zhì)的血藥濃度影響

題目：鳳仙透骨草對防風(fēng)中兩種活性物質(zhì)的血藥濃度影響目錄中文摘要 Ⅰ英文摘要 Ⅱ前言 11材料與儀器 21.1儀器 21.2試劑 21.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 22實(shí)驗(yàn)方法 22.1色譜條件 22.2質(zhì)譜條件 32.3血漿樣品的處理 32.4升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 42.5LC-MS方法學(xué)考察 42.5.1專屬性 42.5.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 42.5.3準(zhǔn)確度與精密度 42.5.4基質(zhì)效應(yīng) 42.5.5回收率 42.6貼劑給藥后血藥濃度的測定 43實(shí)驗(yàn)結(jié)果 53.1專屬性考察結(jié)果 53.2標(biāo)準(zhǔn)曲線考察結(jié)果 63.3準(zhǔn)確度與精密度結(jié)果 73.4基質(zhì)效應(yīng)考察結(jié)果 73.5回收率考察結(jié)果 83.6貼劑給藥后血藥濃度的測定結(jié)果 94討論 124.1動(dòng)物給藥方式的選擇 124.2分析儀器的選擇 124.3貼劑中含藥量的確定 124.4血漿樣品的前處理 134.5透骨草的促透作用 134.6血藥濃度與骨組織中藥物濃度 134.7本實(shí)驗(yàn)研究成果的展望 13結(jié)論 14參考文獻(xiàn) 14致謝 16誠信聲明 16IIA天津市泰斯特儀器有限公司渦旋震蕩混懸儀VORTEX3德國IKA集團(tuán)水浴氮吹儀MULTIVAP112上海聲裕生物科技有限公司十萬分之一電子天平METTLERTOLEDO國際貿(mào)易（上海）有限公司1.2試劑表2實(shí)驗(yàn)所用試劑試劑名稱規(guī)格生產(chǎn)廠家防風(fēng)-成都荷花池中藥材市場鳳仙透骨草-成都荷花池中藥材市場自制貼劑-成都醫(yī)學(xué)院氯化鈉注射液分析純四川科倫藥業(yè)股份有限公司肝素分析純BIOSHARP生物公司甲醇色譜純賽默飛世爾科技有限公司升麻素甘標(biāo)準(zhǔn)品色譜純（批號：MUST-17070204）成都曼思特生物科技有限公司5-O-甲基維斯阿米醇甘標(biāo)準(zhǔn)品色譜純（批號：MUST-17031502）成都曼思特生物科技有限公司九水硫化鈉分析純成都市科隆化學(xué)品有限公司1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物品系：SPF小鼠，體重：18±2g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前一周購于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。2實(shí)驗(yàn)方法2.1色譜條件色譜柱WATERS公司ACQUITYUPLC?

BEHC18（2.1mm

×

50

mm，1.7μm），流動(dòng)相為：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫（0～2min，35%A；2～2.1min，90%A；2.1～3min，35%A）流速0.3mL/min，柱溫為40℃，檢測波長254nm，進(jìn)樣量10μL，分析時(shí)間為3min。2.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子化源（ESI），采用多反應(yīng)離子監(jiān)測模式（MRM）進(jìn)行正離子檢測，離子源溫度為130℃

