【分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)中的有效應(yīng)用6000字（論文）】

分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)中的有效應(yīng)用研究目錄TOC\o"1-3"\h\u11693前言 128915第一章文獻(xiàn)綜述 113229§1.1分子生物學(xué)的興起與發(fā)展概況 16736§1.1.1分子生物學(xué)的興起 17331§1.1.2分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展 127364§1.1.3技術(shù)復(fù)雜以及儀器要求過高 222696§1.1.4監(jiān)測管理力度不夠 215669§1.1.5分子生物納米技術(shù) 28110§1.2分子生物學(xué)技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用 215061§1.2.1免疫測定和培養(yǎng)鑒定 32272§1.2.2病原微生物檢驗 319118§1.2.3診斷腫瘤及遺傳疾病 38739§1.2.4分子蛋白組學(xué)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用 48983第二章材料和方法 412400§2.1樣本 49528§2.2主要試劑 418458§2.3主要儀器 55302§2.4實驗方法 59287§2.4.1聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR) 55587§2.4.2采樣量 67968§2.4.3采樣過程中的防污染 627994§2.4.4標(biāo)本的運(yùn)送 630847§2.4.5標(biāo)本驗收、拒收 66409§2.4.6標(biāo)本的預(yù)處理和保存 619563參考文獻(xiàn) 9前言現(xiàn)在我國的科學(xué)技術(shù)在現(xiàn)代化的進(jìn)程中有了很大的發(fā)展，當(dāng)然現(xiàn)代化的進(jìn)程也帶動了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展?，F(xiàn)代分子生物學(xué)的應(yīng)用越來越廣泛，在某種意義上，現(xiàn)代分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)的可持續(xù)發(fā)展中起著無可替代的作用?？傊蚩寺〉痊F(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)對現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響，隨著基因序列的完成，以前沒有解決的問題也得到了解決。進(jìn)入后遺傳學(xué)時代以來，數(shù)學(xué)科學(xué)在生物學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，為生物學(xué)的發(fā)展提供了新的方向，也為分子診斷技術(shù)的應(yīng)用提供了可能性。因此，分子生物學(xué)技術(shù)在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中占有非常重要的地位。加強(qiáng)現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢查中的有效應(yīng)用，對各種疾病的有效診斷和治療具有重要意義。第一章文獻(xiàn)綜述§1.1分子生物學(xué)的興起與發(fā)展概況§1.1.1分子生物學(xué)的興起分子生物學(xué)：是研究核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能的，并從分子水平上表明蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)與核酸之間的相互作用以及它的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理的學(xué)科。從20世紀(jì)50年代以來分子生物學(xué)是生物學(xué)的前沿和生長點(diǎn)，包括蛋白質(zhì)系統(tǒng)、蛋白質(zhì)系統(tǒng)和核酸系統(tǒng)。