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三十六微生物的培養(yǎng)技術及應用(建議用時:40分鐘)一、選擇題:每小題給出的四個選項中只有一個符合題目要求。1.藝術不只存在于紙筆之間,我們可以用培養(yǎng)皿當紙,接種環(huán)當筆,各種形態(tài)、顏色的細菌和真菌當顏料,畫出別具風格的作品。如在下列作品培養(yǎng)過程中,白色霉菌帶有毛茸茸的感覺,可描繪大熊貓的皮毛,紅色大腸桿菌可以描繪鵝嘴,假單胞桿菌可以描繪水波。下列說法錯誤的是()A.制備培養(yǎng)基時要經過計算→稱量→溶化→調pH→滅菌→倒平板等步驟B.圖甲作品培養(yǎng)基的pH需為酸性,圖乙作品培養(yǎng)基的pH則需為中性或微堿性C.使用接種環(huán)接種時,取菌種前和接種后都需將接種環(huán)進行干熱滅菌D.培養(yǎng)成型的作品應低溫保存,以免菌株瘋長影響整體效果2.(2022·福建漳州一模)關于下列生產生活實例中生物學原理的分析,錯誤的是()選項生產生活實例生物學原理A不宜食用長時間存放的剩菜剩菜容易滋生細菌,易產生亞硝酸鹽B用巴氏消毒法對牛奶消毒殺死牛奶中全部微生物,且不破壞牛奶中的營養(yǎng)成分CDNA指紋技術用于偵破案件不同人體內的DNA所含的脫氧核苷酸序列不同D輪換種植不同農作物不同農作物對礦質元素的吸收具有選擇性3.巴氏殺菌乳是以生牛(羊)乳為原料,經巴氏殺菌等工序制得的液體產品,殺滅了牛奶中有害菌群的同時保存了牛奶的營養(yǎng)物質和純正口感。據(jù)國家標準每毫升合格巴氏殺菌乳中細菌總數(shù)不得超過50000個。某興趣小組進行了新鮮牛奶合適的消毒溫度的探究,下列相關實驗操作不合理的是()A.配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基并在121℃、100kPa條件下處理15~30minB.將等量的新鮮牛奶分別置于60℃、70℃、80℃、90℃恒溫水浴鍋中處理30minC.對處理后的牛奶進行梯度稀釋后,利用涂布法接種平板并在37℃下培養(yǎng)24hD.統(tǒng)計培養(yǎng)基上全部菌落數(shù),以菌落數(shù)最少組的處理溫度作為牛奶最適消毒溫度4.(2023·山東濰坊模擬)某興趣小組為研究“使用公筷對餐后菜品細菌數(shù)量的影響”,將每道菜分為3盤,一盤取樣冷藏,一盤使用公筷,一盤不用公筷,實驗過程如下圖。下列相關操作或敘述正確的是()A.配制培養(yǎng)基X并在121℃、100kPa條件下處理15~30minB.固體培養(yǎng)基X對菜品中的細菌有選擇性C.在固體培養(yǎng)基X上可用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種細菌D.根據(jù)菌落的特征可以準確判斷細菌的種類5.(2022·山東日照三模)金黃色葡萄球菌(可產生色素使菌落呈金黃色)可以產生溶血素,因而在血瓊脂平板(加入了脫纖維羊血)上生長時,菌落周圍會出現(xiàn)透明溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌對高鹽環(huán)境有一定耐受能力。下列敘述正確的是()A.血瓊脂平板配制時需要在加入血液后進行高壓蒸汽滅菌B.在平板中加入脫纖維羊血的目的是為該菌的生長提供碳源和氮源C.培養(yǎng)基中加入較高濃度的NaCl溶液有利于對金黃色葡萄球菌的篩選D.無法在血瓊脂平板上區(qū)分金黃色葡萄球菌和也能形成溶血環(huán)的溶血性鏈球菌6.土壤中的溶磷菌能夠把難溶態(tài)的磷轉化為可被植物直接利用的可溶性磷,從土壤中篩選出溶磷能力強的溶磷菌制成菌肥,有利于植物對磷元素的吸收。下列有關操作和分析錯誤的是()A.土壤取樣、稱取土壤、稀釋樣品都在酒精燈火焰旁進行B.需要用含難溶態(tài)磷的固體培養(yǎng)基進行目的菌株的分離C.推測難溶態(tài)磷的分解可能與溶磷菌分泌的代謝產物有關D.實驗組與對照組可溶性磷含量差值最大的菌株適合制成菌肥7.菜籽粕含有35%~45%的蛋白質,是畜禽飼料的重要原料,但其中的單寧等抗營養(yǎng)因子限制了菜籽粕的應用。研究者將不同菌種接種到菜籽粕與麩皮制成的固體培養(yǎng)基中發(fā)酵48h,測定菜籽粕中單寧的含量,結果如下圖。下列相關敘述錯誤的是()A.菜籽粕與麩皮為微生物提供碳源和氮源B.接種后需對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌C.黑曲霉菌對單寧的去除效果最為理想D.對照組為不接種微生物的固體培養(yǎng)基8.