，毛細(xì)管電壓0.60kV，毛細(xì)管電流62.05μA，氣體體積流量50L

/

hr，脫溶劑氣溫度

400℃

，脫溶劑氣體積流

量700

L

/

Hr，毛細(xì)管電壓為4kV，升麻素苷、5-O甲基維斯阿米醇苷母離子和定量子離子的質(zhì)荷比（m/z）分別為469.2→307.2，錐孔電壓為48V，碰撞能28V；453.2→291.2，錐孔電壓36V，碰撞能26V。升麻素苷質(zhì)譜圖2-1所示，5-O甲基維斯阿米醇苷的質(zhì)譜圖2-2所示。2.3血漿樣品的處理小鼠經(jīng)貼劑給藥后，于不同時(shí)間點(diǎn)斷頭取血，取1.5mLEP管加入肝素鈉100μL抗凝，收集新鮮血液于其中，以輕微顛倒的方式混勻，在室溫下靜置，40min后離心(10000r/min×10min)。精密量取200μL，以600μL甲醇（1:3）試劑沉淀蛋白，渦旋振蕩3min，離心(13000r/min×10min)。上清液以40℃氮?dú)饧訜岽蹈珊髲?fù)溶(35%甲醇300μL)，同條件渦旋混勻后離心。取上清液，以0.22μm有機(jī)濾頭過濾，續(xù)濾液10μL注入LC-MS儀中檢測。2.4升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定(升麻素苷0.00556g、5-O-甲基維斯阿米醇苷0.00584g)，分別置于100mL容量瓶中，用RO水溶解并稀釋、定容至刻度，配制為儲備液(升麻素苷0.0556mg/mL、5-O-甲基維斯阿米醇苷0.0584mg/mL)。精密移取儲備液適量于同一容量瓶中，以RO水定容，配制成升麻素苷(濃度分別為6.67，33.36，66.72，133.44，222.40，266.88ng/mL)和5-O-甲基維斯阿米醇苷(濃度為分別0.88，4.38，8.76，17.52，28.03，35.04ng/mL)的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存，備用。2.5LC-MS方法學(xué)考察[24]2.5.1專屬性將不同個(gè)體的小鼠空白血漿進(jìn)行收集、加入一定濃度（升麻素苷濃度133.44ng/mL；5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度為17.52ng/mL）的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液100μL的小鼠空白血漿、貼劑給藥后的小鼠血漿樣品各6份，每份200μL，按照項(xiàng)2.3下方法進(jìn)行操作，將所得上清液進(jìn)樣，注入LC-MS進(jìn)行測定，記錄數(shù)據(jù)，考察方法專屬性。2.5.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立收集6份小鼠空白血漿各200μL于EP管中，分別加入已配置好的升麻素苷和5-O甲基維斯阿米醇苷的一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液各100μL，制成相當(dāng)于升麻素苷濃度分別為6.67，33.36，66.72，133.44，222.40，266.88ng/mL和5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度分別為0.88，4.38，8.76，17.52，28.032，35.04ng/mL的模擬血漿樣品，均按照2.3下方法進(jìn)行處理，將所得上清液進(jìn)樣，注入LC-MS進(jìn)行測定，記錄兩種化合物的峰面積。2.5.3準(zhǔn)確度與精密度收集15份小鼠空白血漿各200μL于EP管中，按照項(xiàng)2.3下的方法處理后，分別加入高、中、低三種濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液100μL，作為質(zhì)控樣品（QC）。升麻素苷濃度分別為266.88、133.44、6.67ng/mL；5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度分別為35.04、17.52、0.88ng/mL。每一批質(zhì)控樣品各5份，分別記錄兩種化合物峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品的測定濃度，計(jì)算相應(yīng)的RSD值，并與制備濃度比較求得方法的準(zhǔn)確度。2.5.4基質(zhì)效應(yīng)(ME)收集15份小鼠空白血漿各200μL于EP管中，按照項(xiàng)2.3下方法處理后，有機(jī)相經(jīng)氮?dú)獯蹈珊?，管中加入高、中、低三種質(zhì)量濃度（升麻素苷濃度分別為266.88，133.44，6.67ng/mL；5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度分別為35.04，17.52，0.88ng/mL）的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液100μL，經(jīng)氮?dú)獯蹈桑?5%甲醇300μL復(fù)溶，渦旋3min，13000r/min高速離心10min后，取上清液進(jìn)樣，注入LC-MS測定，記錄兩種化合物峰面積(A)。