圖1.11953年沃森、克里克提出DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型標(biāo)志著分子生物學(xué)就此誕生。分子生物學(xué)檢測是分子生物技術(shù)在臨床實驗室診斷中的高級應(yīng)用。它以疾病為中心，以生物標(biāo)志物為新一代檢測手段的臨床診斷技術(shù)，能夠快速檢測并微型化微生物樣本、生物力學(xué)和微生物，是疾病風(fēng)險分析的重要手段，目前在生物實驗中有多種分子生物學(xué)技術(shù)，包括由一組生物固定技術(shù)組成的分子生物傳感器。分子生物傳感器是一種對生物物質(zhì)敏感并能將其濃度轉(zhuǎn)換為電信號進(jìn)行檢測的儀器。它是一個完整的分析系統(tǒng)，由冷凍的生物分子作為檢測元件，由合適的理化傳感器和信號放大器組成，分子生物傳感器可廣泛應(yīng)用在小分子有機(jī)化合物的檢測，為疾病診斷和工作環(huán)境監(jiān)測提供可靠的分析數(shù)據(jù)?！?.1.2分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展分子生物學(xué)的發(fā)展經(jīng)歷了準(zhǔn)備與醞釀建立與發(fā)展和深入發(fā)展三個主要階段，并且隨著臨床分子生物學(xué)檢測技術(shù)的不斷提高，尤其是臨床醫(yī)學(xué)各學(xué)科與分子遺傳學(xué)，分子生物學(xué)和儀器分析學(xué)等，其他學(xué)科不斷的交叉和互相滲透，下面就分子生物學(xué)的發(fā)展不足之處與今后的發(fā)展進(jìn)行探討。§1.1.3技術(shù)復(fù)雜以及儀器要求過高分子生物學(xué)是一門新興的醫(yī)學(xué)傳感技術(shù)，目前分子生物學(xué)傳感技術(shù)的發(fā)展存在著許多需要改進(jìn)的問題，其中分子生物學(xué)傳感技術(shù)過于復(fù)雜。對檢測儀器的質(zhì)量要求也很高，用于檢測的藥物和反應(yīng)容器價格昂貴，這些條件嚴(yán)格制約了分子生物學(xué)的發(fā)展。為了解決這些問題，需要合理的醫(yī)學(xué)研究項目，提高醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)檢測技術(shù)的靈敏度，但在提高醫(yī)學(xué)篩選標(biāo)準(zhǔn)方面還有很多工作需要做，例如：如果種植結(jié)核桿菌，則無需選擇昂貴的培養(yǎng)容器。臨床疾病調(diào)查不應(yīng)過分依賴分子生物學(xué)技術(shù)的臨床證據(jù)，雖然分子生物學(xué)技術(shù)可以提高醫(yī)生的診療效率，但也存在技術(shù)錯誤。因此，應(yīng)結(jié)合臨床調(diào)查得出結(jié)論?！?.1.4監(jiān)測管理力度不夠分子生物學(xué)技術(shù)中存在著許多問題，其中，各部門間的檢驗管理不充分，按照國際醫(yī)學(xué)檢驗規(guī)則，對重要任務(wù)進(jìn)行監(jiān)督管理，醫(yī)院必須盡管分子生物技術(shù)仍然存在許多問題，但發(fā)展速度不容忽視，但隨著技術(shù)的飛速發(fā)展，應(yīng)加強(qiáng)管理。積極推進(jìn)分子生物學(xué)實驗室建設(shè)，建立專門的管理和監(jiān)督機(jī)制，保障分子生物學(xué)臨床試驗的可持續(xù)發(fā)展?！?.1.5分子生物納米技術(shù)在醫(yī)學(xué)實驗室中，大多數(shù)設(shè)施被稱為生物活性物質(zhì)，雖然抗體是最重要和最常見的生物活性物質(zhì)，但將抗原或特異性抗體固定在磁性納米臭氧的表面是納米技術(shù)的基礎(chǔ)，納米技術(shù)可包括熒光材料、放射性同位素、生物活性物質(zhì)等，生物技術(shù)分子納米技術(shù)更方便、更靈敏，與傳統(tǒng)微重力技術(shù)相比，一些締約方將抗體相關(guān)的磁性納米探針用于臨床醫(yī)學(xué)檢查，并與化學(xué)發(fā)光免疫分析有效結(jié)合，這是個好結(jié)果。自動免疫分析能快速有效地檢測1型和2型抗體，可用于形成人的胰島素?！?.2分子生物學(xué)技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用分子生物學(xué)是診斷和治療疾病的重要手段，進(jìn)入21世紀(jì)以來，分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，并被廣泛應(yīng)用于科學(xué)實驗中。