(2023·廣東深圳模擬)金黃色葡萄球菌是一種耐高鹽的食源性致病微生物。哥倫比亞血平板是含無菌脫纖維羊血等成分的固體培養(yǎng)基,生長在該培養(yǎng)基上的金黃色葡萄球菌菌落能破壞其周圍的紅細胞,產生透明的溶血圈。下圖為檢測某種飲料是否被金黃色葡萄球菌污染的操作流程,據(jù)此分析不正確的是()A.7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基從功能角度劃分屬于選擇培養(yǎng)基B.振蕩培養(yǎng)后培養(yǎng)基變渾濁是耐高鹽的微生物數(shù)量增多所致C.若最終長出的菌落周圍出現(xiàn)透明的溶血圈,則說明該飲料被金黃色葡萄球菌污染D.若取菌種后的接種方法為稀釋涂布平板法,則可對待測飲料中金黃色葡萄球菌計數(shù)9.有機磷農藥(如對硫磷,俗稱1605)一般都具有很強的毒性,且結構穩(wěn)定,難以清除,易在土壤、果蔬中殘留,會對人體造成潛在的危害。為了獲得高效降解有機磷農藥的微生物,研究人員設計了下圖所示的實驗方案。下列有關敘述正確的是()A.選取的土壤樣品需進行滅菌處理B.該方案中的CNFM是選擇培養(yǎng)基C.平板培養(yǎng)的目的是為了加速微生物生長D.根據(jù)檢測結果,選出對硫磷濃度最低的錐形瓶內的微生物10.一次性口罩的主要成分為聚丙烯纖維(PP),某科研團隊準備從土壤中篩選出高效降解一次性口罩的細菌。圖甲表示PP分解菌分離與計數(shù)的過程,6號試管涂布的三個平板的菌落數(shù)為550、601、688;7號試管涂布的三個平板的菌落數(shù)為58、73、97;8號試管涂布的三個平板的菌落數(shù)為8、15、28。圖乙表示在培養(yǎng)基中加入能與PP結合而顯色的染色劑,目的菌落周圍出現(xiàn)透明圈的情況。下列說法錯誤的是()A.圖甲、圖乙所用培養(yǎng)基分別為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基,都以PP作為唯一碳源B.圖甲、圖乙所用接種方法分別為稀釋涂布平板法和平板劃線法,都需在酒精燈火焰旁進行C.1g土壤樣品中含有PP分解菌的估算數(shù)目是7.6×1010個,此數(shù)值一般偏小D.可選擇圖乙培養(yǎng)基中D/d比值大的PP分解菌作為目的菌種推廣使用二、非選擇題11.為獲得高效產酸的醋酸菌用于果醋制作,某興趣小組以蘋果皮為材料,進行實驗,實驗流程如下,回答下列相關問題。培養(yǎng)基:米曲汁乙醇碳酸鈣培養(yǎng)基——米曲汁1000mL,CaCO310g,95%乙醇30mL(滅菌后加入)。在該培養(yǎng)基上,醋酸菌菌落周圍會形成透明圈。(1)微生物的培養(yǎng)、分離必須嚴格無菌操作處理,培養(yǎng)基無菌處理的方法是________________,培養(yǎng)皿、錐形瓶的無菌處理方法是______________,上述______________不能進行無菌處理。(2)①過程通常需在________℃進行________(填“靜置”或“振蕩”)培養(yǎng),原因是_______________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)培養(yǎng)一段時間后,培養(yǎng)液的pH______,原因是_____________________________________________________________________________________________。(4)②過程需采用________________接種,應選擇______________________的菌落作為菌種進一步培養(yǎng)。12.營養(yǎng)缺陷型菌株就是在人工誘變或自發(fā)突變后,微生物細胞代謝調節(jié)機制中的某些酶被破壞,使代謝過程中的某些合成反應不能進行的菌株。這種菌株能積累正常菌株不能積累的某些代謝中間產物,為工業(yè)生產提供大量的原料產物。以下是實驗人員利用影印法初檢氨基酸缺陷型菌株的過程。請據(jù)此回答下列問題。(1)圖中基本培養(yǎng)基與完全培養(yǎng)基存在差異的成分是______________。根據(jù)用途分類,圖中基本培養(yǎng)基屬于________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。(2)進行過程②培養(yǎng)前,應先將絲絨布轉印至________(填“基本”或“完全”)培養(yǎng)基上,原因是___________________________________________________________________________________________________________________________。