另取15支空白管，分別加入相同體積用流動(dòng)相配制的高、中、低三種濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液100μL，按照項(xiàng)2.3下的方法40℃氮?dú)獯蹈珊?，管中加?5%甲醇流動(dòng)相復(fù)溶，渦旋離心后取上清液進(jìn)樣，注入LC-MS測定，記錄兩種化合物峰面積(B)。計(jì)算相應(yīng)平均值及RSD值。2.5.5回收率收集15份小鼠空白血漿各200μL于EP管中，按項(xiàng)2.3下方法處理后，分別加入高、中、低三種質(zhì)量濃度（升麻素苷濃度分別為266.88，133.44，6.67ng/mL；5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度分別為35.04，17.52，0.88ng/mL）的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液100μL，作為質(zhì)控樣品（QC），每個(gè)濃度點(diǎn)平行添加5份，取上清液進(jìn)樣，注入LC-MS測定，記錄兩種化合物峰面積；另按項(xiàng)2.5.4下“基質(zhì)效應(yīng)”分別制備含高、中、低三種不同質(zhì)量濃度混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的質(zhì)控樣品（QC），每個(gè)濃度點(diǎn)平行添加5份，取上清液進(jìn)樣，注入LC-MS測定，記錄兩種化合物峰面積。計(jì)算兩種處理方法所得到的兩種化合物峰面積之比，即為升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的回收率，并計(jì)算相應(yīng)平均值及RSD值。2.6貼劑給藥后的血藥濃度測定將80只SPF小鼠隨機(jī)分成5組，每組為16只，分別用兩種貼劑給藥，記錄給藥時(shí)間。使用8%NaS脫去小鼠背部毛發(fā)，繼續(xù)喂養(yǎng)24h后在小鼠脊柱處敷貼兩種自制貼劑，按照處方制備成的防風(fēng)貼劑（每片含防風(fēng)1.2g）和防風(fēng)+透骨草混合貼劑(每片含防風(fēng)和鳳仙透骨草各1.2g)，敷貼面積約為3.5×3.5cm2（貼劑及給藥方式如圖4-1所示）。給藥時(shí)間分別為0.5h、1h、2h、2.5h、3h，在相應(yīng)時(shí)間將小鼠斷頭取血，收集血液，按項(xiàng)2.3下方法操作，取上清液進(jìn)樣，注入LC-MS測定,按照色譜及質(zhì)譜分析條件對處理后的樣品進(jìn)行分析，記錄升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積。圖4-1自制貼劑及小鼠背部給藥方式3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1專屬性考察結(jié)果在選定色譜、質(zhì)譜條件下，升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷分別在0.94min，1.28min附近出峰，分離度良好，兩種化合物的測定不受小鼠空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，方法專屬性好。結(jié)果見圖3-1所示。A BDCE3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線考察結(jié)果記錄相應(yīng)濃度的峰面積，結(jié)果見表3，分別以對照品的質(zhì)量濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo),峰面積（mAU）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3-2所示，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)，線性范圍及最低定量下限見表4。表3兩種物質(zhì)的線性關(guān)系考察結(jié)果升麻素苷5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度（ng/ml）峰面積（mAU）濃度（ng/ml）峰面積（mAU）123456266.88222.40133.4466.7233.366.6718041464101977859345435.0428.0317.528.764.380.8830622312978358表4兩種物質(zhì)線性關(guān)系中相關(guān)參數(shù)化合物回歸方程相關(guān)系數(shù)r線性范圍（ng/ml）定量下限(ng/mL)升麻素苷Y=4.956X+416.160.99576.67～266.886.675-O-甲基維斯阿米醇苷Y=8.4216X-2.95770.99540.88～35.040.88圖3-2血漿中兩種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線3.3準(zhǔn)確度與精密度考察結(jié)果記錄相應(yīng)峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算濃度，結(jié)果如表5所示。由表可知，此方法準(zhǔn)確度均介于85%～120%，RSD均小于15%（n=5），以此作為測定血藥濃度中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量的分析方法符合要求。