藥物的作用機(jī)制和新藥的研發(fā)是從理論到實踐的一大步，分子生物學(xué)是以核酸生物化學(xué)為基礎(chǔ)的研究方法。該技術(shù)的發(fā)展為益生菌篩選、癌癥診斷與評估、遺傳性疾病診斷和免疫系統(tǒng)疾病診斷提供了重要依據(jù)和創(chuàng)新思路?！?.2.1免疫測定和培養(yǎng)鑒定與傳統(tǒng)的免疫分析和培養(yǎng)方法相比，生物芯片技術(shù)采用PCR技術(shù)檢測致病微生物，添加到反應(yīng)管中的特定物質(zhì)同時從PCR中發(fā)現(xiàn)的多種或單一病原體中鑒定出來，結(jié)果的準(zhǔn)確性不受大量死亡細(xì)菌或微生物和混合樣品生長時間的影響。結(jié)果靈敏度和有效性高，可同時檢測出數(shù)百種病原微生物。癌癥和遺傳病已被相應(yīng)疾病的診斷所證實。這兩種疾病基本上都有一定程度的遺傳缺陷。它們的精確診斷是建立在遺傳和人類相互作用的基礎(chǔ)上的。腫瘤抑制基因可以通過微陣列進(jìn)行識別，腫瘤特異性標(biāo)記物可以通過生物傳感器進(jìn)行有效的診斷§1.2.2病原微生物檢驗分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)院臨床微生物學(xué)檢查中的應(yīng)用可用于液體中導(dǎo)體蛋白、小分子蛋白和微量元素的檢測。應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)可以檢測物質(zhì)，醫(yī)院健康，并能消滅大量活菌，具有很大的優(yōu)勢。從技術(shù)上講，它不影響液體中的其他微生物，可確定正確的治療原因，提高分子生物學(xué)在醫(yī)院微生物學(xué)研究中的應(yīng)用。PCR可提高臨床病理檢測的有效性，并可用于檢測液體物質(zhì)、微量蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)、小分子物質(zhì)等。作為一種健康的分子醫(yī)院生物技術(shù)，分子生物技術(shù)可用于大量細(xì)菌，其最大的技術(shù)優(yōu)勢是不受其他微生物的干擾。分子生物技術(shù)可以提高疾病的檢測和診斷效率，生物微電路和pcr技術(shù)比傳統(tǒng)的免疫和文化檢測更敏感。病原微生物多為勞動密集型、規(guī)模大；生物芯片在醫(yī)學(xué)檢測中的應(yīng)用顯示出高效、靈敏的特點(diǎn)。這使得同時發(fā)現(xiàn)數(shù)百種致病微生物成為可能，并為快速發(fā)現(xiàn)基因提供了有效的臨床建議.§1.2.3診斷腫瘤及遺傳疾病在腫瘤和遺傳疾病的臨床診斷中，我們使用分子生物學(xué)技術(shù)時，基因片段分析是分子科學(xué)的一個研究領(lǐng)域，合理利用分子生物學(xué)技術(shù)，就能迅速發(fā)現(xiàn)有缺陷的基因短篇。利用基因芯片鑒定靶基因P53是否有抑制癌癥的突變，以及是否有生物傳感器，細(xì)胞儀器等技術(shù)可以有效地識別腫瘤的象征物，分子生物技術(shù)可以識別遺傳疾病家庭基因中的特異性多集成體，單鏈聚合、DNA限制性短篇長度分析、熒光原位雜交染色體分析、酶微排列和控制技術(shù)。需要注意的是，DNA結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，尤其是雙螺旋結(jié)構(gòu)。免疫系統(tǒng)疾病診斷是利用分子生物技術(shù)對免疫系統(tǒng)疾病進(jìn)行識別和診斷，可以快速判斷免疫系統(tǒng)疾病中是否存在基因缺陷，從而研究人類免疫系統(tǒng)短基因的自然狀態(tài)。比如抗體、免疫分析、磁性修飾材料檢測、同位素、熒光、酶固化、特異性抗原、磁性納米粒子的納米生物技術(shù)檢測出HIV；1型抗體、2型抗體的自動檢測，免疫系統(tǒng)疾病有幾種類型，所以要用分子微生物學(xué)技術(shù)來識別其中一些類型的疾病。§1.2.4分子蛋白組學(xué)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用越來越多的病原菌和成功的人類基因組陣列將蛋白質(zhì)組織學(xué)的研究推向了新的高度，同時將遺傳因子排列在研究開發(fā)過程中更準(zhǔn)確地進(jìn)行了編碼，人們的興趣主要集中在蛋白質(zhì)組織學(xué)的研究上。制定了比較先進(jìn)的早期診斷和檢查指標(biāo)，為疾病的發(fā)展和藥物的應(yīng)用提供了研究目標(biāo)。現(xiàn)在的癌基因在分子水平上可以盡量說明疾病的發(fā)展，但在發(fā)病、早期診斷、治療方面卻不足。