(3)利用影印法培養(yǎng)的優(yōu)點是不同培養(yǎng)基中同種菌株的接種位置相同,所以挑取________(填“菌落A”或“菌落B”)即為所需的氨基酸缺陷型菌株。(4)統(tǒng)計菌落種類和數(shù)量時要每隔24h觀察統(tǒng)計一次,直到各類菌落數(shù)目穩(wěn)定,以防止培養(yǎng)時間不足導致________________,或培養(yǎng)時間太長導致____________________________________________________________________。鑒定菌落種類的重要依據(jù)是________________________________________________________________________________________________________________。三十六微生物的培養(yǎng)技術及應用1.C解析:培養(yǎng)基配制過程要經過稱量→溶化→滅菌→倒平板,滅菌之前需要調節(jié)pH到適宜范圍以利于真菌或細菌的繁殖,A正確;不同微生物培養(yǎng)時對pH的要求往往不同,培養(yǎng)真菌時需將培養(yǎng)基的pH調至酸性,培養(yǎng)細菌時需將pH調至中性或微堿性,B正確;每次使用接種環(huán)前后都要進行灼燒滅菌,灼燒待冷卻后,才能置于菌液中使用,C錯誤;低溫保存可抑制菌株的生長,以免菌株瘋長影響整體效果,D正確。2.B解析:剩菜容易滋生細菌,細菌代謝產生亞硝酸鹽,人體攝入過多亞硝酸鹽不利于健康,A正確;巴氏消毒不能殺死全部微生物,B錯誤;DNA指紋技術的原理是不同人體內的DNA所含的脫氧核苷酸序列不同,C正確;不同植物對礦質元素的吸收具有選擇性,輪種可以恢復及提高土壤的肥力,D正確。3.D解析:配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基需使用高壓蒸汽滅菌法滅菌,即在121℃、100kPa條件下處理15~30min,將培養(yǎng)基徹底滅菌,以避免培養(yǎng)基上的微生物影響實驗結果,A正確;新鮮牛奶應使用巴氏消毒法消毒,為了探究新鮮牛奶合適的消毒溫度,可將等量的新鮮牛奶分別置于60℃、70℃、80℃、90℃恒溫水浴鍋中處理30min,并通過檢測不同溫度處理下的牛奶中微生物的數(shù)量進行比較,B正確;若要統(tǒng)計消毒后的牛奶中微生物的數(shù)量,可用稀釋涂布平板法接種,所以可對處理后的牛奶進行梯度稀釋后,利用涂布法接種平板并在37℃下培養(yǎng)24h,C正確;由于溫度過高會破壞牛奶中的營養(yǎng)成分,所以菌落數(shù)最少的組對應的溫度不一定是最適的消毒溫度,因為還需要考慮牛奶的營養(yǎng)價值不被破壞,D錯誤。4.A解析:配制好的培養(yǎng)基需要采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌,即在121℃、100kPa條件下處理15~30min,A正確;固體培養(yǎng)基沒有做任何處理,所以對菜品中的細菌沒有選擇性,B錯誤;據(jù)題意可知,在固體培養(yǎng)基X上接種后還需進行計數(shù),故只能用稀釋涂布平板法接種而不能用平板劃線法,C錯誤;在一定的培養(yǎng)條件下,不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征,根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征,可以初步區(qū)分出不同種微生物,但不能準確判斷,D錯誤。5.C解析:高壓蒸汽滅菌會破壞脫纖維羊血,添加脫纖維羊血需在高壓蒸汽滅菌后,A錯誤;在平板中加入脫纖維羊血的目的是通過觀察在金黃色葡萄球菌菌落周圍是否出現(xiàn)透明溶血環(huán),從而檢測菌落是否是金黃色葡萄球菌,B錯誤;由于金黃色葡萄球菌具有高度耐鹽性,較高濃度NaCl不影響金黃色葡萄球菌的生長,但是能抑制其他菌的生長,因此,金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中加入較高濃度NaCl溶液有利于對金黃色葡萄球菌的篩選,C正確;可以根據(jù)菌落的特征,如菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色區(qū)分金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌,D錯誤。