升麻素苷濃度（ng/mL）5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度（ng/mL）6.67133.44266.880.8817.5235.0412345均值SDRSD（%）8.257.238.048.247.437.840.486.00130.72148.68137.18136.57134.75137.586.704.90291.94266.92286.09240.89285.68274.3020.927.600.780.840.780.720.720.760.056.4914.8515.2015.4415.0915.2015.160.221.4037.5336.8235.9836.7036.2236.650.601.60準(zhǔn)確度（%）117.00103.10102.7887.3386.53104.59表5準(zhǔn)確度與精密度考察結(jié)果3.4基質(zhì)效應(yīng)考察結(jié)果分別記錄兩種處理方法下兩種化合物的峰面積,計(jì)算不含基質(zhì)峰面積與含基質(zhì)峰面積的比值，如表6所示。結(jié)果發(fā)現(xiàn)基質(zhì)效應(yīng)平均值介于85%～100%之間，可認(rèn)為基質(zhì)中的共存成分對被測物質(zhì)不存在影響。表6基質(zhì)效應(yīng)考察結(jié)果化合物濃度（ng/mL）不含基質(zhì)峰面積（mAU）含基質(zhì)峰面積（mAU）基質(zhì)效應(yīng)（%）平均值(%)RSD（%）升麻素苷6.6760154590.6890.153.0363256789.7261552785.6955451392.6057853292.04133.441293109884.9290.866.641333131498.571341123091.721611152094.351420120384.72266.882598213282.0687.237.722240181480.982301195084.752003183591.612110204196.735-O-甲基維斯阿米醇苷0.88111090.9188.559.0610990.001010100.0011981.8210880.0017.5215114596.0395.224.2416015395.6315214897.3716314488.3415915798.7435.0450140180.0488.029.9443233477.3140137192.5241138393.1933532597.013.5回收率考察結(jié)果分別記錄兩種處理方法下兩種化合物的峰面積，并計(jì)算處理前加樣峰面積與處理后加樣峰面積百分比，如表7所示。數(shù)據(jù)顯示，回收率平均值介于85%～115%之內(nèi)，可得在小鼠血漿中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷經(jīng)處理后回收率穩(wěn)定，RSD值均<10%(n=5),回收率精密可重現(xiàn)。表7回收率數(shù)據(jù)結(jié)果化合物濃度（ng/mL）處理前加樣峰面積（mAU）處理后加樣峰面積（mAU）回收率（%）平均值（%）RSD（%）升麻素苷6.6746254584.7785.054.0345256779.7245652786.5345751389.0845353285.15133.441064109896.9088.128.251153131487.751096123089.111093142476.761084120390.11266.881863213287.3890.964.191739181495.871834195094.051610183587.741832204189.765-O-甲維斯阿米醇苷0.888988.8986.895.897977.7891090.008988.898988.8917.5212814588.2887.503.3313115385.6213314889.8613014490.2813115783.4435.0431940179.5586.398.3931333493.7130637182.4831238381.4630832594.773.6貼劑給藥后血藥濃度測定結(jié)果小鼠于不同時(shí)間點(diǎn)敷用透皮貼劑后，按照實(shí)驗(yàn)方法收集并處理血樣，測定并記錄防風(fēng)組、防風(fēng)+鳳仙透骨草組各時(shí)點(diǎn)的升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積，如下表8所示，統(tǒng)計(jì)分析各時(shí)點(diǎn)下藥物作用效果，發(fā)現(xiàn)各時(shí)點(diǎn)下防風(fēng)+鳳仙透骨草組兩種化合物的峰面積均高于防風(fēng)組。分別將各時(shí)點(diǎn)的峰面積繪制成柱狀圖如圖5-3，圖5-4所示。去掉每組數(shù)據(jù)中最大值及最小值后計(jì)算峰面積平均值結(jié)果見表8，并將其繪制成折線圖如圖5-5所示，可發(fā)現(xiàn)升麻素苷在2h時(shí)峰面積開始快速上升，在2.5h開始逐漸下降；5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積在1h開始快速上升，2.5h開始逐漸下降。