特別是蛋白質(zhì)組織學(xué)法的研究比起其他的研究方法更適合人類的生活，能夠檢測、診斷、發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物，盡快進(jìn)行目標(biāo)治療，指導(dǎo)疾病的診斷和治療。通過各種蛋白質(zhì)組織學(xué)研究方法獲得的數(shù)據(jù)可以解釋與不同條件下蛋白質(zhì)的變化對應(yīng)的變化水平，但是蛋白質(zhì)直接檢測技術(shù)在臨床上是不可缺少的。研究人員要求根據(jù)病情進(jìn)行蛋白質(zhì)反應(yīng)。通過分析不同病害中的化合物和溶解狀態(tài)，獲得特定的蛋白質(zhì)水平和細(xì)胞活性?，F(xiàn)在正在研究最有目標(biāo)性的絡(luò)合物，研究其功能蛋白質(zhì)組織學(xué)。材料和方法§2.1樣本在臨床PCR中，血清（血漿）、血液、外周血單核細(xì)胞、痰、棉片、膿液等體液（胸腔積液、腹水、腦脊液、尿液等）、乳液、運(yùn)輸和保存對檢測結(jié)果有影響。因此，為了驗證試驗結(jié)果的正確性，必須制定收集、運(yùn)輸和保存臨床樣品的標(biāo)準(zhǔn)程序?！?.2主要試劑衛(wèi)生棉條和其他收集的材料必須是一次性的，運(yùn)輸容器還必須是密封的一次性消毒器。材料中使用的抗凝劑和相關(guān)試劑不應(yīng)妨礙基因的擴(kuò)大和測試。棉拭子

在檢測性病病原體的PCR程序中，臨床樣本通常是棉絮，可將棉絮棒置于室溫下適量的生理鹽水溶液中，完全搖勻洗凈，然后在室溫下放置5至10分鐘。立即離心殘余物，隨后的沉淀可用于提取DNA。如果不立即使用膠囊提取核酸，則應(yīng)將其儲存于-70℃下。30%儲備膠溶液:丙烯酰胺(Acr)29.0g，亞甲雙丙烯酰胺(Bis)1.0g,混勻后加ddH2O，370C溶解,定容至100ml,棕色瓶存于室溫。§2.3主要儀器冷凍離心機(jī)。低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中必不可少的手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術(shù)，因此低溫冷凍離心機(jī)成為分子生物學(xué)研究中必備的重要儀器。在國內(nèi)，有多個廠家生產(chǎn)冷凍離心機(jī)，本實驗室的高速冷凍離心機(jī)為GL-20G-II型(上海安亭)，落地式。配有角式轉(zhuǎn)頭:6X50ml、12X10ml和12X1.5ml。極限轉(zhuǎn)速20000rpm?！?.4實驗方法§2.4.1聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)反應(yīng)總體積為50μ,其中含有:模板DNA0.5μlPCR緩沖液(不含MgCl2)5μl10xMgCl2溶液5μldNTP(2.5mmol/L)0.5μl引物1(50umol/L)0.5μl引物2(50umol/L)0.5μlTaqDNA聚合酶0.5μl無菌去離子水加至50μl上層用25μl液體石蠟油覆蓋。循環(huán)參數(shù)為:94°C變性10min94。C變性1min56。C退火1min72。C延伸2min共30個循取環(huán)，PCR結(jié)束后，取2μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外檢測儀上觀察并拍照。§2.4.2采樣量樣本的類型和數(shù)量應(yīng)根據(jù)已經(jīng)識別出的引起疾病的微生物來確定，一般要根據(jù)引起充足數(shù)量疾病的微生物樣本來確定，用于提取核酸和測量此后的增長。在病原體含量低的樣品中，樣品的尺寸是測量的關(guān)鍵。例如，PCR用于血液檢查，血液中的特異性抗原或抗體一般含有較少的病原體，因此需要更多的樣本。§2.4.3采樣過程中的防污染最好使用一次性材料，而不是直接治療；采集時應(yīng)特別注意防止污染，混入作業(yè)人員皮膚細(xì)胞、痰盂等；如果使用玻璃器皿，則必須在0.1%高壓水下處理，以使核糖核酸酶能夠存活和降解，這可以抑制聚合酶鏈反應(yīng)?！?.4.4標(biāo)本的運(yùn)送一旦收集了所有的PCR樣品，就應(yīng)暫時儲存在2-8℃之下，然后再送往實驗室。應(yīng)盡快將其送到實驗室。在無菌條件下收集的DNA靶標(biāo)樣品應(yīng)在室溫下交付實驗室8小時；如果核酸是RNA，它可以在室溫下運(yùn)輸10分鐘。如果需要很長的時間，它應(yīng)該在冰上運(yùn)輸。