6.A解析:土壤是土壤微生物的培養(yǎng)基,土壤取樣時不需要在酒精燈火焰旁操作,A錯誤;分離菌株需用固態(tài)的選擇培養(yǎng)基,土壤中的溶磷菌能夠把難溶態(tài)的磷轉化為可被植物直接利用的可溶性磷,而其他微生物不能在此環(huán)境中生長,所以要用含難溶態(tài)磷的固體培養(yǎng)基進行目的菌株的分離,B正確;土壤中的溶磷菌能夠把難溶態(tài)的磷轉化為可被植物直接利用的可溶性磷,說明難溶態(tài)磷的分解可能與溶磷菌分泌的代謝產物有關,C正確;實驗組與對照組可溶性磷含量差值最大說明菌株把難溶態(tài)的磷轉化為可被植物直接利用的可溶性磷的能力較強,適合制成菌肥,D正確。7.B解析:菜籽粕含有35%~45%的蛋白質,麩皮富含纖維素,菜籽粕與麩皮可為微生物提供碳源和氮源,A正確;對培養(yǎng)基滅菌應在接種前,接種后再滅菌,菌種將被全部殺死,B錯誤;據(jù)圖可知,與對照組相比,黑曲霉菌發(fā)酵菜籽粕中單寧含量最低,說明黑曲霉菌對單寧的去除效果最為理想,C正確;對照組為不接種微生物的固體培養(yǎng)基,目的是作為對照,說明微生物去除單寧的作用,D正確。8.D解析:金黃色葡萄球菌是一種耐高鹽的食源性致病微生物,因此7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基從功能角度劃分屬于選擇培養(yǎng)基,A正確;7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)后培養(yǎng)基變渾濁是由于耐高鹽的微生物數(shù)量增多所致,B正確;金黃色葡萄球菌可破壞菌落周圍的紅細胞,產生透明的溶血圈,若最終長出的菌落周圍出現(xiàn)透明的溶血圈,則說明該飲料被金黃色葡萄球菌污染,C正確;因為接種的菌種經7.5%的NaCl肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)過,因此用稀釋涂布平板法也不能對待測飲料中金黃色葡萄球菌進行計數(shù),D錯誤。9.D解析:本實驗是要從土壤樣品中獲得能降解有機磷農藥的微生物,土壤樣品不需要滅菌,如果滅菌樣品中可能就沒有微生物了,A錯誤;該方案中的CNFM只含生長因子、無機鹽和水,不屬于培養(yǎng)基,B錯誤;平板培養(yǎng)的目的是為了篩選和分離微生物,C錯誤;對硫磷濃度越低,說明分解越多,說明降解有機磷農藥的微生物最多,根據(jù)檢測結果,選出對硫磷濃度最低的錐形瓶內的微生物,D正確。10.B解析:圖甲是篩選PP分解菌的過程,培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基,圖乙表示在培養(yǎng)基中加入能與PP結合而顯色的染色劑,鑒別PP分解菌的過程,所以圖乙所用培養(yǎng)基為鑒別培養(yǎng)基,都以PP為唯一碳源,A正確;圖甲、圖乙所用接種方法都為稀釋涂布平板法,都需在酒精燈火焰旁進行,B錯誤;由于平板計數(shù)范圍為30~300,故取7號試管中的菌落數(shù),7號試管的稀釋倍數(shù)為1×108,則1g土壤樣品中含有PP分解菌的估算數(shù)目是[(58+73+97)÷3]÷0.1×108=7.6×1010(個),此數(shù)值一般偏小,因為當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落,C正確;可選擇圖乙培養(yǎng)基中D/d較大的菌株,因為這一指標越大說明單個菌株分解PP的能力越強,所以可作為目的菌種推廣使用,D正確。11.解析:(1)微生物的培養(yǎng)、分離必須嚴格無菌操作處理,培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌法,培養(yǎng)皿、錐形瓶需要保持干燥,一般用干熱滅菌法。以蘋果皮為材料獲得高效產酸的醋酸菌,果皮是菌種的來源,不能進行無菌處理。(2)醋酸菌為好氧菌,生長的適宜溫度為30~35℃,①過程應滿足醋酸菌生長的條件,通常需在30~35℃進行振蕩培養(yǎng),振蕩可增加培養(yǎng)液的溶氧量。(3)培養(yǎng)基中含有乙醇,在氧氣充足時,醋酸菌將乙醇轉變?yōu)榇姿?,所以培養(yǎng)一段時間后,培養(yǎng)液的pH(明顯)下降。(4)圖中過程進行了梯度稀釋,②過程需采用稀釋涂布平板法接種,在米曲汁乙醇碳酸鈣培養(yǎng)基上,醋酸會使碳
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