表8各時(shí)點(diǎn)的升麻素苷及5-O甲基維斯阿米醇苷的峰面積0.5h1h2h2.5h3h升麻阿米升麻阿米升麻阿米升麻阿米升麻阿米防風(fēng)組116241441515143199417124791081069147216731402323166125012821352222605299316191331324190223815513792111261170417851201598100139917813831621093144515211181707164144018522601301711118615481301904104234513514061871399135均值1628.33130.831728.50144.501777.67158.671840.33170.001523.00168.83SD94.4710.44349.5536.15472.5323.38506.2645.13579.8565.98防+透組11247140186616513003292298200157615729681491543123259535363821801906155332461621910115336222241914362092269419161952616227140230734422901575115514821482385206211622255674091571300613021441434184120220854183051830123均值1693.50156.331959.00170.001996.17273.504549.67303.331758.33186.50SD822.6220.34463.2244.72861.0363.431521.31104.72219.1978.35圖5-3各時(shí)點(diǎn)升麻素苷的峰面積圖圖5-4各時(shí)點(diǎn)5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積圖圖5-5各時(shí)點(diǎn)峰面積平均值4討論4.1動(dòng)物給藥方式的選擇實(shí)驗(yàn)中給藥方式的選擇發(fā)揮著重要作用，本實(shí)驗(yàn)曾嘗試過直接使用防風(fēng)水煎液、防風(fēng)+透骨草混合水煎液浸泡大小鼠的膝關(guān)節(jié)進(jìn)行給藥，但由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物固定不便，給藥過程中動(dòng)物的活動(dòng)容易將藥物灑出，損耗藥物，藥物的吸收減少，導(dǎo)致體內(nèi)藥效不太明顯。為此需要更簡便且穩(wěn)定的給藥方式，外用透皮貼劑的使用，使藥物透過皮膚吸收，經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的層層吸收可使藥物緩慢而持續(xù)地到達(dá)體內(nèi)，提高藥物在體內(nèi)的生物利用率，同時(shí)避免了由于小鼠活動(dòng)的影響，使結(jié)果更加穩(wěn)定準(zhǔn)確。故本實(shí)驗(yàn)采用貼劑方式給藥，將小鼠背部脫毛，利于貼劑固定于背部，使藥物持續(xù)吸收進(jìn)入體內(nèi)。4.2分析儀器的選擇目前普遍認(rèn)為中藥體內(nèi)化合物血藥濃度較低[25]，且對于外用貼劑來說，藥物經(jīng)過層層吸收擴(kuò)散進(jìn)入體內(nèi)的含量被體內(nèi)稀釋后濃度較低，常用的儀器難以測定[26]，而血藥濃度在一定程度上決定了藥物效應(yīng)的發(fā)揮。本實(shí)驗(yàn)需測定血清中化學(xué)成分進(jìn)行分析，曾嘗試?yán)酶咝б合啵℉PLC）進(jìn)行檢測，但結(jié)果并不樂觀，響應(yīng)值低，未能實(shí)現(xiàn)對樣品中成分的定性定量分析，為此需要靈敏度更高的分析儀器進(jìn)行樣品分析。液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）具有高選擇性，低檢測限[27]，同時(shí)其用樣量少，分析時(shí)間短，減輕處理和分析生物樣品的工作量，定性分析結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適合用于生物樣品的分析檢測。故本實(shí)驗(yàn)選擇采用LC-MS對血漿樣品進(jìn)行分析。4.3貼劑中含藥量的確定貼劑的組成包括水性凝膠基質(zhì)、藥物、其他輔料等，而貼劑中各組成的比例及含藥量都十分重要，將會影響貼劑的制備及貼劑中主要藥物藥效的發(fā)揮。基質(zhì)中藥物含量越高，透皮吸收量越大。本實(shí)驗(yàn)嘗試過多種比例的處方組成，其中每片貼劑含中藥量分別為0.4g，0.8g，1.2g，1.6g，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)在LC-MS測定下，含藥量為0.4g和0.8g時(shí)，化合物峰形雜亂無章，且體內(nèi)藥物濃度較低，難對結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確分析；含藥量為1.2g時(shí)，化合物峰形光滑，體內(nèi)藥物濃度可被進(jìn)行定性及定量分析；含藥量為1.6g時(shí)，雖藥量提高2倍，但體內(nèi)藥物濃度并未呈現(xiàn)兩倍趨勢，且效果不及1.2g含藥量時(shí)的藥物濃度。