§2.4.5標(biāo)本驗收、拒收采集的樣本必須從原容器中采集，不能與生化、免疫學(xué)等其他樣本混用，因為它們之間感染的可能性很高。應(yīng)拒收溶血或高脂血癥等血樣。對于沙眼衣原體的擴(kuò)張，應(yīng)在顯微鏡下觀察表皮，因為病原體是在上皮細(xì)胞中形成的，如果下一層上皮沒有或很少，如果在顯微鏡下觀察到的白細(xì)胞很少，說明沒有收集到合格標(biāo)本?！?.4.6標(biāo)本的預(yù)處理和保存血清(漿)標(biāo)本如果血清樣品用于DNA提取和檢測，請遵循血清樣本的一般處理程序。如果EDTA更適合RNA捕獲檢測，則嚴(yán)禁使用海洛因。因為它抑制了PCR的增加，在核酸提取過程中很難完全清除，防止凝固后1h內(nèi)分離血清，4h內(nèi)分離血漿，放入1.5ml無菌離心管保存。外周血單個核細(xì)胞外周血單個核細(xì)胞可以在抗凝劑中產(chǎn)生。主要有兩種方法：一種是用淋巴細(xì)胞分離液分離產(chǎn)生外周血單個核細(xì)胞，另一種是用紅細(xì)胞溶解液分解全血中的紅細(xì)胞，用生理鹽水反復(fù)洗滌可獲得單核細(xì)胞。痰屬于分泌物，臨床上經(jīng)常使用DNA檢測結(jié)核，痰中含有大量粘稠雜質(zhì)，DNA提取需要初步處理在室溫下用NaOH或變性劑液化約三十分鐘，如果液體樣品不能立即用于DNA提取，可以保存在-70℃下。膿液膿液如用于分枝桿菌測定的標(biāo)本，黏液可采用痰標(biāo)本的處理方法來處理，先液化，再離心取沉淀提取DNA;水樣的膿液則直接離心沉淀用生理鹽水洗2-3次后，即可用于DNA提取。3.結(jié)論也就是說，分子生物學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)化、質(zhì)量管理等領(lǐng)域。由衛(wèi)生部開發(fā)，對分子生物學(xué)的發(fā)展起到了重要作用。交叉污染的醫(yī)療檢查在一定程度上得到了解決。分子生物學(xué)的應(yīng)用主要與完全自動化的醫(yī)療系統(tǒng)的發(fā)展有關(guān)?？捎行幚砭勐纫蚁┪廴締栴}的檢查。此外，分子生物學(xué)技術(shù)。例如，由于自擴(kuò)增系統(tǒng)等技術(shù)的發(fā)展，得到了人們的認(rèn)可。分子生物技術(shù)的廣泛應(yīng)用和醫(yī)學(xué)實驗室的標(biāo)準(zhǔn)化大大減少了醫(yī)學(xué)檢驗過程中交叉污染的相關(guān)問題，使得醫(yī)學(xué)檢驗難度大，可以提高整體效率。分子生物學(xué)檢驗技術(shù)的臨床應(yīng)用，主要指應(yīng)用分子生物學(xué)檢驗技術(shù)對人類疾病進(jìn)行診斷和研究的過程。包括病原微生物的診斷、人類基因組相關(guān)疾病的診斷惡性腫瘤個體化治療靶點(diǎn)的選擇以及在移植配型和個體識別方面的應(yīng)用。分子生物學(xué)檢驗技術(shù)通過檢測病原微生物的特征性基因位點(diǎn)以及患者自身基因結(jié)構(gòu)的變化或表達(dá)異常的存在，獲得疾病的診斷依據(jù)，完成疾病的分子診斷。隨著分子生物學(xué)檢驗技術(shù)的飛速發(fā)展,分子診斷、基因診斷正日漸成為臨床上快速、準(zhǔn)確的進(jìn)行疾病診斷的重要途徑和手段。參考文獻(xiàn)[1]王海英.分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用進(jìn)展[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2011,17(06):16.[2]李鵬.現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,2007,(03):161.[3]楊振華.為21世紀(jì)中國檢驗醫(yī)學(xué)事業(yè)崛起而奮斗——寫于本刊更名之際[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2000,(01):4.[4]姚均,何忠平,張福杰,等.核酸序列擴(kuò)增早期診斷人類免疫缺陷病毒感染[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2002,(06):42.[5]胡頌恩.分子生物學(xué)與檢驗技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2018.[6]武衛(wèi)杰,冷遠(yuǎn)逵,沈夢飛等.基于功能納米材料的液相生物芯片檢測技術(shù)[J].化學(xué)