薄層色譜TLC-5-薄層色譜法分離有機(jī)混合物

實(shí)驗(yàn)四薄層色譜TLC（薄層色譜是分離純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵竽康模毫私獗由V的原理和方法。要求：初步掌握薄層板制版，點(diǎn)樣，展開等操作。二、基本原理：利用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（分配）的不同；或其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)進(jìn)行反復(fù)的吸附，或分配作用，從而使各組分分離。本實(shí)驗(yàn)薄層色譜法中用的吸附劑為硅膠G，展開劑是9∶1的無水苯和乙酸乙酯的混合溶劑。最開始蘇丹Ⅲ和偶氮苯被吸附在硅膠上，當(dāng)展開劑通過時(shí)，由于蘇丹Ⅲ和偶氮苯本身極性和在展開劑中的溶解度不同，兩者在硅膠上的移動(dòng)速度也就不同（一般溶解度大和極性小的移動(dòng)更快），從而將混合物分開，并且可根據(jù)產(chǎn)生的不同比移值Rf來定性的鑒別化合物。溶質(zhì)的最高濃度中心至原點(diǎn)中心距離展開劑前沿至原點(diǎn)中心距離Rf＝三、實(shí)驗(yàn)操作：1.薄層版的制備：

取兩塊20cm×5cm左右的玻璃板，洗凈，烘干。在80ml燒杯中，放入約10g硅膠G，加入約20ml蒸餾水，調(diào)成糊狀，其稀稠為在震動(dòng)下可流動(dòng)，倒在玻璃板上。用食指和拇指拿住玻璃板，前后左右振搖、擺動(dòng)，使流動(dòng)的糊狀物均勻的鋪在玻片上（要求：制成的板厚薄均勻，無氣泡。）將已涂好的硅膠G薄層板在室溫下，水平放置半小時(shí)后（注意：室溫放置必須使玻板干透，否則會(huì)出現(xiàn)斷裂現(xiàn)象），移入烘箱，慢慢升溫至110℃，恒溫半小時(shí)。

2.點(diǎn)樣：樣品為蘇丹Ⅲ，偶氮苯及兩者混合樣。每塊板各點(diǎn)三個(gè)樣品一個(gè)，兩塊板相同。在薄層板一端約1cm處輕輕畫一直線，取管口平整的毛細(xì)管，于畫線處輕輕點(diǎn)樣（毛細(xì)管剛接觸薄板即可）。樣點(diǎn)間距1cm—1.5cm，斑點(diǎn)一般不超過2mm（注：因溶液太稀或樣點(diǎn)太小，可重復(fù)點(diǎn)樣。但應(yīng)在前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后，方可重點(diǎn)，以防樣點(diǎn)被溶解掉。樣點(diǎn)過大，造成拖尾，擴(kuò)散等現(xiàn)象，影響分離效果）

偶氮苯蘇丹Ⅲ展開劑選用9:1的無水苯－乙酸乙脂3.展開：展開劑—無水苯27ml，乙酸乙酯3ml。將展開劑倒入層析缸，其高度不超過1cm（注：如超過點(diǎn)樣線，則樣點(diǎn)將被溶解掉）。薄層色譜的展開，須在密閉容器中進(jìn)行。為使展開劑蒸汽，在缸內(nèi)迅速達(dá)到平衡，在缸內(nèi)壁放置一高5cm，環(huán)繞周長約4/5的濾紙，或放置兩張11cm濾紙，下面浸入展開劑中。將點(diǎn)樣好的薄層板小心的放到層析缸中，點(diǎn)樣的一端朝下，浸入展開劑中約0.5cm。

一般情況，先在薄片另一端1cm處畫一條直線，展開劑達(dá)到此線時(shí)，立即取出。如未畫線，觀察展開劑前沿上升到一定高度時(shí)取出，并盡快在展開劑前沿畫出標(biāo)記。（注意：如不注意，展開劑揮發(fā)后，就無法確定展開劑上升的高度。）將薄層板晾干。觀察混合試樣斑點(diǎn)出現(xiàn)的位置及與其相應(yīng)