因此本實(shí)驗(yàn)確定每片貼劑含藥量為1.2g，即防風(fēng)貼劑中每片含防風(fēng)1.2g，防風(fēng)+透骨草混合貼劑中每片含防風(fēng)和鳳仙透骨草各1.2g。4.4血漿樣品的前處理血液中成分十分復(fù)雜，干擾多，而待測藥物組分濃度低，若不經(jīng)處理直接進(jìn)樣將有可能影響色譜柱及儀器的運(yùn)行，適當(dāng)?shù)奶幚砟芨玫臐M足測定方法對分析樣品的要求，也可避免蛋白質(zhì)在色譜柱上的沉積和堵塞；延長色譜柱的壽命；防止分析儀器的污染，劣化；故血漿樣品應(yīng)當(dāng)經(jīng)過處理后注入儀器分析。當(dāng)含藥物血漿與水溶性有機(jī)溶劑的體積比為1：（2～3）時(shí)，沉淀血漿中蛋白質(zhì)的效果最佳，使與其結(jié)合的藥物釋放出來，因此本實(shí)驗(yàn)選擇含藥血漿：甲醇體積比為1:3進(jìn)行蛋白沉淀對血樣進(jìn)行前處理。4.5透骨草的促透作用本實(shí)驗(yàn)中貼劑發(fā)揮藥理作用的方式是透皮吸收。經(jīng)皮給藥系統(tǒng)[28]（TransdermalDrugDeliverySystems,TDDS）是指藥物經(jīng)皮膚外敷的方式，到達(dá)毛細(xì)血管吸收，通過血液循環(huán)進(jìn)入到體內(nèi)達(dá)到有效血藥濃度從而發(fā)揮藥效的一種給藥方式。此種方式有很多優(yōu)勢：口服給藥所引起首過效應(yīng)可被避免；給藥方便，患者依從性提高；給藥持續(xù)且穩(wěn)定，藥物療效持久；不良反應(yīng)減少。此種給藥方式只有藥物透過皮膚吸收進(jìn)入血液循環(huán)才能達(dá)到有效的治療效果。皮膚是人體的第一道防線[29]，是面積最大的器官，為人體設(shè)立阻止外界有害物質(zhì)進(jìn)入的屏障。藥物透皮吸收的關(guān)鍵是要穿過皮膚的角質(zhì)層[30]。在藥物理化性質(zhì)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生理狀態(tài)相近的情況下，劑型因素將會成為影響貼劑給藥時(shí)吸收情況的重要因素。藥物越容易從制劑中釋放，越有利于透皮吸收。對于半固體制劑來說藥物的釋放較快；基質(zhì)中含藥量越高，藥物經(jīng)皮吸收量越大，但當(dāng)含藥量超過一定值時(shí)，藥物分子將不易透皮吸收，導(dǎo)致吸收量飽和而不再增加；給藥面積增大，吸收量亦增加，但面積過大，會降低患者用藥的依從性。因此貼劑制備中處方比例尤為重要。在選擇合適的處方制備下所得到貼劑給藥后發(fā)現(xiàn)3h內(nèi)，防風(fēng)+鳳仙透骨草組血藥濃度中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量較高，防風(fēng)組中兩種物質(zhì)含量較低，2.5h后藥物血藥濃度呈下降趨勢，但仍高于防風(fēng)組。升麻素苷含量在2～2.5h實(shí)現(xiàn)快速增長，5-O甲基維斯阿米醇苷含量在1～2.5h實(shí)現(xiàn)快速增長。說明在此貼劑外用時(shí)，3h內(nèi)鳳仙透骨草確實(shí)對防風(fēng)中兩種抗炎鎮(zhèn)痛活性成分有促吸收入血作用，且在2.5h效果最顯著。4.6血藥濃度與骨組織中藥物濃度實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，不同時(shí)間點(diǎn)（0.5h，1h，2h，2.5h，3h）下，同一個(gè)體里，血樣中兩種化合物的含量較低，而骨組織中藥物含量較高，說明藥物吸收入血后開始向組織中逐漸分布，通過實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證了透骨草的引經(jīng)作用，對《痹證通論》書中所指出的“透骨草透達(dá)之力頗強(qiáng)，內(nèi)服可透筋骨之伏邪外達(dá)，外洗可引諸藥直達(dá)筋骨”有了初步證實(shí)，為進(jìn)一步研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。4.7本實(shí)驗(yàn)研究成果的展望采用貼劑給藥形式治療退行性骨關(guān)節(jié)病不但使用方便，還可提高患者依從性。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)鳳仙透骨草能促進(jìn)其它藥物透皮入血，今后將根據(jù)經(jīng)典方劑制備含藥味更多的貼劑，為退行性關(guān)節(jié)病的治療提供新的治療手段。結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3h內(nèi)，防風(fēng)-鳳仙透骨草組血藥濃度中升麻素苷和5-O甲基維斯阿米醇苷含量均高于防風(fēng)組，2.5h后藥物血藥濃度呈下降趨勢，但仍高于防風(fēng)組。升麻素苷含量于2～2.5h快速增長，5-O-甲基維斯阿米醇苷含量在1～2.5h實(shí)現(xiàn)快速增長。說明在此貼劑外用時(shí)，3h內(nèi)鳳仙透骨草確實(shí)對防風(fēng)中兩種抗炎鎮(zhèn)痛活性成分有促吸收入血作用，且在2.5h效果最顯著。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示鳳仙透骨草與防風(fēng)的配伍使用后，防風(fēng)中主要活性成分在體內(nèi)的濃度有所改變，對防風(fēng)的透皮吸收入血有一定的促進(jìn)作用，從實(shí)驗(yàn)角度驗(yàn)證了鳳仙透骨草在外用時(shí)能促進(jìn)其他藥物的吸收入血，繼而能夠使其到達(dá)病患部位，同時(shí)驗(yàn)證了透骨草“外洗可引諸藥直達(dá)筋骨”觀點(diǎn)。參考文獻(xiàn)[1]楊威,石繼祥,盧明.骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2019,19(08):84-85+87.[2]陳松.骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息摘,2019,19(07):27-28.[3]張晨,馬駿,黨曉謙，等.非甾體抗炎藥治療骨關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展[J].中華關(guān)節(jié)外科雜志(電子版),2017,11(02):180-184.[4]林新艷,王宓,徐超，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選山黃祛痛噴霧劑醇提工藝[J].中國藥業(yè),2019,28(09):28-30.[5]陳佳,柯生海,趙芳等.中藥熱敷治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎62例[J].中醫(yī)研究,2015,28(03):14-15.[6]劉津翬.中醫(yī)外治法治療膝骨關(guān)節(jié)炎研究進(jìn)展[J].國醫(yī)論壇,2019,34(01):68-70[7]李中立，張衛(wèi)，張瑞賢.本草原始[M].學(xué)苑出版社，2011:19.[8]劉衡如，劉山永，錢超塵.《本草綱目》研究上[M].華夏出版社，2009:964.[9]胡成剛.苗藥資源學(xué)[M].中國古籍出版社，2007:426.[10]賈媛,張恒玉,柴堯,等.東北地區(qū)鐵線透骨草藥材的HPLC指紋圖譜研究[J].中國藥房,2017,28(9):1265-1267.[11]羊菲,金若敏,范斌,等.復(fù)方透骨草溶液抑菌和抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海中醫(yī)藥雜志,2017,51(5):82-85.[12]馮玉,王璇.鳳仙花不同藥用部位化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].山東中醫(yī)雜志,2016,35(08):749-753.[13]王興伯.透骨草抗氧化活性成分的篩選研究[D].蘭州理工大學(xué),2016.[14]南京藥學(xué)院．中草藥學(xué)[M]．南京：江蘇人民出版社，1976：633．[15]趙紫亮.中藥組方治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究[D].長春中醫(yī)藥大學(xué),2015.[16]王康振，楊健松，張會良.中藥熏洗治療膝關(guān)節(jié)滑膜炎的效果研究[J].實(shí)用中西結(jié)合臨床，2015，（08）：30-31.[17]譚輝.中藥透骨草的化學(xué)成分及藥理活性探究[J].中國醫(yī)藥指南,2017,15(25):29-30.[18]張?zhí)m坤,盛蕾,過偉峰，等.“防風(fēng)”在中藥組方配伍中的意義[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2016,22(08):1107-1108.[19]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015:149.[20]初麗娟.防風(fēng)有效部位的藥理作用研究[J].大家健康(學(xué)術(shù)版),2016,10(13):23-24.[21]劉雙利,姜程曦,趙巖,等.防風(fēng)化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2017,48(10):2146-2152.[22]辛國,李鑫,黃曉巍.防風(fēng)化學(xué)成分及藥理作用[J].吉林中醫(yī)藥,2018,38(11):1323-1325.[23]戰(zhàn)皓,方婧,吳宏偉,等.基于藥典的防風(fēng)、白芷有效成分近紅外光譜定量分析[J].中國藥物警戒,2016,13(12):724-729.[24]朱慧,劉忠泉,謝莉,等.應(yīng)用高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測貝達(dá)喹啉血藥濃度[J].中國防癆雜志,2018,40(12):1319-1324.[25]徐晶晶,尚明英,徐風(fēng),等.臨床常用中西藥血藥濃度的比較與分析[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2017,52(08):1222-1234.[26]歐霞,余承群,李勁平.玄夏止痛巴布劑在體透皮吸收研究[J].家庭醫(yī)藥,2018,(12):183.[27]程瑤,邵云云,劉俊瑾,等.基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的代謝組學(xué)生物樣本——血液及尿液的收集